糖尿病合并肺結核患者血miR-144的表達水平及意義

陳再旺 謝瑞玉

糖尿病、肺結核為2種常見慢性疾病，2型糖尿病合并肺結核發生率不斷上升[1]，糖尿病感染肺結核相比非糖尿病人群風險大。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)分布在基因組非編碼區，屬于單鏈小分子RNA，參與細胞生長、分化等生理過程。miRNA可作為相關疾病診斷標志物[2-4]，miR-144被發現在結核病人群中高表達[5]；同時，血清miR-144表達是2型糖尿病獨立預測因子[6]。本研究旨在觀察糖尿病合并肺結核患者miR-144表達情況，分析miR-144在糖尿病合并肺結核患者診治中的臨床意義，為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本市二甲及以上醫院2018年1月至2019年5月收治的肺結核患者75例，其中男性44例，女性31例；年齡45～82歲，平均(60.35±11.08)歲。納入標準：①經體格檢查、胸部X線片、結核分枝桿菌培養等確診為肺結核；②均為初治患者；③入組前未行抗結核干預。排除標準：①合并免疫性疾病；②肝腎功能嚴重障礙；③惡性腫瘤；④近3個月有激素、免疫相關藥物使用史；⑤有糖尿病并發癥；⑥非結核分枝桿菌肺病；⑦精神異常、癲癇。剔除中途退出者。其中糖尿病合并肺結核32例(糖尿病組)，既往有糖尿病史，糖尿病診斷依據中國2型糖尿病防治指南(2013年版)[7]；單純肺結核43例(肺結核組)；選擇同期年齡、性別與肺結核患者相匹配的健康體檢人員30例為對照組。見表1。

表1 3組研究對象一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 治療方法 全部肺結核患者接受2HRZE/4HR方案干預，其中H為異煙肼，R為利福平，Z為吡嗪酰胺，E為乙胺丁醇，按照藥物說明書或醫囑用藥。同時患者接受保肝治療。對于糖尿病合并肺結核患者，抗結核治療的同時給予胰島素干預。

1.2.2 血miR-144、血糖指標檢測 肺結核患者治療前1天、治療1個月后次日清晨空腹采集患者外周血2 mL，對照組人員于體檢當日清晨空腹抽取外周血，肝素抗凝，30 min內將全血放入含有Trizol(美國GIBCO公司)、研磨珠凍存管中，震蕩均勻后保存到-70℃冰箱(美國FORMA公司的超低溫冰箱)內；通過反轉錄-熒光定量RCR法(美國ABI公司的ABI7500熒光定量PCR儀)檢測血miR-144表達水平，反應體系：預變性95℃ 300 s，變性、延伸95℃ 10 s，60℃、72℃均20 s，共計40個循環。以U6為內參，其上、下游擴增引物序列分別為5’-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’、5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’，miR-144上、下游擴增引物序列分別為5’-ATCCAGTGCGTGCGTGTCGTG-3’、5’-TGCTTATACAGTATAGATG-3’。通過相對定量法計算血miR-144相對表達量。另外治療前1天、治療1個月后通過葡萄糖氧化酶法測定糖尿病組患者外周血空腹血糖(fasting blood glucose，FBG)、餐后2小時血糖(two hours postprandial blood glucose，2 h PBG)水平。

1.3 觀察指標 ①記錄并比較3組對象外周血FBG、2 h PBG、miR-144相對表達量；②記錄糖尿病組、肺結核組肺空洞比例、治療前后血miR-144表達水平、血糖水平；③根據肺空洞與否分組，觀察兩組患者治療前后血miR-144表達情況。

2 結果

2.1 3組研究對象治療前相關指標比較 糖尿病組肺空洞率高于肺結核組，FBG、2 h PBG、血miR-144表達水平均高于肺結核組與對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對象治療前相關指標比較

