小鼠灌腸方法的總結(jié)與優(yōu)化*

李 球 丁 健

(1.福建醫(yī)科大學(xué)，福州 350005)(2. 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福州 350005)

作用于胃腸道的藥物，不僅與胃腸道的蠕動能力有關(guān)，還與所處的腸道內(nèi)的pH值有關(guān)。只有處在合適的部位和適宜的pH才能達(dá)到最佳的藥效。有些藥物不能經(jīng)口服，一方面對胃刺激性大，另一方面易被胃酸破壞。例如：5-氨基水楊酸(5-ASA)，是誘導(dǎo)輕-中度潰瘍性結(jié)腸炎維持緩解治療的第一線藥物[1]。Cohen等[2]對病變部位主要在左半結(jié)腸的潰瘍性結(jié)腸炎患者,采用5-ASA的灌腸液、栓劑或者泡沫制劑進(jìn)行灌腸給藥，發(fā)現(xiàn)與口服給藥相比，灌腸療效更佳。

在研究中，有時需通過灌腸法來驗(yàn)證某種藥物對腸道疾病的療效或制備小鼠腸道疾病模型，但目前市場上并無小鼠專用的灌腸設(shè)備，加上小鼠的腸道較狹窄并較脆弱，稍有不慎易導(dǎo)致小鼠腸道損傷和梗阻。因?yàn)檎n題需要構(gòu)建炎癥性腸病模型，通過查閱并參考大量文獻(xiàn)中介紹的灌腸方法，在實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其灌腸方法的過程中，發(fā)現(xiàn)了許多問題，雖然有些具有可操作性，但效果不明顯,且致死率高。

1 傳統(tǒng)灌腸方法及缺點(diǎn)

1.1 傳統(tǒng)灌腸方法

①將小鼠禁食、不禁水24 h,用5%水合氯醛使小鼠輕度麻醉；

②灌腸器 戴萌[3]利用3.5F導(dǎo)管；廣布加甫等[4]先將采血針(頭皮針)用消毒過的剪刀從兩端端頭剪斷，其斷端再與一次性注射器針頭連接套住；徐德魁[5]采用套接了涂有石蠟油的小號導(dǎo)尿管(直徑1.5 mm硅膠管)的1 mL注射器；蒲榮等[6]自制灌腸器20 mm管身，尖端鈍化，外徑2 mm，內(nèi)徑1 mm，距頂端1 mm處斜行開口，管身連梯度環(huán)狀柄8 mm，末端外徑達(dá)4 mm，末端呈喇叭狀，便于與最小刻度為0.01的菌液筒相連；

③將所需灌腸液抽入灌腸器內(nèi)，排完注射器內(nèi)的空氣，用石蠟油潤滑將另一斷端表面插入小鼠肛門3～4 cm處；

④接著將藥液緩慢注入，停20 s后抽出灌腸導(dǎo)管，再將小鼠倒懸約60 s，放入盒中，王振磊和黎曙霞[7]還采用了夾閉小鼠肛門的方法防止藥液流出。

1.2 缺點(diǎn)

①雖然小鼠禁食24 h，但小鼠體內(nèi)仍然會有大量的糞便未排出，導(dǎo)致灌腸過程中藥物大部分被帶出,或者灌腸過程中灌腸導(dǎo)管將糞便推向腸管前端淤積在腸道，導(dǎo)致腸梗阻；②3.5F導(dǎo)管前端和頭皮針(兩端端頭剪斷)的前端均不是圓滑的，小鼠的腸壁很薄，易導(dǎo)致穿孔；③自制灌腸器制作要求比較高，實(shí)驗(yàn)人員制作困難；④將小鼠倒置，小鼠腸管內(nèi)灌腸液還是會立即排泄出來，特別是刺激性藥物，藥物未發(fā)揮藥效就被排出；⑤有的灌腸藥物所需作用時間較長[8]，用手堵住，費(fèi)時費(fèi)力，效率慢；⑥夾閉肛門，由于小鼠肛門肌肉非常脆弱，極易造成肛門部位的機(jī)械性損傷，加之小鼠的結(jié)腸炎模型會出現(xiàn)肛門周圍不同程度的大便結(jié)痂，兩者的共同作用極易導(dǎo)致腸梗阻，進(jìn)而導(dǎo)致小鼠的死亡。

