扁平苔癬皮損組織CD147、MMP-3及MMP-7表達及意義

[摘要]目的 探討細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子（CD147）、基質金屬蛋白酶-3（MMP-3）及基質金屬蛋白酶-7（MMP-7）在扁平苔癬皮損組織中的表達及其臨床意義。方法 采用免疫組化方法檢測并比較40例扁平苔癬皮損及30例正常皮膚組織中CD147、MMP-3、MMP-7的表達。結果 扁平苔癬皮損組織中CD147、MMP-7的表達高于對照組（Z=-3.267、-2.331，Plt;0.05），且兩者表達呈正相關（r=0.587，Plt;0.05）;兩組MMP-3表達差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 MMP-7、CD147在扁平苔癬皮損組織中表達上調，兩者可能在扁平苔癬的發病中發揮重要作用。

[關鍵詞] 扁平苔癬;Basigin;基質金屬蛋白酶3;基質金屬蛋白酶7;免疫組織化學

[中圖分類號] R758.65 [文獻標志碼] A [文章編號] 2096-5532（2020）04-0455-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2020.56.085

[網絡出版] http：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20200519.1445.015.html;2020-05-19 17：19

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF EXTRACELLULAR MATRIX METALLOPROTEINASE INDUCER， MATRIX METALLOPROTEINASE-3， AND MATRIX METALLOPROTEINASE-7 IN SKIN LESIONS OF LICHEN PLANUS

ZHANG Cuiping， WANG Jun， LI Yuanyuan， WANG Yingying

（Department of Dermatology， Affiliated Hospital of Qingdao University， Qing-dao 266003， China）

[ABSTRACT]Objective To investigate the expression and clinical significance of extracellular matrix metalloproteinase inducer （CD147）， matrix metalloproteinase-3 （MMP-3）， and matrix metalloproteinase-7 （MMP-7） in skin lesions of lichen planus （LP）.Methods Immunohistochemistry was used to measure and compare the expression of CD147， MMP-3， and MMP-7 in 40 cases of lichen planus lesions and 30 cases of normal skin tissues. Results Lichen planus lesions had significantly higher expression of both CD147 and MMP-7 than the control group （Z=-3.267，-2.331;Plt;0.05）， and the expression of CD147 and MMP-7 was positively correlated with each other （r=0.587，Plt;0.05）. Lichen planus lesions also had higher expression of MMP-3 than the control group， but the difference was not statistically significant （Pgt;0.05）.Conclusion The expression of MMP-7 and CD147 is up-regulated in skin lesions of lichen planus; MMP-7 and CD147 may play important roles in the pathogenesis of lichen planus.

[KEY WORDS] lichen planus; Basigin; matrix metalloproteinase 3; matrix metalloproteinase 7; immunohistochemistry

扁平苔癬是一種發生在皮膚、黏膜、指（趾）甲的慢性炎癥性皮膚病，主要病理表現為基底細胞液化變性及真皮上部界面炎癥反應帶。其病因及發病機制目前尚未完全明了。近年來國內外關于口腔扁平苔癬組織中基質金屬蛋白酶（MMPs）表達的研究較多，結果認為MMPs作為蛋白酶參與了細胞外基質（ECM）的降解，可能在扁平苔癬基底細胞及基底膜損傷中發揮重要作用[1-3]。作為MMPs的上游調控因子[4]，CD147可誘導MMPs的活化并導致腫瘤的侵襲[5-7]。目前，國內外對于皮膚扁平苔癬中MMP-3、MMP-7、CD147表達的研究不多。本文檢測扁平苔癬皮損組織中CD147、MMP-3、MMP-7的表達情況，探討三者間關系及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象

2017年3月—2019年3月，選取我科收治、經組織病理檢查確診為皮膚扁平苔癬病人的組織標本40例，其中男20例，女20例;年齡22～69歲，平均47.40歲;病程1月～10年，平均13.9月;14例取材于軀干，26例取材于四肢;所有病人均排除其他系統性疾病，均未系統使用糖皮質激素治療。同期選取我院美容外科手術切除的正常皮膚組織標本30例作為正常對照組，其中男12例，女18例;年齡為17～70歲，平均32.20歲;15例取材于軀干，15例取材于四肢;均排除其他系統性疾病。兩組年齡、性別及取材部位差異均無統計學意義。所取標本均經甲醛固定、石蠟包埋、切片。

1.2 主要試劑

一抗：包括兔抗人 MMP-3多克隆抗體、兔抗人 MMP-7多克隆抗體、兔抗人 CD147多克隆抗體（均購自北京博奧森生物技術有限公司）;通用型二抗PV-6001、二氨基聯苯胺（DAB）試劑、免疫組化筆（北京中杉金橋公司）。

