血清Sortilin蛋白在冠心病診斷與病情評(píng)估中的臨床價(jià)值▲

劉 悟 李 峰 張育民 陽(yáng) 軍

(1 湖南省長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院心內(nèi)科， 長(zhǎng)沙市 410000，電子郵箱：263795120@qq.com；2 湖南省人民醫(yī)院心內(nèi)科，長(zhǎng)沙市 410000)

Sortilin蛋白最初作為腦組織的分揀受體蛋白受到關(guān)注，與阿爾茨海默病的發(fā)病有關(guān)。全基因組關(guān)聯(lián)分析提示，位于lp13.3基因位點(diǎn)的一種單核苷酸多態(tài)性與冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，該區(qū)域4種基因，分別是鈣粘蛋白EGF-LAG七通型受體2基因、富含脯氨酸/絲氨酸卷曲螺旋1基因、肌球蛋白結(jié)合蛋白H樣蛋白抗體基因、Sortilin 1(SORT1)基因，而與肝臟脂蛋白代謝密切相關(guān)的Sortilin蛋白由該基因位點(diǎn)的SORT1基因所編碼，且該基因可能是冠心病的發(fā)病基因[1]。隨后，有研究表明，Sortilin蛋白可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[2-3]、胰島素抵抗[4]、促進(jìn)動(dòng)脈血管壁炎癥反應(yīng)[5]、動(dòng)脈鈣化[6]以及促進(jìn)前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9)分泌[7]等多個(gè)途徑，促進(jìn)冠心病的發(fā)生發(fā)展。但Sortilin蛋白的生物學(xué)功能及臨床意義目前尚未明確。本研究探討血清Sortilin蛋白水平在冠心病診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 選取2016年10月至2017年10月在長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院行冠狀動(dòng)脈造影的187例受試者作為研究對(duì)象。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)正在接受降脂治療者；(2)近3個(gè)月來服用了降脂藥物和阿司匹林者；(3)肝腎功能異常者；(4)甲狀腺功能異常或?qū)υ煊皠┻^敏的患者；(5)年齡>75歲者；(6)近1個(gè)月來有感染性疾病或自身免疫性疾病者；(7)嚴(yán)重心力衰竭者；(8)惡性腫瘤者。根據(jù)冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果分為冠心病組117例和非冠心病組70例。其中冠心病組根據(jù)不同的臨床表型分為穩(wěn)定性心絞痛(stable angina pectoris，SAP)組72例和非ST段抬高型急性冠脈綜合征(non-ST-segment elevation acute coronary syndrome，NSTE-ACS)組45例；另外根據(jù)冠脈病變支數(shù)，將冠心病組分為單支病變組32例、雙支病變組44例及多支病變組41例。冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)：冠狀動(dòng)脈造影提示左主干、左前降支、左回旋支或右冠狀動(dòng)脈至少1 支管腔狹窄≥50%；SAP組及NSTE-ACS組分別參考2011年英國(guó)國(guó)家衛(wèi)生與臨床優(yōu)化研究所制定的穩(wěn)定性心絞痛診治指南[8]和2016中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的NSTE-ACS診斷和治療指南[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。冠心病組和非冠心病組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，入組研究對(duì)象均簽署知情同意書。

表1 冠心病組和非冠心病組的一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 血清相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)：采集研究對(duì)象清晨空腹靜脈血5 mL置于真空促凝管中，3 500 r/min離心15 min，分離血清，分裝編號(hào)后置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩２捎妹嘎?lián)免疫吸附法檢測(cè)血清Sortilin蛋白(試劑盒廠家：USCN公司；批號(hào)：92895)及PCSK9(試劑盒廠家：R&D公司；批號(hào)：DPC900)水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。C反應(yīng)蛋白、肝功能、血脂、血糖等指標(biāo)的檢測(cè)由長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科完成。

