肺炎支原體肺炎患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平與心肌損傷的關系

崔瑩瑩，王 琳，王玲玲

肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP)是肺炎支原體引起的肺部急性炎癥，在嬰幼兒及兒童中發病率較高，其具有病程時間長、易反復等臨床特征，但MPP的具體發病機制尚未完全闡明[1]。既往研究表明，肺炎支原體可通過激活機體免疫系統進而引起應答反應，其中炎癥病理改變參與MPP發病過程[2]。因而，探尋MPP發生及發展相關血清因子特異性改變對提高臨床診療效果具有重要意義。單核細胞趨化蛋白1(monocyte chemottractant protein 1, MCP-1)又稱為CC類趨化因子配體2(C-C motif chemokine ligand 2, CCL2)，研究顯示CCL2可在重度顱腦損傷患者神經炎性反應過程中發揮促炎作用并可用于判斷腦損傷嚴重程度[3]。巨噬細胞炎性蛋白1β(macrophage inflammatory protein-1β, MIP-1β)又稱為CC類趨化因子配體4(C-C motif chemokine ligand 4, CCL4)，研究表明CCL4可促使細胞釋放促炎介質進而促進感染疾病或炎性反應的發生及發展[4]。有相關研究表明，肝炎患者外周血中CXC趨化因子配體8(C-X-C motif chemokine ligand 8, CXCL8)與CXC趨化因子配體9(C-X-C motif chemokine ligand 9, CXCL9)水平均明顯升高，且能夠促進炎性反應發生過程[5]。關于MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平變化的研究相對較少。同時肺炎支原體感染還能夠損傷患兒的腎臟、肝臟等重要臟器，并能造成不同程度的心肌損傷。還有研究表明，部分MMP患兒會出現心律失常等臨床表現，且嚴重影響患兒生長發育[6]。有相關研究表明，CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均與心律失常的發生及發展有關[7]。因此，本研究主要探討MPP患兒外周血中CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平的變化，并分析其與MPP患兒心律失常的關系，為進一步揭示MPP發病機理提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年3月—2019年5月我院收治的MPP患兒72例為研究對象。其中男42例，女30例；年齡為1～10(5.16±1.62)歲。①納入標準：均符合MPP的相關診斷標準[8]，且經臨床癥狀及影像學檢查確診；血清抗-MP-IgM呈陽性且痰培養為陰性；均無免疫系統性疾病；近期未服用皮質激素；均無呼吸道及全身性感染疾病；確診前均無心律失常或心臟疾病史。②排除標準：近期使用免疫抑制劑患兒；合并慢性或急性肝臟疾病患兒；合并腎病綜合征患兒；合并支氣管哮喘患兒；合并變應性鼻炎及自身免疫性疾病患兒。根據MPP患兒疾病嚴重程度分為MPP輕癥組54例與MPP重癥組18例[9]。根據心電圖檢測結果，將MPP患兒分為非心律失常組60例和心律失常組12例，其中竇性心律過速5例，房性或室性期前收縮2例，心臟傳導異常1例，室性心動過速2例，竇性心動過緩2例。另選取同期門診體檢健康兒童35例為對照組，其中男18例，女17例；年齡為10個月～8(4.85±1.21)歲。對照組與MPP組的性別和年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，受試兒童家屬均知情且簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1采集血液樣本：分別采集所有受試兒童外周靜脈血10 ml，置于無菌Eppendorf試管內，冷凍離心機離心，離心機轉速為3000 r/min，時間為10 min，離心后吸取上層血清置于另一試管內，置于-80℃超低溫冰箱保存待測。

1.2.2外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平檢測：采用ELISA法檢測外周血CCL2、CCL4、CXCL9水平，采用固相夾心ELISA法檢測CXCL8水平，使用多功能酶標儀(美國Bio-tek公司)進行檢測，檢測試劑盒均購自武漢默沙克生物科技有限公司。

1.2.3血清急性時相蛋白水平檢測：血清急性時相蛋白包括C-反應蛋白(C-reactive protein, CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein, α1-AGP)、觸珠蛋白(haptoglobin, HP)、銅藍蛋白(ceruloplasmin, CP)，采用速率散射比濁法檢測血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平，使用ARRAAY360特定蛋白分析儀(美國Beckman公司)進行檢測。

