肝、 肝癌及肝纖維細胞的熒光光譜及其熒光飽和強度分析

胡 悅， 付 蕓， 李欣陽， 李永亮

長春理工大學光電工程學院， 吉林 長春 130022

引 言

肝癌始發于肝部細胞的癌變， 是死亡率最高的惡性腫瘤之一[1]。 肝癌早期癥狀不明顯， 常會發生貽誤病機的情況。 肝纖維化最早形成是因為肝臟發生炎癥而受損， 當肝臟炎癥逐漸加劇， 肝纖維化程度增加形成的肝臟瘢痕組織積聚時， 將會大大提高肝癌的發生概率。 肝纖維化因其引發原因復雜， 暫無明確檢測方式。 熒光光譜技術已經應用在多種疾病及腫瘤檢測過程中。 熒光光譜技術由于其準確性高， 穩定性強， 且方便易測等優勢[2]， 已經廣泛應用于醫學檢測領域。 細胞病變過程會產生不同代謝產物， 肝纖維及肝癌細胞內光敏物質受到激發后， 產生不同譜線形狀或強度的熒光光譜， 由此分析肝纖維及肝癌細胞內部代謝物質的變化， 這是細胞自體熒光光譜用于生命醫學領域的理論基礎[3]。 本研究對比肝纖維及兩種肝癌細胞的熒光光譜與正常肝細胞的光譜差異， 并結合高斯多峰擬合、 流式細胞儀分析以及非線性擬合分析， 對比四種細胞研究了熒光飽和趨勢與細胞直徑的關系。 目的在于， 為實現肝癌及肝纖維早期篩查工作提供光譜學依據。

1 實驗部分

1.1 儀器

熒光光譜儀選用FL6500測量細胞懸浮液， 狹縫的光譜帶寬為10.0 nm， 激發波長488 nm， 發射波長530～750 nm， 激發波長間隔1 nm， 平均時間0.1 s， 掃描速度600 nm·min-1。 比色皿規格選擇0.9 mL， 每次檢測后用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)清洗去除比色皿內殘余樣液。 流式細胞儀選擇BD Accuri C6型號， 激發光源488 nm， 通道選擇FSC-H， SSC-H。……