三磷酸腺苷生物熒光法和細(xì)菌培養(yǎng)法監(jiān)測中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品安全性研究

趙慶蘭 鄧 燕* 魏紅艷 崔 雁

2015年原國家衛(wèi)生部發(fā)布的《醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》[1]中要求，根據(jù)醫(yī)療器械污染后使用所致感染的危險(xiǎn)性大小及在患者使用之間的消毒或滅菌要求，將醫(yī)療器械分為高度、中度和低度三類危險(xiǎn)性物品。其中，直接或間接接觸人體黏膜的中度危險(xiǎn)性物品在臨床診療工作中被廣泛使用，中度危險(xiǎn)性物品的安全性直接影響臨床診療效果，影響醫(yī)院感染的發(fā)生。按照2009年原國家衛(wèi)生部發(fā)布的《消毒供應(yīng)中心管理規(guī)范》[2]中要求，醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒供應(yīng)中心進(jìn)行集中管理，取消了使用科室自行清洗、消毒、包裝中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品，保證了物品的清洗、消毒、包裝質(zhì)量和安全。規(guī)范清洗、消毒后，中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品使用前均由各科室自行保存，保存期間外環(huán)境及人為的很多因素都可能影響物品質(zhì)量和安全。

保證醫(yī)療用品的安全使用是醫(yī)院感染管理的重要環(huán)節(jié)之一，常規(guī)的物品消毒效果微生物檢測方法要求高，影響因素多，等待時(shí)間長，不利于感染預(yù)防和控制[3-4]。在日常常規(guī)檢測和緊急狀態(tài)下，快速的檢測方式能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)、解決問題和隱患。本研究旨在對規(guī)范清洗、消毒后分別包裝在粘貼式醫(yī)用塑料包裝袋、未經(jīng)漂白處理的白平紋棉布雙層布袋和聚乙烯塑料袋三種包裝材料進(jìn)行三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)生物熒光法和細(xì)菌培養(yǎng)法監(jiān)測效果分析，評估存放中的中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品的安全性。

1 材料和方法

1.1 儀器設(shè)備與材料

(1)儀器設(shè)備：采用Biotech BT-112D型生物熒光快速檢測儀和BioThema266-112型ATP生物熒光檢試劑盒(瑞典BioThema公司)；ATP試劑(美國HYgiena公司)；UltraSnap一體化試劑棒(美國Hygiena公司)。

(2)檢測材料：細(xì)菌培養(yǎng)檢測材料包括酒精燈、有相應(yīng)中和劑的培養(yǎng)試管、無菌采樣棉簽、生理鹽水、手術(shù)剪刀或無菌手套、膠布和采樣專用容器。

(3)中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品：不同的高效消毒物品，其中包括負(fù)壓瓶、氧氣濕化瓶、呼吸機(jī)管路、濕化罐、呼吸氣囊、面罩、簡易呼吸器和霧化管8種，各37件。

1.2 檢測方法

(1)存放方法：已閉合和密封包裝方式，以包為單位直接自然存放在消毒供應(yīng)中心無菌存放間無菌架和臨床科室治療室無菌物品柜中。

(2)存放環(huán)境：消毒供應(yīng)中心無菌存放間、臨床科室治療室，環(huán)境相對濕度為30%～70%，室溫為0～30 ℃。

(3)ATP生物熒光檢測采樣方法[5]：①采樣棒的棉簽滴加采樣液；②在采樣表面來回涂擦，＞100 cm2的采100 cm2，＜100 cm2的全采；③將采樣棒放入含反應(yīng)液的檢測管；④將檢測管插入檢測儀的檢測孔；⑤第1次讀數(shù)(粗值)；⑥取出采樣棒，將標(biāo)準(zhǔn)品放入檢測管；⑦第2次讀數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)值)；⑧設(shè)備自動(dòng)計(jì)算給出最終結(jié)果。

(4)細(xì)菌培養(yǎng)檢測采樣方法：用戴無菌手套的手從包裝袋內(nèi)拿出待檢測物品，用無菌生理鹽水充分濕潤后的無菌棉簽在待檢測物品內(nèi)部橫豎來回涂擦，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子。棄去手接觸部分棉簽，將剩余棉簽投入10 ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送微生物室。