1.3 實驗方法

將標本切片置于64 ℃的烤片機上60 min后，經脫蠟、抗原修復、體積分數0.03過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶、加一抗（CD147、MMP-3、MMP-7，滴度分別為1∶300、1∶150、1∶150）、加二抗PV-6001、DAB顯色、蘇木精復染、脫水、中性樹膠封片等步驟，光鏡下觀察染色情況。

1.4 結果判斷

CD147、MMP-3、MMP-7陽性細胞染色淡黃色至棕褐色。光鏡下，每張切片隨機選取5個視野，每個視野計數100個細胞。染色結果依據半定量法進行判斷。染色強度評分：基本不著色0分，淡黃色為1分，棕褐色為2分;陽性細胞百分比評分：lt;5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，gt;50%為3分。以細胞染色強度與陽性細胞百分比評分的乘積判定結果：0～1分為陰性，2～3分為陽性，4分及其以上為強陽性，分別用（-）、（+）、（）表示。

1.5 統計學處理

采用SPSS 24.0軟件進行統計學處理，計數資料組間比較均采用曼-惠特尼秩和檢驗，相關分析采用Spearman法。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

扁平苔癬皮損組織中CD147陽性染色主要表現為表皮基底層、棘層、顆粒層細胞膜和細胞漿出現棕黃色顆粒，而正常對照組表皮基底層、棘層及顆粒層淺著色。扁平苔癬皮損組織中MMP-3陽性染色主要表現為表皮基底層細胞漿出現棕黃色顆粒，正常對照組表皮基底層細胞漿亦出現MMP-3陽性染色。扁平苔癬皮損組織MMP-7陽性染色表現為表皮基底層、棘層及顆粒層細胞漿和（或）細胞核均出現棕黃色顆粒，而正常對照組表皮基底層、棘層及顆粒層淺著色（圖1）。扁平苔癬組CD147、MMP-7表達高于正常對照組，差異具有顯著意義（Z=-3.267、-2.331，Plt;0.05）;兩組MMP-3表達差異無顯著性（Pgt;0.05）。見表1。Spearman相關分析顯示，扁平苔癬皮損組織中MMP-7與CD147表達呈正相關（r=0.587，Plt;0.05）。

3 討 論

MMPs屬于鋅依賴性內肽酶家族，能夠降解ECM的多種成分[8-10]，正常表達水平的MMPs參與生長發育過程中ECM的重構以及細胞的增殖、遷移和黏附等，參與機體多種生理功能的調控;而MMPs的異常表達往往與炎癥、腫瘤以及心血管疾病有關[11-14]。既往研究顯示，MMP-2、MMP-9與扁平苔癬的發病機制相關[15-18]。作為MMPs家族的重要成員，MMP-3、MMP-7是否參與了扁平苔癬發病尚不清楚。MMP-3能夠降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原及纖連蛋白、蛋白聚糖、層粘連蛋白、明膠等，不僅在破壞細胞間橋、導致細胞凋亡中發揮重要作用，還能激活前體MMP-1、前體MMP-9[19]。有研究結果顯示，MMP-3表達上調與口腔扁平苔癬的發病機制相關[20-21];其表達水平與口腔扁平苔癬的嚴重程度有關[22]，但其與皮膚扁平苔癬嚴重程度是否相關有待進一步研究。GUNDUZ等[1]研究顯示，扁平苔癬皮損組織中MMP-2、MMP-3及纖連蛋白表達缺失，而正常皮膚組織上述因子尤其是MMP-3均有表達，主要表達在基底細胞層，認為上述因子表達缺失與扁平苔癬皮損組織炎癥反應有關。本文研究結果顯示，皮膚扁平苔癬中MMP-3表達雖有上調，但與對照組比較差異無統計學意義。分析其原因可能為：皮膚扁平苔癬與口腔扁平苔癬發病機制可能存在差異，或與研究樣本量大小、染色方法及判斷標準不同有關，其具體原因有待大樣本研究進一步證實。

MMP-7也屬于MMPs家族中重要的成員之一，是上皮特異性產物，有較強降解Ⅳ膠原的作用，并與上皮細胞凋亡相關。有研究表明，MMP-3與MMP-7在正常口腔黏膜、口腔扁平苔癬及口腔鱗癌

中的表達逐漸增高，MMP-3、MMP-7在侵襲過程中表達上調，與侵襲性相關[23-25]。這或許為甄別口腔扁平苔癬的惡變提供了可能。還有研究顯示，口腔扁平苔癬口腔黏膜上皮與結締組織MMP-7的表達高于正常口腔黏膜[23]，MMP-7與組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）的比值高于對照組[24]，認為MMP-7及MMP-7/TIMP的表達失調可能參與了口腔扁平苔癬的發病。本文研究顯示，MMP-7在扁平苔癬皮損組織的基底層、棘層及顆粒層均有表達，并且MMP-7的表達明顯高于正常對照組，表明MMP-7可能在扁平苔癬發病中發揮重要作用。

