基于香豆素母核的磺酰腙類乙酰膽堿酯酶抑制劑的制備

趙友芳，黃國娟，陳婭芳，於 祥

(貴州中醫藥大學 藥學院，貴州 貴陽 550025)

香豆素是一種具有苯并α-吡喃酮的結構，分子式為C9H6O2，分子量為146.04，其結構式如圖1所示。香豆素類化合物是一類具有香豆素母核的雜環化合物，具有抗癌[1]、抗炎[2]、抗菌[3]等生物活性。此外，香豆素類化合物對乙酰膽堿酯酶也具有抑制活性，如8-羥基香豆素[4]、蛇床子素[5]等，都表現出一定的對乙酰膽堿酯酶的抑制活性。磺酰腙類化合物因含有-NHN=CH-結構，具有很強的配位能力，也具有多種生物活性[6]。

為研究新型高效的乙酰膽堿酯酶抑制劑，本論文采用亞活性結構拼接的方法，以7-二乙氨基香豆素為母核，引入磺酰腙結構，將兩種活性結構連接在一起，設計合成了3個衍生物(合成路線如圖2所示)，并采用Ellman法[7]測定了目標化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

圖1 香豆素結構

圖2 目標化合物的合成路線

Fig.2 The synthetic route of the target compounds

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Bruker Avance 600 MHz 核磁共振儀 (Bruker 公司)，TMS為內標；Thermo DSQ 質譜儀(Thermo 公司)；YRT-3型熔點儀(南京旭析儀器有限公司)；旋轉蒸發儀(Heidolph公司)RT-6100酶標分析儀(雷杜公司)；所有試劑與溶劑均為市場所售分析純級。

1.2 實驗部分

1.2.1 中間體2的合成 將稱取好的7-二乙氨基-4-甲基香豆素(1，1 mmol)置于50 mL 的圓底燒瓶中，加入10 mL 1,4-二氧六環，升溫至60 ℃。稱取二氧化硒(1.1mmol)加入反應液中，然后將溫度升高到80 ℃，攪拌反應。TLC檢測反應進度。反應進行4小時后，底物反應完全。將反應液冷卻至室溫，過濾，除去反應液中的沉淀。沉淀用20 mL二氯甲烷洗滌。合并有機溶劑，用旋轉蒸發器濃縮，薄層硅膠層析分離，得黃色固體2，產率為73%，熔點171～173 ℃。

1.2.2 目標化合物的合成 稱取1 mmol 中間體2、1 mmol取代磺酰肼于50 mL圓底燒瓶中。10 mL 無水乙醇溶解。室溫攪拌反應。TLC進行跟蹤檢測反應是否反應完全。5 ～ 12h后，底物反應完全。將反應液冷卻至室溫直到沒有固體析出。然后抽濾，所得固體用無水乙醇重結晶得腙類衍生物3a -c。

1.2.3 活性測定 采用Ellman法[7]對AChE體外抑制活性進行測試。將稱好的樣品加適量二甲亞砜溶解后加pH 7.4的0.1mol/L磷酸緩沖液(PBS)溶液，配制成1mmol/L的待測溶液。陽性對照采用他克林，空白對照采用磷酸緩沖液(PBS)溶液。測定時首先在96孔板上加入用待測樣品10 μL，再依次加入40 μLPB、20 μL 2.5 mmol/L 的5,5-二流雙硝基苯甲酸(DTNB)、10 μL的電鰻乙酰膽堿酯酶，振蕩混勻，37℃預孵10min，然后加入20 μL 10 mmol/L的碘化硫代乙酰膽堿，37℃反應10min，加入30μL 1%的SDS終止反應，酶標儀測定405nm吸收值并計算樣品對乙酰膽堿酯酶的抑制活性。

2 結果與討論

目標化合物的合成路線圖如圖2所示。本論文以1,4-二氧六環做溶劑，SeO2做氧化劑，將7-二乙氨基-4-甲基香豆素的甲基氧化成醛基，然后與取代磺酰肼反應，生成7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物。所有目標化合物都經熔點、1H NMR和MS進行結構確證。解譜數據如下;

3a：產率70%，黃色固體，熔點176～178 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO ～ d6) δ：12.21(s，1H)，8.00 (d，J=9.6 Hz，1H)，7.98 (s，1H)，7.91～7.92 (m，2H)，7.69～7.71 (m，1H)，7.64 (t，J=7.2 Hz，2H)，6.69 (dd，J = 9.6，2.4 Hz，1H)，6.51 (d，J=2.4 Hz，1H)，6.15 (s，1H)，3.41 (q，J=7.2 Hz，4H)，1.11 (t，J=7.0 Hz，6H)；MS m/z：422.1 ([M+Na]+，100)。

3b：產率67%，黃色固體，熔點160～162 ℃；1H NMR (600 MHz，DMSO～d6) δ：12.12 (s，1H)，7.99 (d，J=9.0 Hz，1H)，7.96 (s，1H)，7.79(d，J=8.4 Hz，2H)，7.45(d，J=7.8 Hz，2H)，6.67(dd，J=9.0，2.4 Hz，1H)，6.51(d，J=2.5 Hz，1H)，6.15(s，1H)，3.41(q，J=7.2 Hz，4H)，2.37(s，3H)，1.11(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：436.0 ([M+Na]+，100)。

3c：產率62%，黃色固體，熔點161～163 ℃；1H NMR(600 MHz，DMSO～d6) δ：12.64 (s，1H)，8.53 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.40 (d，J=8.4 Hz，1H)，8.35 (d，J=7.2 Hz，1H)，7.94(s，1H)，7.80(d，J=9.0 Hz，1H)，7.72(t，J=8.4 Hz，1H)，7.61(t，J=8.4 Hz，1H)，7.26(d，J=7.2 Hz，1H)，6.55(dd，J=9.6，2.4 Hz，1H)，6.46(d，J=2.4 Hz，1H)，6.09(s，1H)，3.39(d，J=7.2 Hz，4H)，2.80(s，6H)，1.09(t，J=7.2 Hz，6H)；MS m/z：515.3([M+Na]+，100)。

采用改進型的Ellman法測定了目標化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性，活性結果如表1所示。

表1 目標化合物對乙酰膽堿酯酶的抑制活性(100μmol/L)

a本測試平行3次，重復2次；b陽性對照，測試濃度為1μmol/L。

如表1所示，7-二乙氨基香豆素磺酰腙類衍生物對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性，在100μmol/L濃度下，3個目標化合物抑制活性分別達到32.6%，29.3%和26.1%，但都弱于陽性對照他克林。

3 結論

本文采用亞活性結構拼接的方法，以7-二乙氨基-4-甲基香豆素為原料，通過氧化、親核反應，在香豆素母核上引入磺酰腙結構，合成了3個7-二乙氨基-香豆素類磺酰腙類衍生物，并進行了體外抑制乙酰膽堿酯酶活性測試。初步測試結果顯示，目標化合物對乙酰膽堿酯酶具有一定的抑制活性。