9種殺菌劑對藍莓枝枯病菌的室內毒力測定

毛雪琴，張慧琴，黃武權，王艷麗，孫國倉*

(1.浙江省農業科學院a植物保護與微生物研究所，b園藝研究所，浙江 杭州 310021；2.紹興市上虞區農業技術推廣中心，浙江 紹興 312300)

藍莓，學名越桔，為杜鵑花科越桔屬多年生落葉或常綠果樹，呈灌木。在栽培學上，藍莓屬于小漿果類果樹，原產北美洲，是地球上少有的真正的藍色食物之一。藍莓果實近圓形，單果重0.5～2.5 g，最大可達3.5～5.0 g，果肉細膩，種子極小，其果味甜酸適度，風味獨特，具有香爽宜人的香氣。藍莓可鮮食，也可加工成果汁飲料、果酒飲品等[1]。

我國對藍莓引種栽培研究始于20世紀末[2]。據統計，經過多年的發展，截至2015年，我國藍莓種植面積超過3萬hm2[3]，浙江省藍莓栽培面積超過5 300 hm2，產量超過2萬t，省內種植已遍布11個地市，主產區以浙北的紹興、杭州、寧波以及浙中的臺州、金華為主。隨著生產面積的不斷擴大，藍莓病害也日趨嚴重，尤其是藍莓枝枯病，已嚴重影響和制約藍莓產業的發展。近年來，浙江上虞地區藍莓園內枝枯病發生逐年加重，病害造成枝條萎蔫枯死，花朵、果實干枯脫落，常造成幾十株甚至上百株樹體死亡。本文通過調查并進行病原菌分離，經形態學及分子生物學方法鑒定，探明引起該地區藍莓枝枯病的致病菌為烏飯樹擬莖點霉(Phomopsisvaccinia)，并選用9種高效低毒的新型殺菌劑進行室內毒力測定，以期為該病害的田間防治試驗提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試病原菌

從位于浙江上虞的紹興鑫和生態農業藍莓種植園采集藍莓枝枯病病株，并用組織分離法進行病原菌的分離純化，獲得菌株BPV-17-21，經形態學和分子生物學鑒定，確定菌株為烏飯樹擬莖點霉(Phomopsisvaccinii)，將菌株BPV-17-21置于4 ℃下保存備用。

1.2 供試藥劑

5%己唑醇微乳劑(惠州市中迅化工有限公司)；70%丙森鋅可濕性粉劑(拜耳作物科學公司)；0.3%丁子香酚可溶液劑(南通神雨藥業有限公司)；3%中生菌素可濕性粉劑(深圳諾普信農化股份有限公司)；43%戊唑醇懸浮劑(拜耳作物科學公司)；80%代森錳鋅可濕性粉劑(陶氏益農農業科技有限公司)；3%噻霉酮水乳劑(陜西西大華特科技實業有限公司)；40%嘧霉胺懸浮劑(廣東中迅龍科股份有限公司)；50%烯酰嗎啉水分散粒劑(海利爾藥業集團股份有限公司)。

1.3 室內毒力測定

采用菌絲生長速率法[4-5]測定9種殺菌劑對菌株BPV-17-21的毒力，用無菌水將供試藥液稀釋成一系列梯度濃度：5%己唑醇微乳劑0.8、0.2、0.05、0.012 5、0.003 125 μg·mL-1；70%丙森鋅可濕性粉劑2.025、0.675、0.225、0.075、0.025 μg·mL-1；0.3%丁子香酚可溶液劑5 000、1 000、200、40、8 μg·mL-1；3%中生菌素可濕性粉劑25 000、5 000、1 000、200、40；43%戊唑醇懸浮劑0.202 5、0.067 5、0.022 5、0.007 5、0.002 5 μg·mL-1；80%代森錳鋅可濕性粉劑2.025、0.675、0.225、0.075、0.025 μg·mL-1；3%噻霉酮水乳劑1 000、400、160、64、25.6 μg·mL-1；40%嘧霉胺懸浮劑8、2、0.5、0.125、0.031 25 μg·mL-1；50%烯酰嗎啉水分散粒劑30、15、7.5、3.75、1.875 μg·mL-1。稀釋后配制含藥PDA平板。取培養4 d的病原菌菌落，打取直徑為6 mm的菌餅，用接種針將菌餅倒扣在含藥培養基中心點上，每皿接入1個菌餅，以加入無菌水的培養基為對照。每處理重復3次。接菌后將培養皿倒置放入28 ℃恒溫培養箱中黑暗培養，5 d后采用十字交叉法測量菌落直徑，計算菌落直徑平均值，計算菌絲生長平均抑制率。

