胰島素樣生長因子ⅡmRNA 結合蛋白3 與膀胱癌相關蛋白BCA7 在膀胱癌中的表達及與患者臨床特征和預后的關系

程鈺，盧柳，程肇平

安康市中心醫院病理科，陜西 安康7250000

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，好發于 膀胱黏膜[1]。相關統計數據顯示，膀胱癌發病率居西方國家位居第二，僅次于前列腺癌；中國膀胱癌發病率為6.61/10 萬，居全部惡性腫瘤發病率的第九位。近年來，膀胱癌的發病率不斷上升，且隨著年齡增長而升高，50～70 歲為高發年齡，發病人群男性多于女性，隨著吸煙人數的不斷增多，每年全球膀胱癌新發例數約35 萬，嚴重威脅患者的生命健康[2-3]。研究表明，新發膀胱癌患者中，尿路上皮癌所占比例高達90%，非肌層浸潤性占70%～80%，肌層浸潤性占20%～30%，隨時間推移，部分非肌層浸潤性膀胱癌患者會發展為肌層浸潤性膀胱癌或復發，50%的肌層浸潤性膀胱癌患者術后甚至出現腫瘤細胞遠處轉移[4-5]。膀胱癌患者預后呈多變和無法預測的特點，臨床尋求有效且準確預測預后的腫瘤特異性標志物尤為重要。經生物學基因檢測發現，胰島素樣生長因子ⅡmRNA 結合蛋白3（insulin-like growth factorⅡmRNA binding protein 3，IMP3）與膀胱癌相關蛋白BCA7 蛋白在膀胱癌患者呈現高表達水平，在預測膀胱癌患者預后方面可發揮作用[6]。本研究通過免疫組化法檢測IMP3 和膀胱癌相關蛋白BCA7 在膀胱癌患者中的表達，并分析其與患者臨床特征和預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011 年6 月至2015 年6 月安康市中心醫院收治的膀胱癌患者。納入標準：經病理組織學檢查確診為膀胱癌；腫瘤無遠處轉移且術前未接受新輔助化療或放療。排除標準：合并心、肝、腎等臟器嚴重功能不全；合并凝血功能和精神障礙；臨床資料和隨訪資料缺失或不完整。采用世界衛生組織（WHO）1973 分級法進行組織學分級，采用國際抗癌協會2002 年TNM 分期法進行臨床分期。依據納入和排除標準，本研究共納入121 例膀胱癌患者，男93 例，女28 例；年齡28～80 歲，平均（60.42±3.25）歲。取121 例膀胱癌患者的膀胱癌組織和32 例對應癌旁正常組織標本浸泡于10%甲醛中，石蠟包埋。

1.2 免疫組化法檢測IMP3與BCA7蛋白的表達情況

取121 例膀胱癌患者的膀胱癌組織和32 例相應的癌旁正常組織，4 μm 厚石蠟切片，梯度乙醇常規脫蠟水化，枸櫞酸鹽（pH=6.0）加熱抗原修復，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗3次，每次5 min，二甲苯脫蠟，每次15 min，于0.3%過氧化氫中孵育10 min后，PBS沖洗3次，每次5 min，胎牛血清封閉30 min。加入稀釋濃度為1∶100的兔單克隆抗體，4 ℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3次，每次5 min，加入生物素標記的二抗，37 ℃孵育30 min，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色、脫水、透明和固定。免疫組化染色操作步驟按照試劑盒說明書進行，以PBS 代替一抗作為陰性對照。

結果判定：由兩名病理專家依照評分等級標準[7]進行免疫組化評分，BCA7 依據染色強度和陽性細胞所占比例進行評分：依據染色強度，無染色計0分，弱染色計1 分，中等強度染色計2 分，強染色計3 分；依據陽性細胞所占比例，陽性細胞所占比例為0%計0 分，陽性細胞所占比例為1%～50%計1分，陽性細胞所占比例為51%～75%計2 分，陽性細胞所占比例為≥76%計3 分；將染色強度和陽性細胞所占比例評分相加，≤4 分為BCA7 低表達，≥5 分為高表達。IMP3 定位于細胞質，細胞質呈棕褐色或棕黃色染色為陽性，依據染色強度和陽性細胞所占比例進行評分：依據染色強度，無染色計為0分，淡黃色染色計1 分，棕黃色染色計2 分，棕褐色染色計3分；依據陽性細胞所占比例，陽性細胞所占比例≤5%計0分，陽性細胞所占比例為6%～25%計1分，陽性細胞所占比例為26%～50%計2 分，陽性細胞所占比例≥51%計3分；將染色強度和陽性細胞所占比例評分相加，＞1分為陽性，0～1分為陰性。

1.3 隨訪方法

采用電話、短信、回院復查和上門隨訪的方式對121 例膀胱癌患者進行為期3 年的隨訪，隨訪時間10～60 個月，平均（27.40±14.80）個月，以患者死亡或隨訪結束為隨訪終點，隨訪截止時間為2018年6 月，記錄患者的生存情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 18.0 軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較采用t檢驗，計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；IMP3 和BCA7 蛋白表達情況與膀胱癌患者預后的影響因素采用Logistic 回歸分析；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IMP3 和BCA7 蛋白的表達情況

121 例膀胱癌患者膀胱癌組織中IMP3 陽性表達率65.29%（79/121），高于癌旁正常組織的0%；121例膀胱癌患者膀胱癌組織中BCA7蛋白的高表達率為73.55%（89/121），低表達率為26.45%（32/121）。

