鄭州市中原區漢族育齡女性MTHFR和MTRR基因多態性

郭婷婷，劉 芳，歸 婧，楊小風

(鄭州大學附屬鄭州中心醫院 婦產科，河南 鄭州 450000)

中國是出生缺陷高發國家，每年約有90萬缺陷兒出生。研究證實孕婦機體葉酸水平不足是導致出生缺陷的主要原因，葉酸缺乏一般由補充不足和利用能力差兩方面因素引起;遺傳因素會影響葉酸的利用能力，如葉酸相關代謝基因功能異常，即便按正常量補充葉酸，也會造成機體葉酸水平不足。個體遺傳因素不同會導致機體對葉酸代謝能力的差異，利用基因檢測技術篩查出葉酸利用能力差的高風險人群，依據檢測結果合理補充葉酸，可大大降低神經管缺陷的發病風險，另外也可降低孕婦貧血、妊娠高血壓、早期流產、早產等的發生風險[1-3]。本研究從影響葉酸代謝相關的基因(MTHFR、MTRR)多態性檢測出發，分析育齡女性葉酸代謝能力的強弱，從而為孕期葉酸補充指導提供遺傳學依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年12月至2018年10月來鄭州大學附屬鄭州中心醫院婦產科門診進行孕前或孕期葉酸代謝能力檢測的育齡女性，年齡17～48歲，平均年齡(28.6±3.9)歲。所有如選者均鄭州市中原區的漢族人，無血緣關系和異族通婚史。在簽署孕前優生檢測知情同意書后，采集靜脈血進行DNA 抽提，共獲得有效樣本2 652例。

1.2 方法

采集受檢測女性的外周血，抽提各樣本中DNA。采用Taqman-MGB方法測定各基因位點的SNP分型，相關儀器和試劑均購買自美國AB公司。分別對MTHFRC667T、A1298C、MTRRA66G這3個位點進行熒光定量PCR檢測。每個PCR反應體系共計為10 μL，其中加入3.5 μL去離子水，1 μL濃度為20 ng/μL的DNA模板，0.5 μL 20×Taqman-MGB 探針，5 μL 2×Taqman Universal Master Mix。反應條件：95 ℃預變性10 min，92 ℃變性15 s，60 ℃延伸1 min，20個循環;89 ℃變性15 s，60 ℃延伸90 s，30個循環。反應結束后，把各反應孔放置于ABI7900 型熒光定量PCR儀上，分別讀取各反應孔的終點熒光，然后利用分析軟件檢測3個位點中的基因分型。

1.3 統計學分析

對本研究人群樣本進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，然后使用SPSS19.0統計軟件進行統計學處理，并采用擬合優度χ2檢驗。

2 結果

樣本人群中MTHFR、MTRR的基因頻數與基因頻率統計分析，統計全部育齡女性檢測的MTHFRC667T、MTHFRA1298C、MTRRA66G位點，根據年齡將每個位點的基因型、基因頻率分為兩組，MTHFRC667T兩年齡組均以純合突變CT型為主，但30歲以下育齡女性MTHFR野生型所占比例更高 (表1)。MTHFRA1298C、MTRRA66G位點中兩年齡組均以野生型為主，但30歲以上育齡女性野生型所占比例更高 (表2，3)。

3 討論

中國是出生缺陷高發的國家，葉酸代謝障礙與胎兒神經管畸形、先天性心臟病、習慣性流產及唐氏綜合征等多種疾病密切相關。盡管現在國家采取了免費發放葉酸藥物的福利措施，但仍有部分婦女即便補充了葉酸，胎兒仍會發生神經管缺陷。主要原因是葉酸代謝高風險人群對葉酸的利用能力低，常規劑量的葉酸補充滿足不了需求。

表1 鄭州市育齡女性MTHFR C677T位點基因型、等位基因頻數與頻率分布

表2 鄭州市育齡女性MTHFR A1298C 位點基因型、等位基因頻數與頻率分布

表3 鄭州市育齡女性MTRR A66G位點基因型、等位基因頻數與頻率分布

中國地域遼闊，各地飲食習慣、自然環境等差別較大，各民族和人群分布情況復雜，MTHFRC667T、MTHFRA1298C、MTRRA66G 3個位點基因型頻率分布有很大地域差異，本研究統計了尚志、遼源、吉林、烏魯木齊、天津、江蘇等11個地區，并與本地區數據進行比較，鄭州市中原區育齡女性MTHFR C667T位點基因型與尚志、遼源、吉林、烏魯木齊、天津、江蘇、張家港、眉山、雅安、佛山、珠海等地不一致；MTHFRA1298C位點基因型，鄭州市中原區與烏魯木齊、天津、張家港、眉山、雅安、珠海等地不一致，與尚志、遼源、吉林、鄭州本地、江蘇、佛山等地一致；MTRR位點基因型，鄭州市中原區與烏魯木齊、張家港、珠海等地不一致，與尚志、遼源、吉林、天津、鄭州、江蘇、眉山、雅安、佛山等地一致。表明本地區MTHFRC667T多態性分布具有明顯地域特征。MTHFR是葉酸代謝通路的關鍵酶之一，C677T位點突變是中國人群中最常見且研究最多的位點，C突變為T使得丙氨酸被纈氨酸代替，從而引起該酶活性的改變，其中雜合型酶活性降至65%，純合型降至30%，增加了出生缺陷的發生，也增加了孕期可能發生習慣性流產、妊娠期高血壓等疾病的風險。研究表明，與CC型野生型相比，攜帶TT基因型是孕婦生育神經管畸形患兒、先天性心臟病患兒的重要危險因素。

因此，對育齡女性進行葉酸代謝能力的遺傳基因檢測，篩選出葉酸代謝能力異常的高危人群，對不同基因型的育齡婦女制定個體化的葉酸增補方案是未來臨床發展的必然趨勢。根據本研究結果，建議育齡女性進行MTHFR、MTRR位點基因多態性檢測，并結合孕產史、家族史、飲食結構等綜合評估葉酸代謝能力，給予合理的葉酸增補方案，對葉酸代謝障礙的高危孕婦給予重點關注。本文對鄭州市中原區MTHFR、MTRR基因多態性的研究有助于制定更合理的育齡女性葉酸增補方案，對突變基因型的婦女進行早期干預，從一級預防的水平減少出生缺陷，減少孕期疾病的發生。