CD147又稱細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子，是一種跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白家族，最初從惡性腫瘤細胞的質膜中分離得到[26]，主要表達于腫瘤細胞、表皮細胞、免疫細胞、內皮細胞等[27]，可誘導多種MMPs的活化，包括MMP-2、MMP-3、MMP-7及MMP-9等[5]，在腫瘤進展中起重要作用[28-29]。有研究結果表明，CD147能刺激MMPs的分泌，但對TIMPs并不產生影響，導致MMPs與TIMPs的失衡，從而導致基底膜與腫瘤外基質的降解，引起腫瘤的侵犯與轉移[30]。一項對于甲狀腺濾泡癌（FTC）的研究顯示，CD147、MMP-3、MMP-7、MMP-9在人FTC組織中表達上調，并且培養的PTC-131細胞中MMP-3、MMP-7、MMP-9的表達依賴于CD147的調節[5]。本文研究結果顯示，與正常對照組比較，扁平苔癬皮損組織中MMP-3的表達差異無統計學意義，MMP-7、CD147表達上調，且MMP-7、CD147表達呈正相關，推測CD147可能通過誘導MMP-7的活化，促進其分泌而協同參與扁平苔癬的發病，其具體作用機制有待于進一步研究。

綜上所述，扁平苔癬皮損組織中的CD147及MMP-7表達上調，且兩者表達呈正相關，提示兩者在扁平苔癬發病中可能發揮重要作用，至于兩者是否直接導致扁平苔癬的發病需進一步研究證實。

[參考文獻]

[1]GUNDUZ K， DEMIRELI P， INANIR I， et al. Expression of matrix metalloproteinases （MMP-2， MMP-3， and MMP-9） and fibronectin in lichen planus[J]." Journal of Cutaneous Pathology， 2006，33（8）：545-550.

[2]PAULUSOVA V， LACO J， DRZHAL I， et al. Expression of matrix metalloproteinase 9 in patients with oral lichen planus[J]." Acta Medica （Hradec Kralove）/Universitas Carolina， Facultas Medica Hradec Kralove， 2012，55（1）：23-26.

[3]SINGH P， GROVER J， BYATNAL A A， et al. Elucidating the role of Cyclooxygenase-2 in the pathogenesis of oral lichen planus-an immunohistochemical study with supportive histochemical analysis[J]." Journal of Oral Pathology amp; Medicine， 2017，46（5）：381-386.

[4]WENG Yingzheng， CHEN Ting， REN Jianfei， et al. The association between extracellular matrix metalloproteinase indu-cer polymorphisms and coronary heart disease： a potential way to predict disease[J]." DNA and Cell Biology， 2020，39（2）：244-254.

[5]YOKO O， SHIBATA N， OKAMOTO T， et al. The role of CD147 in the invasiveness of follicular thyroid carcinoma cells[J]." Thyroid， 2012，22（4）：383-394.

[6]RODRIGUEZ C M， GILARDONI M B， REMEDI M M， et al. Tumor-stroma interaction increases CD147 expression in neoplastic B lymphocytes in chronic lymphocytic leukemia[J]." Blood Cells Molecules and Diseases， 2020，82：102405.

[7]LIAN Chengxiang， GUO Ye， ZHANG Jianglin， et al. Targeting CD147 is a novel strategy for antitumor therapy[J].nbsp; Current Pharmaceutical Design， 2017，23（29）：4410-4421.

[8]GUO Lin， HAO Ruihu， TIAN Fengde， et al. Interferon regulatory factor 5 （IRF5） regulates the expression of matrix me-talloproteinase-3 （MMP-3） in human chondrocytes[J]." International Immunopharmacology， 2018，55：231-236.

[9]浦光瑞，張虹. 基質金屬蛋白酶在口腔扁平苔癬、白斑及鱗癌中的研究進展[J]." 大連醫科大學學報， 2013，35（2）：193-196.

[10]楊雪娜，熊詠民. 基質金屬蛋白酶在骨關節疾病中的研究進展[J]." 國外醫學（醫學地理分冊）， 2019，40（4）：470-474.

[11]PAYERAS M R， CHERUBINI K， FIGUEIREDO M A， et al. Oral lichen planus： focus on etiopathogenesis[J]." Archives of Oral Biology， 2013，58（9）：1057-1069.