(5)兩種方法采樣時(shí)間：清洗消毒合格后包裝，在使用前的0 d、7 d、14 d、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月8個(gè)時(shí)間段進(jìn)行采樣和檢測。

(6)ATP檢測判斷標(biāo)準(zhǔn)：ATP生物熒光檢測儀評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照生產(chǎn)廠家提供的說明書，中國CDC消毒檢測中心權(quán)威驗(yàn)證：ATP生物熒光快速檢測相對光單位(relative light unit，RLU)值，RLU≤2000為合格。ATP值的RLU上升為器械、器具和物品清洗不合格，下降為器械、器具和物品清洗合格。

(7)細(xì)菌培養(yǎng)檢測判斷標(biāo)準(zhǔn)：參照國家標(biāo)準(zhǔn)《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB15982-1995)中接觸黏膜的醫(yī)療用品，細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤20 cfu/g或100 cm2，不得檢出致病微生物為合格。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)及百分比(%)表示，采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ATP熒光檢測合格情況比較

對存放中的中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品存放0 d、7 d、14 d、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月的8個(gè)時(shí)間段，3種包裝方式進(jìn)行ATP檢測合格情況比較，ATP值合格率及穩(wěn)定性比較中，醫(yī)用塑料自封袋中的物品ATP值合格率為96%，8個(gè)時(shí)間段檢測均穩(wěn)定在86%～100%之間；棉布雙層布袋中物品ATP值合格率平均為66%，穩(wěn)定情況為89%～45%，由高到低不斷下降；聚乙烯塑料袋中的物品ATP值合格率平均為77%，穩(wěn)定情況為86%～45%，由高到低不斷下降。棉布雙層布袋與聚乙烯塑料袋差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；醫(yī)用塑料自封袋與棉布雙層布袋和聚乙烯塑料袋存放1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月的ATP檢測比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=15.152，x2=19.161，x2=24.796，x2=21.691，x2=28.100；P＜0.05)，見表1。

表1 ATP檢測結(jié)果合格率比較(%)

表2 ATP檢測值升降情況比較(RLU≤2000)

表3 微生物檢測合格率比較(%)

2.2 ATP檢測數(shù)值升降情況比較

對存放中的中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品存放0 d、7 d、14 d、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月的8個(gè)時(shí)間段，3種包裝方式ATP檢測數(shù)值高低及與合格數(shù)值(RLU≤2000)比較。醫(yī)用塑料自封袋中的物品ATP值持續(xù)下降，1年內(nèi)均保持在正常范圍內(nèi)；棉布中的物品ATP值有升有降，存放1個(gè)月時(shí)ATP值超出正常范圍；聚乙烯塑料袋中物品ATP值逐漸下降，但從0 d至1年8個(gè)時(shí)間段ATP值一直都在不合格范圍內(nèi)。全部物品0 d比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.618，P＞0.05)；7 d，14 d、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.142，F(xiàn)=3.900，F(xiàn)=9.556，F(xiàn)=7.705，F(xiàn)=10.596，F(xiàn)=10.282，F(xiàn)=14.204，P＜0.05)，見表2。

2.3 微生物檢測法檢測合格情況比較

對存放中的中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品存放0 d、7 d、14 d、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月和12個(gè)月8個(gè)時(shí)間段，3種包裝方式細(xì)菌培養(yǎng)檢測結(jié)果合格情況比較。8個(gè)時(shí)間段，醫(yī)用塑料自封袋中，聚乙烯塑料袋中物品微生物檢測合格率均為100%，全程均未檢出有害細(xì)菌；棉布中物品合格率為98%，存放3個(gè)月時(shí)檢測出干燥棒狀桿菌1個(gè)，存放6個(gè)月時(shí)檢出四聯(lián)球菌2個(gè)。3種包裝方式細(xì)菌培養(yǎng)檢測合格率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