1.2.4心電圖及心肌酶譜指標檢測：采用12導聯心電工作站對所有患兒行24 h動態心電圖檢測并記錄心律失常發生情況。心肌酶譜指標主要包括乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)、α-羥丁酸脫氫酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase, α-HBDB)、磷酸肌酸激酶(creatine kinase, CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB, CK-MB)，使用CM-800全自動生化分析儀(基蛋生物科技股份有限公司)進行檢測。

2 結果

2.1血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比較 對照組、MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)。MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均顯著高于對照組(P<0.05)，且MPP重癥組顯著高于MPP輕癥組(P<0.05)。見表1。

表1 3組研究對象血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比較

注：對照組為體檢健康兒童；MPP為肺炎支原體肺炎，CCL2為CC類趨化因子配體2，CCL4為CC類趨化因子配體4，CXCL8為CXC趨化因子配體8，CXCL9為CXC趨化因子配體9；與對照組比較，aP<0.05；與MPP輕癥組比較，cP<0.05。

2.2血清急性時相蛋白水平比較 對照組、MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平比較差異均有統計學意義(P<0.05)。MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平均顯著高于對照組(P<0.05)，且MPP重癥組顯著高于MPP輕癥組(P<0.05)。見表2。

表2 3組研究對象血清急性時相蛋白水平比較

注：對照組為體檢健康兒童；MPP為肺炎支原體肺炎，CRP為C-反應蛋白，α1-AGP為α1-酸性糖蛋白，HP為觸珠蛋白，CP為銅藍蛋白；與對照組比較，aP<0.05；與MPP輕癥組比較，cP<0.05。

2.3MPP患兒血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9與急性時相蛋白的相關性分析 Pearson法分析顯示，CCL2、CCL4均與CRP、α1-AGP、HP、CP呈顯著正相關(P<0.05或P<0.01)。CXCL8、CXCL9均與CRP、α1-AGP呈顯著正相關(P<0.05或P<0.01)，且均與HP無明顯相關性(P>0.05)。CXCL9與CP呈顯著正相關(P<0.05)，而CXCL8與CP無明顯相關性(P>0.05)。見表3。

2.4心律失常組與非心律失常組外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比較 心律失常組的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均顯著高于非心律失常組(P<0.01)。見表4。

2.5心律失常組與非心律失常組心肌酶譜指標比較 心律失常組的LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平均顯著高于非心律失常組(P<0.05或P<0.01)。見表5。

2.6心律失常患兒CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9與心肌酶譜的相關性分析 Pearson法分析結果顯示，CCL2、CXCL8、CXCL9均與LDH、α-HBDB、CK、CK-MB呈顯著正相關(P<0.05或P<0.01)。CCL4與LDH、α-HBDB、CK-MB呈顯著正相關(P<0.05)，而與CK無明顯相關性(P>0.05)。見表6。

表3 MPP患兒血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9與急性時相蛋白的相關性分析

注：MPP為肺炎支原體肺炎，CCL2為CC類趨化因子配體2，CCL4為CC類趨化因子配體4，CXCL8為CXC趨化因子配體8，CXCL9為CXC趨化因子配體9，CRP為C-反應蛋白，α1-AGP為α1-酸性糖蛋白，HP為觸珠蛋白，CP為銅藍蛋白

表4 心律失常組與非心律失常組MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比較

注：MPP為肺炎支原體肺炎，CCL2為CC類趨化因子配體2，CCL4為CC類趨化因子配體4，CXCL8為CXC趨化因子配體8，CXCL9為CXC趨化因子配體9；與非心律失常組比較，bP<0.01

表5 心律失常組與非心律失常組MPP患兒心肌酶譜指標比較

注：MPP為肺炎支原體肺炎，LDH為乳酸脫氫酶，α-HBDB為α-羥丁酸脫氫酶，CK為磷酸肌酸激酶，CK-MB為磷酸肌酸激酶同工酶；與非心律失常組比較，aP<0.05，bP<0.01

表6 心律失常MPP患兒CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9與心肌酶譜的相關性分析

注：MPP為肺炎支原體肺炎，CCL2為CC類趨化因子配體2，CCL4為CC類趨化因子配體4，CXCL8為CXC趨化因子配體8，CXCL9為CXC趨化因子配體9，LDH為乳酸脫氫酶，α-HBDB為α-羥丁酸脫氫酶，CK為磷酸肌酸激酶，CK-MB為磷酸肌酸激酶同工酶

