重組干擾素聯合抗生素對宮頸上皮內瘤變LEEP術后HPV-DNA負荷量及Caspase-3、survivin表達的影響

崔開穎，朱根海，楊舒盈，陳春英，洪瀾，吳夢瓊

宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宮頸癌的癌前病變，可反映宮頸癌發生、發展的連續過程。CIN發生與人乳頭狀瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染密切相關，研究發現HPV高負荷可作為CIN進展的短期指標[1]。目前，宮頸電環切除術(loop electrosurgical excision procedure，LEEP)已成為治療CIN的重要手段，雖能有效清除HPV病毒感染，但仍有部分患者存在病灶殘留問題，嚴重影響遠期療效[2]。因此，CIN患者LEEP術后應聯合使用其他藥物治療，以提高臨床療效。LEEP術后及時口服抗生素頭孢拉定膠囊，可有效維持陰道微生態平衡，發揮抗感染作用[3]；而術后重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊陰道給藥，可使病變部位組織、細胞產生抗病毒蛋白，發揮抗病毒、免疫調節等作用[4]。此外，天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine-containing aspartate-specific proteases 3，Caspase-3)、生存素(survivin)與宮頸病變發生、發展密切相關。鑒于此，現觀察CIN患者LEEP術后聯合使用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和頭孢拉定膠囊對HPV-DNA負荷量及Caspase-3、survivin表達的影響，并與LEEP術后單獨使用頭孢拉定膠囊及單獨應用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊的效果進行對比分析，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年10月—2018年10月海南省人民醫院婦科收治的CIN患者180例作為研究對象，CIN Ⅰ、CIN Ⅱ級患者各90例。按照隨機數字表法將CIN Ⅰ級患者分為CIN ⅠA組、CIN ⅠB組、CIN ⅠC組，CIN Ⅱ級患者分為CIN ⅡA組、CIN Ⅱ B組、CIN Ⅱ C組，各30例。各組間臨床資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 選擇標準 (1)納入標準：①經宮頸活檢確診為CIN，且符合CIN Ⅰ和CIN Ⅱ相關診斷標準[5]的患者；②高危型HPV-DNA檢測顯示陽性者；③臨床資料齊全者；④自愿接受LEEP手術治療，且入院前未接受其他相關治療。(2)排除標準：①近期月經失調者；②妊娠期或哺乳期女性；③合并滴蟲、支原體等其他生殖系統感染者；④對頭孢拉定膠囊或重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊過敏者；⑤存在凝血障礙者。

1.3 治療方法 CIN患者于月經干凈后3～7 d接受LEEP治療，均由同一組醫師使用韓國UM-150A高頻電刀進行操作。患者取膀胱截石位，常規消毒、麻醉，以碘試驗確定切除范圍，切除深度為1.5～2.5 cm，電凝止血，并使用明膠海綿填塞宮頸創面，術后24 h取出。CIN ⅠA組及CIN ⅡA組術后均口服頭孢拉定膠囊(山東魯抗醫藥股份有限公司生產)0.5 g/次，3次/d，連續治療7 d。CIN ⅠB組及CIN ⅡB組術后均給予重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊(上海華新生物高技術有限公司生產，規格：每粒含α-2b干擾素80萬U)1粒每晚睡前給藥(于LEEP術后15 d開始)，置于陰道穹窿處，避開月經期連續用藥3個月，療程結束后再隨訪3個月。CIN ⅠC組及CIN ⅡC組給予口服頭孢拉定膠囊聯合重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊陰道給藥，各藥物用藥方法同上。

1.4 觀察指標與方法

1.4.1 臨床療效評價[6]：術后6個月陰道鏡檢查宮頸光滑，未發現CIN病變存在，即為治愈；陰道鏡檢查仍有CIN病變存在，即為病變持續或殘存。

1.4.2 HPV-DNA負荷量檢測：CIN患者均于術前及術后6個月使用宮頸管刷采集宮頸脫落細胞，并用第二代雜交捕獲(HCⅡ)法檢測HPV-DNA含量。根據相對光單位長度(RLU)判斷有無HPV-DNA存在，并設立陽性對照(CO)，以RLU/CO表示HPV-DNA負荷量，RLU/CO≥1為陽性。