2.2 不同臨床特征膀胱癌患者膀胱癌組織中IMP3和BCA7 蛋白表達情況的比較

不同性別、年齡、腫瘤直徑及腫塊數目膀胱癌患者膀胱癌組織中IMP3 和BCA7 蛋白表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；不同組織學分級、T 分期和復發情況膀胱癌患者膀胱癌組織中IMP3 蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=22.049、7.501、4.061，P＜0.05）。不同組織學分級、T 分期和復發情況膀胱癌患者膀胱癌組織中BCA7 蛋白表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=7.053、7.646、11.790，P＜0.05）。（表1）

2.3 不同IMP3 與BCA7 蛋白表達情況膀胱癌患者3 年生存率比較

IMP3 陽性表達宮頸癌患者的3 年生存率為35.44%（27/79），低于陰性表達患者的65.62%（21/32），差異有統計學意義（χ2=9.117，P=0.002）；BCA7 蛋白高表達宮頸癌患者的3年生存率為42.70%（38/89），低于低表達患者的59.38%（19/32），差異有統計學意義（χ2=13.464，P=0.000）。

2.4 膀胱癌患者預后情況影響因素的單因素及多因素分析

經單因素分析可見，組織學分級、T 分期、復發情況、IMP3 蛋白表達情況和BCA7 蛋白表達情況可能與膀胱癌患者的預后有關（P＜0.05）。多因素Logistic 回歸分析結果顯示，組織學分級為G3級、T分期為T2～T4期、IMP3 陽性表達與BCA7 高表達是影響膀胱癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。（表2）

3 討論

胰島素樣生長因子家族mRNA 結合蛋白成員是RNA 結合蛋白IMP3。基因篩選法發現，IMP3在胰腺癌和良性胰腺組織中表達情況不同，為腫瘤組織表達的K 同源蛋白[8]。此外，IMP3 是一種分泌性蛋白，可結合胰島素樣生長因子（insulin-like growth factor，IGF），對細胞的生長、分化、凋亡、運動和黏附起調節作用，對IGF 與IGF2 型受體發揮作用，對凋亡抑制效應、有絲分裂效應和細胞運動起促進作用[9-10]。研究發現，腫瘤組織的發生發展與IMP3 有關[11]。本研究采用免疫組化法檢測IMP3 蛋白在膀胱癌組織及癌旁正常組織中的表達情況，結果發現，膀胱癌組織中IMP3 蛋白的表達高于癌旁正常組織，表明IMP3 蛋白在膀胱癌組織中陽性表達，此外，本研究結果顯示，IMP3 蛋白的表達可能與腫瘤組織學分級、T 分期和復發情況有關，即腫瘤分級越高、T 分期越晚、腫瘤復發，IMP3蛋白陽性表達率就越高，表明腫瘤的惡性程度與IMP3 表達情況有關。相關分析結果顯示，IMP3 陽性表達患者3 年生存率低于陰性表達患者，多因素Logistic 回歸分析結果顯示，IMP3 蛋白表達陽性是膀胱癌患者預后的獨立危險因素，進一步表明IMP3 表達參與了膀胱癌的發生發展過程，影響了膀胱癌患者的預后，IMP3 表達可作為預測膀胱癌患者預后的重要指標之一。

表1 不同臨床特征膀胱癌患者膀胱癌組織中IMP3 和BCA7 蛋白的表達情況（n=121）

表2 膀胱癌患者預后情況影響因素的單因素及多因素Logistic 回歸分析

目前，膀胱癌發病原因與機制尚不明確，但可知其與激活的原癌基因與失活的抑癌基因有關，在膀胱癌發生發展中發揮重要作用[12]。研究結果表明，患者的預后與多種腫瘤標志物相關，如RNA結合基序蛋白3、脆性組氨酸三聯體、胞內連接蛋白α、上皮型鈣黏蛋白和原鈣黏蛋白10 等[13～15]，但關于預測膀胱癌患者預后生物分子標志物的研究較少，這可能與尚未完全闡明的膀胱癌患者的具體發病機制有關。既往逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）驗證及生物信息學篩選發現，BCA7 已確定為膀胱癌高表達基因，癌旁正常組織中BCA7 mRNA水平明顯低于膀胱癌組織，全身其他正常組織中幾乎未發現BCA7 mRNA的表達，表明BCA7基因在膀胱癌發生發展中可發揮重要作用，對膀胱癌患者的預后有預測作用[16～18]。本研究經免疫組化法檢測發現，BCA7 蛋白在癌旁正常組織中的表達水平明顯低于膀胱癌組織，表明BCA7 蛋白在癌旁正常組織中低表達，在膀胱癌組織中高表達，符合既往mRNA 表達水平結果[19]。本研究結果顯示，膀胱癌組織學分級、T分期和復發情況與BCA7 蛋白表達水平有關，組織學分級越高、T分期越晚、腫瘤復發，BCA7 蛋白高表達率越高，這可能與膀胱癌惡性程度和基因表達情況有關，BCA7蛋白可作為膀胱癌的原癌基因。本研究比較BCA7蛋白高表達患者與低表達患者的生存率，結果顯示，BCA7 蛋白高表達患者的生存率低于低表達患者，同時，多因素Logistic 回歸分析也發現，BCA7 蛋白表達水平是影響膀胱癌患者預后的獨立危險因素，表明BCA7 蛋白高表達膀胱癌患者的預后較差，BCA7 蛋白在腫瘤進展中發揮致癌作用，可能為一個理想的膀胱癌預后標志物[20]。

綜上所述，IMP3與BCA7蛋白在膀胱癌組織中高表達，其表達情況與患者的預后相關，IMP3與BCA7蛋白可作為評估膀胱癌患者預后的有效標志物。