氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS/MS）測(cè)定蔬菜中氯氰菊酯的不確定度評(píng)定

張琪瑋，李 銘

（甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，甘肅蘭州730050）

不確定度反映了在檢測(cè)過程中由誤差導(dǎo)致的實(shí)際值出現(xiàn)偏差的大小程度，是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確程度的一種評(píng)價(jià)指標(biāo)和方式[1]。在實(shí)際工作中，當(dāng)出現(xiàn)臨界值的結(jié)果時(shí)，不確定度的說明尤為重要，不僅體現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)態(tài)度，更是對(duì)結(jié)果的判定起到了科學(xué)評(píng)估的作用。評(píng)定一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的不確定度，在檢驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果中起著重要的作用，指導(dǎo)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制。

在蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測(cè)中，氯氰菊酯的不合格率相對(duì)較高，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果在限量附近時(shí)，實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果直接關(guān)系到所檢樣品是否合格的判定[2]。本文根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)《GB 23200.8-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》[3]，參考JJF1059.1-2012《測(cè)量不確定度與表示》[4]和CNAS-GL006《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》[5]，使用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)蔬菜中的氯氰菊酯，并進(jìn)行不確定度的評(píng)定。

旨在掌握氣質(zhì)法測(cè)定農(nóng)藥殘留的不確定度來源，以改進(jìn)檢驗(yàn)過程的操作，對(duì)引起誤差的方面充分認(rèn)識(shí)并重視，使得檢驗(yàn)結(jié)果更加科學(xué)、合理，更好地為監(jiān)管服務(wù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 賽默飛世爾TSQ 9000氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（賽默飛世爾科技有限公司）、KH30R-Ⅱ高速冷凍離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司）、T18均質(zhì)儀（德國(guó)IKA公司）、N-EVAP氮吹儀（美國(guó)Organomation公司）、XH-D渦旋混勻器（無錫沃信制造有限公司）、MS3振蕩器（德國(guó)IKA公司）、CPA225D十萬分之一電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）、萬分之一電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）。

1.1.2 試劑 氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（101μg/ml）（北京振翔科技有限公司）、乙腈（德國(guó)Merck公司）、正己烷（德國(guó)Merck公司）、丙酮（天津科密歐公司）、QuEChERS萃取鹽包（5982-5650）（美國(guó)Agilent公司）、QuEChERS凈化試劑（5982-5156）（美國(guó)Agilent公司）、超純水（Milli-Q自制），蔬菜為市售黃瓜。

1.2 檢驗(yàn)方法

精密稱取5g粉碎的試樣于離心管，加入10.00ml乙腈，再加入QuEChERS萃取鹽包，渦旋混合均勻1 min，在室溫下靜置5 min后4 000 r/min離心10 min，取上清液，待凈化。將以上的全部上清液轉(zhuǎn)入QuEChERS凈化管中，混勻，渦旋1min，4000r/min在4℃離心10 min，取2 ml上清液在40℃水浴中氮?dú)獯到桑瑴?zhǔn)確加入1.00 ml正己烷，溶解混勻，過0.22μm有機(jī)濾膜后，由氣質(zhì)聯(lián)用儀上機(jī)檢測(cè)。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（101μg/ml），用正己烷逐步稀釋至10 ml容量瓶中，得到標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，于4℃避光保存。

1.4 儀器條件

氣相色譜條件：HP-5MS氣相色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25μm），升溫條件為初始溫度100℃，恒溫1 min，30℃/min升溫至180℃，再以10℃/min的速率升溫至300℃，并保持6 min；流速為1.0 ml/min；進(jìn)樣量1.0μl；分流方式為不分流。

串聯(lián)質(zhì)譜條件：電子轟擊（EI）離子源；離子源溫度230℃；電子能量70 eV；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜傳輸線溫度280℃；溶劑延遲4.0 min。

氯氰菊酯的離子對(duì)為163.0-＞91.0，碰撞能量為15ev；163.0-＞127.0，碰撞能量為10 eV。

2 數(shù)學(xué)模型建立

2.1 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)檢測(cè)方法建立蔬菜中農(nóng)藥殘留含量的數(shù)學(xué)模型，見下式：