1.4.3 HPV轉陰率計算：以RLU/CO<1作為轉陰標準，記錄轉陰例數，計算轉陰率。

1.4.4 宮頸組織中Caspase-3蛋白、survivin蛋白陽性率測定：取宮頸活檢組織，采用免疫組織化學SP法檢測宮頸組織中Caspase-3蛋白、survivin蛋白表達，兔抗人Caspase-3多克隆抗體、兔抗人survivin蛋白多克隆抗體均購自上海通蔚生物科技有限公司。染色結果判斷，每例標本在高倍鏡(×400)下隨機選取5個視野，計算每個視野內陽性細胞構成比，取平均值。無陽性細胞，即為陰性(-)；陽性細胞構成比<25%，即為弱陽性(+)；25%≤陽性細胞≤50%，即為中陽性(++)；陽性細胞>50%，即為強陽性(+++)。

2 結 果

2.1 各組臨床療效比較 CIN ⅠC組患者治愈率明顯高于CIN ⅠA組與CIN ⅠB組(P<0.05)，病變持續或殘存率顯著低于CIN ⅠA組與CIN ⅠB組(P<0.05)，CIN ⅠA組與CIN ⅠB組相比，差異無統計學意義(P>0.05)；CIN ⅡC組患者治愈率顯著高于CIN ⅡA組與CIN ⅡB組(P<0.05)，病變持續或殘存率明顯低于CIN ⅡA組與CIN ⅡB組(P<0.05)，CIN ⅡA組與CIN ⅡB組相比，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 各組CIN患者臨床療效比較 [例(%)]

2.2 各組HPV-DNA負荷量比較 術前，CIN Ⅱ級各組患者HPV-DNA負荷量高于CIN Ⅰ級各組患者，差異均有統計學意義(P<0.01)；術后6個月各組患者HPV-DNA負荷量均顯著少于術前，且C組明顯少于A組與B組(P<0.05)，A組與B組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表3。

2.3 各組HPV轉陰率比較 術后6個月CIN ⅠC組患者HPV轉陰率93.3%(28/30)顯著高于CIN ⅠA組73.3%(22/30)與CIN ⅠB組70.0%(21/30)(χ2=6.634，P=0.036)；CIN ⅡC組患者HPV轉陰率83.3%(25/30)明顯高于CIN ⅡA組60.0%(18/30)與CIN ⅡB組56.7%(17/30)(χ2=6.104，P=0.047)；CIN Ⅰ、Ⅱ級A組與B組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.4 各組宮頸組織中Caspase-3蛋白及survivin蛋白陽性率比較 術前各組患者Caspase-3蛋白及survivin蛋白陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)；術后6個月CIN Ⅰ、Ⅱ級各組患者Caspase-3蛋白及survivin蛋白陽性率均明顯低于術前，且C組顯著低于A組與B組(P<0.05)；A組與B組比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表1 各組CIN患者臨床資料比較

3 討 論

CIN到宮頸癌是一個連續發展的過程，在此癌變過程中HPV持續感染起決定性作用。HPV是一種雙鏈DNA病毒，研究發現HPV-DNA負荷量與宮頸病變嚴重程度相關，HPV-DNA負荷量越高，進展為宮頸癌的風險越高，因此采取措施降低HPV-DNA負荷具有重要意義[7]。LEEP是目前CIN常用的治療手段，具有創傷小、操作簡便等優勢，雖可有效降低HPV-DNA負荷量，但不能徹底清除HPV病毒，宮頸中殘留病變是導致復發的重要原因，甚至可能進一步發展為宮頸癌。因此，CIN患者LEEP術后輔以其他治療顯得特別重要。