2 灌腸方法的優(yōu)化及優(yōu)點(diǎn)

經(jīng)實(shí)驗(yàn)中不斷摸索和總結(jié)，已制作出適用于小鼠灌腸的灌腸器和肛塞，該裝置用于小鼠灌腸，具有制作簡單、造價經(jīng)濟(jì)、效果明顯、致死率低等優(yōu)點(diǎn)，下面介紹優(yōu)化的灌腸操作步驟：

2.1 材料

1 mL一次性注射器1個、8號兒童硅膠導(dǎo)尿管1個、剪刀1把、甘露醇1瓶、細(xì)線、灌腸液、5%水合氯醛、橡皮擦1塊、小刀1把。

2.2 制作及操作步驟

①制備灌腸器：取一根8號硅膠導(dǎo)尿管，在距離導(dǎo)尿管頭約10 cm處剪斷，將斷端處套在1 mL注射器(剪掉針的)針頭處，檢查連接處是否有漏水，如圖1；

②制備肛塞：由于市場上尚無小鼠肛塞產(chǎn)品，可用小刀將橡皮擦修飾成類似人類肛塞的小鼠肛塞，橡皮擦盡可能選用硬度小的，如圖1；

③促進(jìn)排便：將小鼠禁食不禁水24 h后，在準(zhǔn)備灌腸前1 h，用灌腸器吸取1 mL甘露醇對小鼠進(jìn)行灌腸，促進(jìn)小鼠排便；

④灌腸操作：1 h后，將小鼠用5%水合氯醛麻醉，用該灌腸器吸取灌腸液，然后用甘油潤滑前端的硅膠管，將硅膠管緩緩?fù)迫胄∈蟾亻T3～5 cm處，將藥物緩慢推入腸道，停留1 min，然后慢慢拔出硅膠管，如圖2；

⑤肛塞操作：用肛塞堵住小鼠肛門，用線將其固定在小鼠身上，30 min后拔出肛塞，如圖2。

圖1 灌腸器及肛塞的制備過程Fig.1 The preparation of enema and anal plug

圖2 小鼠灌腸操作及肛塞操作過程Fig.2 The operation procedure of enema and anal plug

2.3 優(yōu)點(diǎn)

①促進(jìn)排便，避免小鼠因腸刺激排便，將藥物帶出，同時避免因糞便淤積導(dǎo)致腸梗阻；②用8號導(dǎo)尿管做灌腸器插管，因其前端是圓滑的，不易損傷小鼠腸道黏膜導(dǎo)致腸穿孔；③加上了肛塞，既可以防止灌腸液的漏出，又可以節(jié)約人力和時間。最重要是保證了灌腸液在腸管內(nèi)停留的時間，提高了藥效；④導(dǎo)尿管斷端剛好可以與1 mL注射器端頭連接，特別為小劑量灌腸的實(shí)驗(yàn)減少藥物的浪費(fèi)，并且可以很方便地監(jiān)測灌注的藥量。

3 討論

傳統(tǒng)灌腸方法雖然具有可操作性，但灌腸過程中稍有不慎便易導(dǎo)致兩種情況：藥液溢出導(dǎo)致造模不成功或灌腸器頭部不夠圓滑導(dǎo)致小鼠死亡率過高。改進(jìn)的方法均采用的是一次性材料，價格便宜，從清空腸道到灌腸器光滑的硅膠前端，再到防止灌腸液漏出三方面，保證了減少灌腸器對腸壁的損傷和藥物在腸管內(nèi)發(fā)揮作用的時間，但肛塞制作方面略顯粗糙，有待進(jìn)一步改進(jìn)。