[12]KUSUMAWADEE U， NATTISA N， BOON-EK Y， et al. Ethanolic extract of ocimum sanctum leaves reduced invasion and matrix metalloproteinase activity of head and neck cancer cell lines[J]." Asian Pacific Journal of Cancer Prevention， 2020，21（2）：363-370.

[13]LI Aoyu， YU Hua， LI Rongfeng， et al. Inhibitory effect of metalloproteinase inhibitors on skin cell inflammation induced by jellyfish nemopilema nomurai nematocyst venom[J]." To-xins， 2019，11（3）：156.

[14]周雪. 基質金屬蛋白酶在血管炎癥中的作用[J]." 國際兒科學雜志， 2014，41（3）：253-256.

[15]杜杰，王君，趙涵，等. MMP-9，TIMP-1及ETS-1在扁平苔癬中的表達[J]." 中國皮膚性病學雜志， 2015，29（6）：569-571.

[16]徐經琦，王君，史同新，等. 扁平苔癬HIF-1α、GLUT-1及MMP-2表達及意義[J]." 青島大學學報（醫學版）， 2019，55（3）：350-353.

[17]CARNELIO S， AGARWAL N， RODRIGUES G. Immunohistochemical and clinical significance of matrix metalloprotei-nase-2 and its inhibitor in oral lichen planus[J]." Journal of Oral and Maxillofacial Pathology， 2019，23（3）：476.

[18]萬慧穎，徐敏燕，謝震，等. 扁平苔癬皮損中基質金屬蛋白酶-9、半胱氨酸蛋白酶-3的表達[J]." 四川醫學， 2018，39（8）：869-872.

[19]FARZIN M， MARDANI M， GHABANCHI J， et al. Serum level of matrix metalloproteinase-3 in patients with oral lichen planus[J]." Iranian Red Crescent Medical Journal， 2012，14（1）：10-13.

[20]NOSRATZEHI T， ALIJANI E， MOODI M. Salivary MMP-1， MMP-2， MMP-3 and MMP-13 levels in patients with oral lichen planus and squamous cell carcinoma[J]." Asian Pacific Journal of Cancer Prevention， 2017，18（7）：1947-1951.

[21]MIRZAII-DIZGAH I， AGHA-HOSSEINI F， MAHBOOBI N， et al. Serum and saliva MMP-3 in patients with OLP and oral SCC[J]." The Journal of Contemporary Dental Practice， 2015，16（2）：107-111.

[22]MAZZARELLA N， FEMIANO F， GOMBOS F， et al. Matrix metalloproteinase gene expression in oral lichen planus： erosive vs. reticular forms[J]." Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology， 2006，20（8）：953-957.

[23]LI Tiejun， JUN Cui. COX-2， MMP-7 expression in oral lichen planus and oral squamous cell carcinoma[J]." Asian Pacific Journal of Tropical Medicine， 2013，6（8）：640-643.

[24]RUBACI A H， HAKKI O K， OLGAC V， et al. The roles of matrix metalloproteinases-2， -7， -10 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in the pathogenesis of oral lichen planus[J]." Journal of Oral Pathology amp; Medicine， 2012，41（9）：689-696.

[25]MUNIZ J， BIBIANO B， BEGHINI M， et al. Galectin-9 as an important marker in the differential diagnosis between oral squamous cell carcinoma， oral leukoplakia and oral lichen planus[J]." Immunobiology， 2015，220（8）：1006-1011.

[26]BISWAS C. Tumor cell stimulation of collagenase production by fibroblasts[J]." Biochemical and Biophysical Research Communications，1982，109（3）：1026-1034.

[27]王澄儀，謝明，焦婷. 細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子在炎癥發生發展中的作用[J]." 口腔生物醫學， 2018，9（2）：95-101.

[28]LUCCHETTI D， COLELLA F， PERELLI L， et al. CD147 promotes cell small extracellular vesicles release during colon cancer stem cells differentiation and triggers cellular changes in recipient cells[J]." Cancers， 2020，12（2）：260.

[29]GUO W T， ABUDUMIJITI H， XU L X， et al. CD147 promotes cervical cancer migration and invasion by up-regulating fatty acid synthase expression[J]." International Journal of Clinical and Experimental Pathology， 2019，12（12）：4280-4288.

[30]陳加明，仝林虎，王夢霖. CD147與腫瘤關系的研究進展[J]." 世界最新醫學信息文摘， 2017，17（99）：90-93.

（本文編輯 黃建鄉）

[收稿日期]2019-09-23; [修訂日期]2020-02-17

[基金項目]山東省醫藥衛生科技發展計劃（2016WS0281）

[第一作者]張翠蘋（1992-），女，碩士研究生。

[通信作者]王君（1971-），女，碩士，副主任醫師，碩士生導師。E-mail：junwangqd@126.com。