3 討論

MPP是兒科中常見疾病，肺炎支原體是主要病原體[10]。因此，探究MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平變化及其臨床意義，并分析其與心律失常的關系，有助于臨床對MPP的診斷及評估病情。

新型H1N1流感病毒感染患者外周血中CCL2表達水平明顯升高且與疾病進展有關，并可評估患者預后[11]。有實驗研究表明，病毒性心肌炎小鼠血清及心肌組織中CCL4均呈高表達，并可加重體內炎性反應，且與心肌病變程度密切相關[12]。CXCL9可誘導并趨化T淋巴細胞或單核細胞，有研究表明CXCL9可參與系統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的發生及發展過程[13]。有研究顯示,CXCL8可促使多種炎性細胞趨化至肺部組織，并促使其釋放血管活性物質進而損傷肺組織[14]。關于CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9與MPP的相關研究相對較少。本研究結果顯示，MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均顯著高于對照組，且MPP重癥組顯著高于MPP輕癥組，說明CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均參與MPP的發生發展過程，且隨著疾病進展其表達水平也明顯升高。提示CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9可以作為判斷MPP疾病進展或嚴重程度判定的重要指標。

血清急性時相蛋白與機體應激反應有關，機體處于感染、免疫功能異常及組織損傷狀態時可觸發全身性炎性反應并刺激肝臟合成急性時相蛋白，進而提高其表達水平[15]。本研究結果顯示，MPP輕癥組和MPP重癥組的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平均顯著高于對照組，且MPP重癥組顯著高于MPP輕癥組，說明隨著疾病嚴重程度增加機體反應性隨之增強，進而導致急性時相蛋白水平升高。提示急性時相蛋白可反映MPP病情進展。進一步分析結果顯示，CCL2、CCL4均與CRP、α1-AGP、HP、CP呈正相關，CXCL8、CXCL9均與CRP、α1-AGP呈正相關，CXCL9與CP呈正相關，說明MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平異常升高可能促使急性時相蛋白合成增加，進而加重疾病進展。提示MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高與疾病進展密切相關。

隨著MPP疾病嚴重程度增加導致心血管系統受累，其中心律失常是主要表現形式。有臨床研究表明，心律失常是重癥MPP的主要判斷標準[16]。CCL2可參與心肌重構、心肌缺血等病理過程，研究表明CCL2可促使骨髓成纖維細胞募集至心臟進而促進心肌纖維化過程，可為心肌損傷的發生提供基礎[17]。CCL4在心律失常性右心室心肌病患者中呈高表達，并可促進炎性因子釋放[18]。CXCL8可增加體內基質金屬蛋白酶(MMP)分泌量，而MMP又可參與血管重構、動脈粥樣硬化及心肌基質膠原降解等病理過程，進而引發心律失常甚至心力衰竭[19]。相關研究表明，CXCL9可直接與G蛋白偶聯受體CXCR3相互作用并降低細胞膜電流進而影響電穩定性導致心律失常的發生[20]。本研究結果顯示，心律失常組血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均顯著高于非心律失常組，說明隨著MPP患兒疾病進展為心律失常，其外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9表達水平均明顯升高。提示CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高可促使MPP患兒發生心律失常。CRP與心肌酶譜指標水平升高均可反映患者發生心肌損傷，研究表明LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平高低均可反映MPP患兒心肌受損情況[21]。本研究結果顯示，心律失常組LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平均顯著高于非心律失常組，進一步分析結果顯示，CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均與LDH、α-HBDB、CK-MB呈正相關，說明MPP患兒發生心律失常時外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平高低可反映心肌損傷程度。提示外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高可能與MPP患兒發生心肌損傷有關。

綜上所述，MPP患兒外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均明顯升高并與疾病嚴重程度密切相關，檢測其水平有助于判斷MPP患兒是否發生心肌損傷，并可針對性地采取有效干預措施延緩MPP疾病進展，進而降低心肌損傷的發生率。本研究還存在不足之處，關于CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9在MPP發生及發展過程中的具體作用機制及其可能作用信號通路均需深入研究。