MYH7基因多態(tài)性位點rs397516252及rs187073962與遼寧地區(qū)肥厚性心肌病的臨床相關研究

宋曉宇，薛 凌

(錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院，121000，錦州，遼寧)

0 引言

肥厚性心肌病(HCM)是一種常見的遺傳性心血管疾病[1]，為常染色體顯性遺傳。臨床上多發(fā)生于青壯年，常有家族史。肥厚性心臟病發(fā)病率很高，全球發(fā)病率約為1/500[2]。臨床表現(xiàn)包括勞力性呼吸困難、疲勞、暈厥、猝死、中風及心衰。該病病程個體差異較大，雖然大多數(shù)患者壽命并未明顯縮短，但若本人有暈厥史、室性心動過速及心室壁厚度超過3.0 cm以上者或家屬有猝死者，則患者發(fā)生猝死的概率明顯增加[3]。目前研究表明HCM由11個或更多編碼心臟肌節(jié)蛋白基因中的1 400多個突變引起[4]，其中心臟β－肌球蛋白重鏈(MYH7)基因是HCM發(fā)病最主要的致病基因，目前已報道國內HCM相關MYH7基因致病性突變有66個[5]。本研究通過等位基因特異性擴增法研究遼寧地區(qū)HCM患者發(fā)病與MYH7基因多態(tài)性位點的臨床相關性，在基因層面了解本地區(qū)HCM發(fā)病可能易感基因位點。

1 材料與方法

1.1 一般資料

受試對象為2017年12月至2018年9月于錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院住院及體檢人員。病例組為HCM患者共87例，男性40例，女性47例，平均年齡49.38±17.13歲，納入標準:a)超聲心動圖提示左心室壁厚度≥15 mm;2)超聲心動圖提示室間隔厚度≥15 mm。排除標準:1)其他引發(fā)心肌增厚的疾病如高血壓、風濕性心臟病、先心病等;2)自身免疫性疾病、遺傳性疾病、代謝性疾病等。對照組為體檢健康人員共174例，其中男性82例，女性92例，平均年齡47.02±16.55歲。本研究已告知受試者并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 提取DNA 采集5 mL外周靜脈血，使用血液標本DNA提取試劑盒提取樣本DNA，血液樣品先通過紅細胞裂解液將血液中的紅細胞破壞，裂解后收集白細胞，加入裂解緩沖液裂解白細胞，使白細胞中的DNA釋放到溶液中，之后將蛋白質沉淀，分離到上清液，加入異丙醇、酒精，將DNA沉淀，最后加雙蒸水得到DNA溶液。

1.2.2 等位基因特異性擴增 位點rs397516252和rs187073962的序列通過UCSU數(shù)據(jù)庫進行檢索(http://genome.ucsc.edu/)，由里來生物公司設計引物并合成。PCR反應條件為37℃10 min;95℃5 min;95℃15 s;60℃60 s，后2個步驟進行40個循環(huán)。通過熒光對照驗證PCR的有效性。

1.2.3 統(tǒng)計學分析 通過SPSS13.0軟件對實驗數(shù)據(jù)進行描述及分析使用，采用頻數(shù)及均數(shù)±標準差對數(shù)據(jù)進行描述，采用Pearsonχ2檢驗對組間SNP位點的分布差異進行分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2組臨床資料比較

HCM組平均年齡49.38±17.13，男女比例40∶47，對照組平均年齡47.02±16.55，男女比例82∶92，統(tǒng)計分析顯示2組間年齡及性別無顯著差異(P＞0.05)，提示本研究納入的2組實驗對象差別無統(tǒng)計學意義，可以進行對比分析，如表1所示。

表1 2組臨床資料比較

2.2 SNP位點rs397516252的組間比較

SNP位點rs397516252已通過哈迪－溫伯格遺傳平衡檢驗。統(tǒng)計分析表明HCM組中CC基因型、CG基因型及GG基因型的頻數(shù)分別為82例、3例、2例;對照組中CC基因型、CG基因型及GG基因型的頻數(shù)分別為173例、1例、0例。2組間基因型分布差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.026)，2組間等位基因分布也具有統(tǒng)計學意義(P=0.007)，如表2所示。