注：-表示未統計；FBG為空腹血糖，2 h PBG為餐后2小時血糖；與對照組比較，*P<0.05；與肺結核組比較，#P<0.05

2.2 兩組患者治療前后血miR-144表達、血糖水平 糖尿病組治療前、治療1個月后血miR-144表達、FBG、PBG水平均高于肺結核組，差異有統計學意義(P<0.05)；與治療前比較，糖尿病組治療1個月后血miR-144表達、FBG、PBG水平均下降，差異有統計學意義(P<0.05)；肺結核組治療前后FBG、PBG水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療前后miR-144差值比較，差異無統計學意義(P>0.05)，而治療前后FBG、PBG差值比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者治療前后miR-144表達、血糖水平比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05

2.3 有肺空洞組與無肺空洞組治療前后血miR-144表達水平比較 有肺空洞組治療前、治療1個月后血miR-144表達水平均高于無肺空洞組，差異有統計學意義(P<0.05)；與治療前比較，治療1個月后血miR-144表達水平均下降，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組治療前后miR-144差值比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 有無肺空洞患者血miR-144表達水平比較

注：與同組治療前比較，*P<0.05

2.4 miR-144表達水平與血糖水平的相關性分析 Pearson分析血miR-144表達水平與FBG、2 h PBG均正相關(r=0.692、0.704，P<0.05)。見圖1。

圖1糖尿病合并肺結核患者miR-144表達水平與血糖水平的相關性分析

3 討論

糖尿病糖脂代謝異常會影響機體免疫能力，除了導致機體抵抗能力降低外，還會使機體修復能力變弱[8]，為細菌生長、繁殖創造條件，加上肺部血容量較為豐富，增加了結核菌感染風險；另一方面，肺結核會加重糖脂代謝異常，不利于血糖控制。近年來，臨床2型糖尿病合并肺結核發生人數增多，兩者相互影響，治療難度大。

近年來，關于miRNA研究較多，Fu等[9]發現，結核患者血液中檢測出miRNA 1 223種，其中miRNA表達上調59種、下調33種，認為miRNA對結核診斷有一定的價值。miR-144調控作用多，對T淋巴細胞產生腫瘤壞死因子-α、干擾素-γ有一定的抑制作用，阻斷T淋巴細胞增殖。目前，關于miR-144在糖尿病或/和肺結核中的表達及機制研究較少。本研究結果顯示，血miR-144表達水平上從高到低分別為糖尿病合并肺結核患者、單純肺結核患者、健康體檢人員，存在顯著差異。分析原因可能為，miR-144除了能調控胰島素靶受體外，還能對胰島素基因的表達產生影響，促使胰島素受體底物-1抗體表達降低，易產生胰島素抵抗。有學者[10]發現，miR-144可靶向作用于Atg4a-3’ UTR，抑制其表達，制約細胞自噬能力，這可能是結核分枝桿菌感染的一個機制。

肺空洞形成與結核桿菌感染能力、機體免疫功能有關，結核桿菌毒力強，產生的變態反應也較強，一旦機體免疫功能下降，此時若被結核桿菌感染，則易導致肺組織壞死。本研究結果顯示，糖尿病合并肺結核患者相比單純肺結核出現肺空洞比例大，與郭星榮等[11]研究一致。這可能是因為糖尿病合并肺結核患者機體免疫功能進一步下降，加上糖脂代謝異常，加重病情，增加肺空洞風險[12]。同時，本研究發現，有肺空洞相比無肺空洞患者血miR-144表達水平高，可見有肺空洞患者血miR-144高表達。兩組患者治療后血miR-144表達水平比治療前顯著下降，提示血miR-144可隨病情的好轉而下降，且與FBG、2 h PBG水平正相關，提示血miR-144表達水平可能與血糖控制有關。此外，糖尿病合并肺結核相比單純肺結核治療前、治療后血miR-144表達水平及其差值均顯著高，可見糖尿病可能加重肺結核病情，臨床需預防糖尿病或積極降血糖處理。由于目前國內關于血miR-144在肺結核合并糖尿病中的表達及相關研究少，關于其機制還不清楚，需日后進一步研究。

綜上，糖尿病合并肺結核患者血miR-144表達水平升高，其表達水平與FBG、2 h PBG水平正相關，血miR-144可反映糖尿病合并肺結核患者疾病轉歸。