新型隱球菌莢膜多糖對肺隱球菌病的診斷價值

卜丹霞，楊春超，黃云平，冼觀秀

湛江中心人民醫院，廣東 湛江524054

肺隱球菌病（PCD）是由隱球菌屬中新生隱球菌引起的一種肺部真菌感染，臨床上主要以亞急性或慢性起病多見。該病起病隱匿，臨床表現不典型，也缺乏簡單有效的診斷手段，常被誤診為肺癌或其他肺部疾病［1］。隱球菌進入人體后菌體外周莢膜明顯增厚，而莢膜為隱球菌主要致病物質，與菌體的繁殖、定植密切相關，且具有抗原性［2］。血清乳膠凝集試驗（LAT）隱球菌莢膜多糖抗原的常用檢測方法，具有操作簡單、快速等特點，且對肺部隱球菌感染診斷敏感性和特異性均較高［3］。本研究針對疑似PCD患者采用LAT檢測新型隱球菌莢膜多糖，探討新型隱球菌莢膜多糖檢測對PCD的診斷價值，旨在為其臨床應用提供可靠依據。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年12月湛江中心人民醫院收治的疑似PCD患者83例，其中男58例，女25例；年齡19～78歲，平均年齡（48.95±5.73）歲；所有患者年齡＞18歲，均自愿參加研究并簽署知情同意書；排除人類免疫缺陷病毒（HIV）感染，器官移植史，嚴重心肺肝腎功能不全等疾病及臨床資料不全者。

1.2 方法

83例患者入院后治療前均行LAT、肺組織鏡檢及培養、肺組織病理檢查。（1）LAT。患者取晨起空腹靜脈血4 ml置于無菌無抗凝管中，1 000 r/min離心15 min后取上清液，置于-20℃冰箱內冰凍保存待檢。試劑盒來源于美國Immuno-Mycologics公司，檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。（2）肺組織鏡檢及培養。采用CT或B超引導下經皮肺穿刺活檢。將取出部分肺穿組織標本注入培養皿內送檢病原學培養，再抽取少量肺組織標本涂片后直接鏡檢和細胞學檢查。（3）肺組織病理檢查。肺穿刺活檢中取少量組織應用4%甲醛液固定，石蠟包埋、組織切片后進行HE染色和特殊染色如抗酸染色、六胺銀染色（GSM）、過碘酸雪夫染色（PSA）檢查等。

1.3 診斷金標準

經肺組織病理活檢或者組織培養出隱球菌結合特殊染色GSM、過PSA陽性及抗酸染色陰性確診。

1.4 觀察指標

（1）根據PCD診斷金標準，觀察3種檢測方法對PCD的檢測結果；（2）根據PCD診斷金標準，3種檢測方法對PCD的準確性、敏感性和特異性。

1.5 統計學方法

數據采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計數資料采用例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3種檢測方法對肺隱球菌病的檢測結果

根據PCD診斷金標準，83例患者診斷為PCD 26例（31.32%）。3種檢測方法對肺隱球菌病的檢測結果見表1、表2、表3。

表1 LAT對肺隱球菌病的檢測結果 例

表2 肺組織培養對肺隱球菌病的檢測結果 例

表3 肺組織病理檢查對肺隱球菌病的檢測結果 例

2.2 3種檢測方法對PCD的準確性、敏感性和特異性比較

LAT對PCD的準確性、敏感性明顯高于肺組織培養、肺組織病理檢查，差異有統計學意義（P＜0.05）；3種檢測方法對PCD的特異性均較高，但差異無統計學意義（P＞0.05），見表4。

表4 3種檢測方法對PCD的準確性、敏感性和特異性 %

3 討論

以往文獻報道，PCD主要發生于免疫功能下降或存在免疫缺陷者［4］。隨著近年來社會老齡化，心、肺、內分泌等系統常見慢性病發病率上升及免疫抑制劑、腫瘤化療等藥物的使用，使得PCD病例亦呈增多趨勢［5］。該病表現為慢性隱匿起病，臨床癥狀不典型，但病情嚴重時可侵犯中樞神經系統或引起呼吸衰竭導致死亡［6］。因此，早期、準確診斷對PCD患者的治療及預后具有重要意義。

雖然當前臨床檢驗技術不斷提升，但免疫狀態不同患者PCD臨床特點、影像學及實驗室檢查等早期均無明顯特異性，給早期診斷帶來困擾，易發生漏診、誤診，影響患者預后［7］。目前臨床上主要靠肺組織病理活檢或者經組織培養確診PCD，因診斷主要是靠有創操作取得肺組織，具有一定風險性，在早期患者、耐受性差的老年患者及重癥患者中開展受到限制［8］；同時組織真菌培養時間較長，可能混有其他定植菌的生長，導致隱球菌培養陽性率低等問題［9］，因此上述兩種檢測方式早期診誤率及漏診率仍較高［10］。

新型隱球菌屬于環境腐生菌，是一種機會性感染病原體，進入機體后菌體周圍會形成一層厚厚的莢膜，后者具有輔助菌體逃逸巨噬細胞的吞噬作用［11］。因此，莢膜為隱球菌主要致病物質及具有抗原性［12］。LAT作為一種新興的免疫檢測方法，以標準大小的乳膠顆粒為載體吸附高效價的隱球菌莢膜多糖抗體，可對血液中隱球菌莢膜多糖抗原進行早期篩查診斷，因其具有操作簡單、快速等特點，且陽性率及特異性均較高，近年來已作為隱球菌感染輔助診斷方法廣泛應用于臨床［13-14］。研究證實，隱球菌莢膜抗原檢測不僅是一種高效、快速的PCD診斷方法，還可用于患者療效的評價［15］。本研究針對疑似PCD患者在入院后治療前均行LAT、肺組織培養、肺組織病理檢查，發現LAT對PCD的準確性、敏感性明顯高于肺組織培養、肺組織病理檢查，3種檢測方法對PCD的特異性均較高，但差異無統計學意義，表明相較于病灶組織培養和病理檢查，LAT檢測隱球菌莢膜抗原對診斷PCD具有更高的敏感性和準確性，可作為該病早期輔助診斷方法。但隱球菌莢膜抗原結果可受各種因素影響造成假陽性及假陰性［16］，本研究中亦發現假陽性及假陰性。臨床試驗發現，試劑因素、標本污染、其他病原體感染等可造成隱球菌莢膜抗原結果假陽性或假陰性，類風濕因子陽性可出現假陽性，感染早期、莢膜抗原濃度低、莢膜抗原濃度過高導致前帶現象、感染菌株少造成分泌的可溶性抗原含量低等則可造成假陰性［17］。因此，隱球菌莢膜抗原檢測目前只限于PCD的定性診斷，并未達到金標準診斷水平，需進行更多的大型臨床研究來完善該檢查的診斷價值。