2.3 SNP位點rs187073962的組間比較

統(tǒng)計分析表明HCM組中GG基因型、GA基因型及AA基因型的頻數(shù)分別為71例、11例、5例;對照組中GG基因型、GA基因型及AA基因型的頻數(shù)分別為151例、17例、6例。HCM組中G等位基因及A等位基因發(fā)現(xiàn)頻數(shù)分別為153例、21例;對照組中G等位基因及A等位基因發(fā)現(xiàn)頻數(shù)分別為319例及29例。2組間基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，如表3所示。

表2 2組間rs397516252比較

表3 2組間rs187073962比較

3 討論

肥厚性心肌病(HCM)是以室間隔不對稱肥厚為特征的遺傳性心臟病，以常染色體顯性遺傳為主要遺傳學方式[6]。臨床表現(xiàn)有時可無癥狀，有時表現(xiàn)為心悸、胸悶、室性心律失常、暈厥及猝死等[7]。其病理特征主要為心肌細胞肥大、心腔縮小及心肌纖維化等表現(xiàn)[8]。目前研究發(fā)現(xiàn)眾多基因與HCM發(fā)病有關，尤其是心臟β－肌球蛋白重鏈(MYH7)基因。因此，從基因層面研究HCM的病因及發(fā)病機制，可為未來臨床治療提供更多的可能。

心臟β－肌球蛋白重鏈(MYH7)基因，位于14號染色體q11.2位置，共包含40個外顯子，編碼心臟肌球蛋白的β(或慢)重鏈亞基。肌球蛋白是一種六聚體蛋白，包含2個重鏈亞基，2個堿輕鏈亞基和2個調節(jié)性輕鏈亞基，主要在正常人的心室中表達，同時也可在骨骼肌中表達。目前眾多研究表明MYH7基因的突變與肥厚型心肌病，肌球蛋白儲存型肌病，擴張型心肌病有關[9－12]。Marsiqlia等人共篩選了78個MYH7基因突變與HCM的發(fā)病有關[13]。劉長清等人表明攜帶有MYH7基因的HCM患者可表現(xiàn)高動力收縮和舒張功能受限[14]。Liu等人對中國漢族10個HCM患者家系進行調查研究，在其中的3個家系發(fā)現(xiàn)了MYH7突變(分別為Arg663His，Glu924Lys和Ile736Thr)，并且其中有3個患者在20－48歲時猝死，提示這3個MYH7基因突變?yōu)镠CM的致病性突變，尤其與猝死高風險相關[15]。此外，MATTOS等人對巴西南部HCM患者進行的首次遺傳分析發(fā)現(xiàn)有58%的個體存在MYH7基因突變，且在大多數(shù)存在突變的個體中發(fā)生了MYH7相關疾病[16]。眾多研究均發(fā)現(xiàn)MYH7基因突變與HCM發(fā)病相關，但不同地域發(fā)現(xiàn)的MYH7基因變異不盡相同，本研究選取了2個MYH7基因多態(tài)性位點(rs397516252和rs187073962)，探討本地區(qū)HCM易感基因位點。NCBI數(shù)據(jù)庫中rs397516252提示可能致病性，而rs187073962位點性質不確定。本研究與NCBI數(shù)據(jù)庫收錄結果有所差異，rs397516252位點組間基因型及等位基因分布差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，rs187073962位點組間基因型及等位基因分布差異無統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示本地區(qū)MYH7基因多態(tài)性位點rs397516252可能與HCM發(fā)病有關，而位點rs187073962變異對本地區(qū)HCM發(fā)病無影響。

綜上，SNP位點rs397516252可能為遼寧地區(qū)漢族人群HCM的易感基因位點，而位點rs187073962可能與本地區(qū)HCM發(fā)病無關。本研究中主要分析SNP位點變異散在分布，后續(xù)應對本研究中基因改變陽性病例的家系進行研究，以分析易感基因位點的遺傳學特征。此外增加研究對象，擴大樣本量可使研究結果進一步得到驗證，從基因層面更好的研究HCM疾病病因及發(fā)病機制。