1.4 數據分析

采用DPS數據處理系統，計算出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關系數，根據EC50值評價殺菌劑毒力大小。

2 結果與分析

通過生長速率法測定9種藥劑對藍莓枝枯病菌的毒力，各藥劑對藍莓枝枯病菌的抑制效果差異明顯(圖1)，由測定結果求得毒力回歸方程(表1)。抑制作用從大到小依次為5%己唑醇>43%戊唑醇>70%丙森鋅>80%代森錳鋅>40%嘧霉胺>50%烯酰嗎啉>0.3%丁子香酚>3%噻霉酮>3%中生菌素。其中，己唑醇的抑制作用最強，EC50值為0.0166 μg·mL-1；其次是戊唑醇、丙森鋅和代森錳鋅，EC50值分別為0.076 1、0.086 6和0.105 3 μg·mL-1；嘧霉胺的抑制作用再次之，EC50值為0.546 6 μg·mL-1；烯酰嗎啉、丁子香酚和噻霉酮的抑制作用較弱，EC50值分別為13.382 1 μg·mL-1、39.351 7 μg·mL-1和55.132 1 μg·mL-1；中生菌素的抑制效果最差，EC50值為179.293 8 μg·mL-1。

A—5%己唑醇；B—43%戊唑醇；C—70%丙森鋅;D—80%代森錳鋅；E—40%嘧霉胺；F—50%烯酰嗎啉；G—0.3%丁子香酚；H—3%噻霉酮；I—3%中生菌素；J—無菌水對照。圖1 9種藥劑對藍莓枝枯病菌菌絲生長的抑制效果

表1 9種藥劑對藍莓枝枯病菌的毒力

3 小結與討論

室內毒力測定試驗結果表明，9種藥劑對藍莓枝枯病菌菌絲生長均有不同程度的抑制作用，其中5%己唑醇的抑制作用最強，EC50值僅為0.016 6 μg·mL-1，可優先考慮用于田間防效試驗；43%戊唑醇、70%丙森鋅、80%代森錳鋅和40%嘧霉胺的抑制作用也較好，EC50值在0.07～0.6 μg·mL-1之間，可以進一步用于田間防效試驗；50%烯酰嗎啉、0.3%丁子香酚、3%噻霉酮和3%中生菌素的毒力相對較弱，EC50值大于10 μg·mL-1。己唑醇

和戊唑醇都屬三唑類殺菌劑，是甾醇脫甲基化抑制劑，對真菌尤其是擔子菌門和子囊菌門引起的病害有廣譜的保護和治療作用；丙森鋅和代森錳鋅都是廣譜、高效的保護性殺菌劑；嘧霉胺是苯氨基嘧啶類殺菌劑，抑制病菌侵染酶的分泌從而阻止病菌侵染，并殺死病菌。以上3類殺菌劑的作用原理不同，可以在田間防效試驗的基礎上，考慮三類藥劑的輪流施用，以達成高效防治病害，并有效防止抗藥性的產生。

本研究僅就9種殺菌劑對烏飯樹擬莖點霉菌的室內毒力進行了分析，并未開展藍莓枝枯病防治的田間試驗，因氣候和環境因子對藥劑藥效的發揮具有較大影響，其田間防治效果還有待進一步研究。