式中，x為樣品中農(nóng)藥殘留的含量，單位為mg/kg；c為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的待測(cè)樣品的濃度，單位為μg/ml；V為待測(cè)樣品的定容體積，單位為ml；f為稀釋倍數(shù)，本文中為1；m為樣品取樣量，單位為g。

2.2 不確定度來源的分析

不確定度來源的分析見圖1。

3 不確定度的來源識(shí)別和分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

3.1.1 單標(biāo)儲(chǔ)備液引入的不確定度 所使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為101μg/ml±3%，按均勻分布計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)不確定度

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過程中引入的不確定度 標(biāo)準(zhǔn)溶液轉(zhuǎn)移用200μl的移液槍，根據(jù)說明書允差為0.34%，配制溫度近20℃，溫度影響可以忽略，按正態(tài)分布，其不確定度

3.1.3 定容引入的不確定度 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制使用10 ml容量瓶定容，由《常用玻璃量器檢定規(guī)程》可知，10 ml的A級(jí)容量瓶的示值允差為±0.030 ml，按三角分布配制溫度近20℃，溫度影響可以忽略，其

綜上，標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度：u1，rel=

3.2 樣品稱重引入的不確定度

根據(jù)天平的說明書，萬分之一天平稱量0～50 g的物重時(shí)，最大允許誤差為+0.005 0 g，按照均勻分布方式，稱重引入的不確定度：

由于重復(fù)稱量2次，一次是空盤，另一次是稱量樣品，產(chǎn)生的不確定度為（同一天平）：相對(duì)不確定度：um，rel=4.1/（5×1 000）=0.000 82。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度

由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的標(biāo)準(zhǔn)偏差可由下式標(biāo)示[6]：

3.4 待測(cè)樣品溶液定容引入的不確定度

樣品經(jīng)復(fù)容時(shí)，需定容至1.00ml，使用1000.0ul的移液槍，允差為±0.5%，按均勻分布考慮，由定容引入的不確定度

3.5 儀器測(cè)量重復(fù)性引入的不確定度

在相同的儀器條件下，將一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)測(cè)量5次，分別得到色譜峰相應(yīng)值A(chǔ)，按貝塞爾公式計(jì)算單次實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差s為2.9%，urel（rep）=s/A平=2.9%/1896=0.00153%。

3.6 樣品前處理引入的不確定度

樣品前處理過程的每一步都有引入誤差的可能性，由于前處理過程的振蕩、渦旋混勻、轉(zhuǎn)移等過程無法定量，由此確定每一步引入的不確定度比較困難。實(shí)際中可采用檢驗(yàn)方法的回收率來評(píng)定前處理過程引入的不確定度。做9個(gè)添加回收率，3個(gè)梯度3個(gè)平行樣，不確定度由平均回收率X和標(biāo)準(zhǔn)偏差s進(jìn)行計(jì)算

4 合成不確定度、擴(kuò)展不確定度與結(jié)果表示

表1 結(jié)果平均值

U=X×urel=0.016×0.037=0.000 592 mg/kg

當(dāng)置信概率為95%，k=2時(shí)，擴(kuò)展不確定度U=2×0.000 592=0.001 2 mg/kg。

當(dāng)稱樣量為5 g左右時(shí)，氯氰菊酯的含量為（0.016±0.001 2）mg/kg。

5 結(jié)論

綜上所述，測(cè)量結(jié)果的不確定度主要來源于標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，其次是樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程引入的不確定度，此結(jié)論與眾多類似研究結(jié)果基本一致[2]。

由評(píng)定結(jié)果可見，增加標(biāo)準(zhǔn)系列濃度的個(gè)數(shù)來改善線性，可以減少標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度[2]。樣品前處理過程為人為操作，需要規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作，保持一致性來提高回收率，可以將操作規(guī)范說明細(xì)化，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。此外，選用更加精密的量器具也可以將不確定度進(jìn)一步減少。