3 討論

3.1 ATP生物熒光檢測技術(shù)監(jiān)測效果

ATP檢測是一種快速檢驗(yàn)方法，檢測敏感性相當(dāng)高，數(shù)秒鐘內(nèi)便可得到線性、可重復(fù)性及可再現(xiàn)性的結(jié)果，1 min左右即可得到實(shí)時(shí)檢測結(jié)果[6-7]。ATP生物熒光檢測可以在任何時(shí)間，任何地點(diǎn)使用，操作簡單，容易掌握，并可提供快速的檢測結(jié)果，使清洗消毒過程符合藥品新版良好生產(chǎn)規(guī)范(good manufacturing practice，GMP)和危害分析臨界控制點(diǎn)(hazard analysis critical control point，HACCP)的規(guī)范[8]。使用ATP熒光快檢系統(tǒng)檢測到的熒光值，其時(shí)效性和監(jiān)測效果均優(yōu)于目測或細(xì)菌平皿計(jì)數(shù)的效果[9]。本研究顯示，ATP檢測比常用消毒效果檢測方法更敏感，更快捷，通過8個(gè)時(shí)間段ATP值表現(xiàn)為有升有降或者持續(xù)下降，ATP熒光檢測技術(shù)可以檢測不同包裝方式存放時(shí)間的物品受污染程度及差異性，可以幫助改善產(chǎn)品清洗消毒質(zhì)量和保存期限、提供實(shí)時(shí)趨勢分析數(shù)據(jù)及質(zhì)量監(jiān)測的數(shù)據(jù)。

3.2 細(xì)菌檢測技術(shù)檢測效果

細(xì)菌培養(yǎng)檢測方法是一種用人工方法使細(xì)菌生長繁殖的技術(shù)[10]。細(xì)菌培養(yǎng)檢測是一個(gè)復(fù)雜的技術(shù)。專業(yè)技術(shù)性強(qiáng)，操作要求高，必需是專業(yè)人員才能完成，培養(yǎng)結(jié)果至少需要2 d，常規(guī)平皿計(jì)數(shù)法檢測細(xì)菌總數(shù)，細(xì)菌在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)成肉眼可見的細(xì)菌菌落。由于樣品稀釋不均等原因，一個(gè)菌落往往由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)成，而且LB培養(yǎng)基只適合需氧或半需氧細(xì)菌的生長，細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果與ATP檢測相比較慢，但是細(xì)菌培養(yǎng)檢測方法能夠檢出此類細(xì)菌的數(shù)量，所得結(jié)果難以反映實(shí)際衛(wèi)生狀況。

3.3 ATP熒光檢測法聯(lián)合微生物計(jì)數(shù)法監(jiān)測效果

ATP測試是一個(gè)直接的，客觀的方法，可用于檢測表面的產(chǎn)品殘留物，采用ATP熒光快檢法可檢測到各種來源的ATP，污染(有機(jī)物或微生物)并非均勻地分布在產(chǎn)品接觸表面，無法區(qū)分不同來源的ATP。因此，在檢測表面污染時(shí)，ATP測試不應(yīng)被視為是絕對精確的檢測[11]。ATP檢測是在評估衛(wèi)生狀態(tài)及潛在風(fēng)險(xiǎn)時(shí)的復(fù)雜且敏感指標(biāo)，因此ATP檢測方法并不能成為直接替代傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)的檢測方式，只有結(jié)合實(shí)驗(yàn)室微生物計(jì)數(shù)法對微生物污染情況進(jìn)行綜合判定，方能客觀反映中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品實(shí)際衛(wèi)生狀況。

4 結(jié)論

ATP的衛(wèi)生監(jiān)測和微生物計(jì)數(shù)兩種方法均可檢測不同的被分析物，且兩種方法均具有變異性的生物測試性能。有數(shù)據(jù)顯示，這兩種方法有80%～90%的一致性，而其他數(shù)據(jù)為67%，是因?yàn)楫a(chǎn)品殘留物未被微生物檢測法檢測到[12]。ATP測試是一個(gè)直接的，客觀的方法，可用于檢測表面的產(chǎn)品殘留物，而此測試方法并不能直接替代傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)的檢測方式。目前，實(shí)驗(yàn)室微生物計(jì)數(shù)法合格判定標(biāo)準(zhǔn)與ATP檢測合格標(biāo)準(zhǔn)一致性和等效性尚未被權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定[13]。因此，實(shí)際工作中醫(yī)療機(jī)構(gòu)可以利用ATP熒光檢測法快速、簡單及有效的特點(diǎn)，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室微生物計(jì)數(shù)法對微生物污染情況進(jìn)行綜合判定，以提高中度危險(xiǎn)醫(yī)療用品感染監(jiān)測效率與效果。