因LEEP術后創面有大量的細胞液滲出，可為細菌、真菌的生長提供條件，所以術后進行抗生素治療非常關鍵[8]。LEEP術后使用抗生素可顯著減少創面感染，頭孢拉定膠囊是臨床較為常用的抗生素，其主要應用于敏感菌所導致的肺炎、支氣管炎等呼吸道感染和泌尿生殖道感染及皮膚軟組織感染。重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊具有廣譜抗病毒作用，可通過與干擾素受體特異性結合，阻止病毒蛋白質的合成和復制，起到抑制HPV病毒感染的作用[9]。重組人干擾素α-2b還具有多重免疫調節作用，通過增強自然殺傷細胞對病毒的殺傷活性，促進機體免疫自穩功能，阻止病毒、真菌等微生物侵害[10]。此外，重組人干擾素α-2b還能調節性激素分泌，加快促進創面愈合[11]。本研究中，CIN ⅠC組患者治愈率遠高于CIN ⅠA組、ⅠB組，病變持續或殘存率遠低于CIN ⅠA組、ⅠB組，CIN ⅡC組治愈率遠高于CIN ⅡA組、ⅡB組，病變持續或殘存率遠低于CIN ⅡA組、ⅡB組，提示CIN患者LEEP術后聯合使用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊和頭孢拉定膠囊臨床效果好。孫桂霞等[12]報道，CIN患者LEEP術后聯合使用化濕解毒湯和重組人干擾素α-2b凝膠治療高危型HPV患者病毒載量明顯少于單獨使用重組人干擾素α-2b凝膠患者，且術后6個月高危型HPV轉陰率顯著高于單獨使用重組人干擾素α-2b凝膠。本研究發現LEEP術后6個月各組患者HPV-DNA負荷量均遠少于術前，且C組遠少于A組、B組。CIN ⅠC組HPV轉陰率遠高于CIN ⅠA、ⅠB組，CIN ⅡC組HPV轉陰率遠高于CIN ⅡA、ⅡB組，與孫桂霞等[12]報道相似，提示重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊聯合頭孢拉定膠囊可有效減少CIN患者LEEP術后HPV-DNA負荷量，促進HPV轉陰。

Caspase-3是凋亡相關因子，可誘導腫瘤細胞凋亡，參與宮頸病變發生、發展過程[13]。而survivin是一種凋亡抑制蛋白，可通過與Caspase-3結合而導致腫瘤細胞增殖，也可通過調節細胞周期蛋白依賴性激酶4(CDK4)水平，影響Fas介導的細胞凋亡[14]。董晗等[15]研究發現，survivin蛋白在宮頸組織中陽性率顯著升高，survivin蛋白陽性率升高可能會增加宮頸鱗癌發生風險。本研究結果發現，LEEP術后6個月各組患者宮頸組織中Caspase-3、survivin蛋白陽性率均遠低于術前，且C組遠低于A組、B組，與董晗等[15]研究結果類似，提示重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊的使用能明顯降低CIN患者LEEP術后Caspase-3、survivin蛋白陽性率。

表3 各組CIN患者術前及術后6個月HPV-DNA負荷量比較

表4 各組CIN患者宮頸組織中Caspase-3蛋白及survivin蛋白陽性率比較 [例(%)]

綜上所述，采用重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊聯合頭孢拉定膠囊干預CIN行LEEP術后患者，可明顯減少HPV-DNA負荷量，有增加HPV轉陰率，降低Caspase-3、survivin蛋白陽性率，從而預防CIN患者發展為宮頸癌。本研究所選樣本量較少，且未觀察重組人干擾素α-2b陰道泡騰膠囊聯合頭孢拉定膠囊對CIN患者LEEP術后的遠期效果，下一步應增加樣本量繼續觀察遠期療效。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

崔開穎：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；朱根海：提出研究思路，分析試驗數據，論文審核；楊舒盈，陳春英：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改；洪瀾：進行統計學分析；吳夢瓊：課題設計，論文撰寫