液液萃取-GFAAS法測定生物樣品中的Cu(Ⅰ)

張 源， 吳 鵬， 李 慧， 羅紅軍， 羅文鴻， 林哲絢

汕頭大學醫學院生物分析實驗室， 廣東 汕頭 515041

引 言

銅離子是生物體不可缺少的微量元素。 銅離子參與生物體一些重要的生理過程， 如細胞呼吸、 神經遞質的傳遞、 抗氧化應激和鐵離子的攝取[1]。 人體許多疾病與體內銅離子失衡有關， 如糖尿病、 心血管病[1]、 瘋牛病[2]、 AD病[3]和癌癥[4]等。 神經退行性疾病由人體喪失銅藍蛋白的生物活性造成[5]， 有可能與Cu(Ⅰ)的毒性有關[6]。 腦血栓病人血清小分子蛋白結合Cu(Ⅱ)含量發生變化， 同樣會降低血清銅藍蛋白活性[7]。 在生物體內， 銅以Cu(Ⅰ)或Cu(Ⅱ)和酶、 蛋白質分子以及一些生物小分子如氨基酸絡合， 通過兩個形態之間的轉換而得以進行生物化學反應[8]。 當細胞內銅濃度過高時, Cu(Ⅰ)和Cu(Ⅱ)之間的氧化還原反應能催化產生毒性的羥自由基， 損傷脂肪、 蛋白質、 DNA等生物大分子[9]。 因此， 測定生物體系中的Cu(Ⅰ)或Cu(Ⅱ)， 可以定量了解生物體內銅離子價態的變化， 對研究銅離子形態失衡有著重要的生理意義。

適宜pH條件下Cu(Ⅱ)與1,10-菲羅啉反應形成的Cu(Ⅱ)配合物在光照條件下還原成Cu(Ⅰ)配合物， 可用分光光度法測定試樣中的Cu(Ⅰ)。 在堿性條件下， 1,10-菲羅啉與Cu(Ⅰ)形成的配合物在428 nm處有光吸收， 用三乙醇胺和亞硫酸鈉聯合保護Cu(Ⅰ)不被氧化， 可在混有Cu(Ⅱ)情況下直接測定Cu(Ⅰ)[10]。 含有Cu(Ⅰ)和Cu(Ⅱ)離子的樣品與1.5 mmol·L-12-喹啉甲酸鈉鹽于pH 8.7混和后， 用毛細管電泳將兩者分離后由紫外檢測器可分別測定兩者的濃度[11]。 在這些方法文獻中, 測定Cu(Ⅰ)時大多集中在無機樣品中， 且由于這些方法檢測限高， 靈敏度低， 樣品基體不復雜， 通常不適合測定生物樣品中的痕量Cu(Ⅰ)濃度。……