1.2.2 冠狀動(dòng)脈造影及Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：冠狀動(dòng)脈造影檢查由長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院介入手術(shù)室完成，采取多體位進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影檢查，根據(jù)Gensini評(píng)分對(duì)冠心病組患者血管病變嚴(yán)重程度進(jìn)行定量分析。Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：(1)狹窄程度評(píng)分，1%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)4分，76%～90%計(jì)8分，91%～99%計(jì)16分，100%計(jì)32分。(2)病變部位評(píng)分：左主干病變計(jì)5分，左前降支/回旋支近段計(jì)2.5分，左前降支中段計(jì)1.5分，左前降支遠(yuǎn)端計(jì)1.0分，回旋支中遠(yuǎn)段計(jì)1.0分，右冠動(dòng)脈計(jì)1.0分，小分支計(jì)0.5分。各分支積分為狹窄程度評(píng)分乘以病變部位評(píng)分，Gensini總評(píng)分為各分支積分之和。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析；血清Sortilin蛋白對(duì)冠心病的診斷價(jià)值采用受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線分析。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同病變程度組間血清Sortilin蛋白水平比較 冠心病組血清Sortilin蛋白水平為(1.78±0.65)ng/mL，高于非冠心病組的(1.42±0.91)ng/mL(t=2.897，P=0.004)。NSTE-ACS組血清Sortilin蛋白水平為(1.94±0.68)ng/mL，高于SAP組的(1.68±0.62)ng/mL(t=2.081，P=0.039)；多支病變組、雙支病變組、單支病變組血清Sortilin蛋白水平分別為(1.98±0.64)ng/mL、(1.76±0.66)ng/mL、(1.55±0.51)ng/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.810，P=0.002)，多支病變組、雙支病變組、單支病變組蛋白水平依次降低(均P<0.05)。

2.2 冠心病組血清Sortilin蛋白水平與Gensini評(píng)分等臨床指標(biāo)的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，冠心病組患者血清Sortilin蛋白水平與Gensini評(píng)分、空腹血糖、LDL-C、三酰甘油、總膽固醇、C反應(yīng)蛋白、PCSK9水平均呈正相關(guān)(均P<0.05)，見表2。

表2 冠心病組血清Sortilin蛋白水平與Gensini評(píng)分等臨床指標(biāo)的相關(guān)性

項(xiàng)目年齡r值P值三酰甘油r值P值總膽固醇r值P值C反應(yīng)蛋白r值P值體質(zhì)指數(shù)r值P值PCSK9 r值P值Sortilin蛋白0.1790.2120.323<0.0010.353<0.0010.458<0.0010.1340.4680.553 <0.001

2.3 血清Sortilin蛋白對(duì)冠心病的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清Sortilin蛋白診斷冠心病的曲線下面積為0.723(P<0.05)，敏感性為83.3%，特異性52.6%，最佳截?cái)嘀禐?.63 ng/mL 。見圖 1。

圖1 血清Sortilin蛋白診斷冠心病的 ROC曲線

3 討 論

冠心病嚴(yán)重危害人類健康，動(dòng)脈粥樣硬化是其病理基礎(chǔ)，其中血管內(nèi)皮損傷、脂質(zhì)蓄積、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡與增殖等共同參與了冠心病的發(fā)病過程，但目前具體的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[10]。另外，動(dòng)脈粥樣硬化的病因與血脂異常、糖尿病、高血壓、吸煙、家族史等多個(gè)危險(xiǎn)因素密切相關(guān)[10]。

Sortilin是Vps10P域受體家族的一員，是一種分子量為110 Kda的Ⅰ型跨膜蛋白，主要存在于細(xì)胞的反面高爾基體保、細(xì)胞膜及血漿中。1994年Zsürger等[11]通過親和層析法從人腦中首次分離純化出Sortilin蛋白，其廣泛表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、脂肪、血管壁、炎癥細(xì)胞等部位。2010年全基因組關(guān)聯(lián)分析顯示，SORT1基因可能是冠心病發(fā)病基因[1]，該基因編碼的Sortilin蛋白與冠心病及動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系逐漸成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

目前，研究表明Sortilin蛋白可能通過多種途徑如脂質(zhì)代謝、胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)、促進(jìn)PCSK9的分泌等參與動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病的發(fā)生發(fā)展。(1)脂質(zhì)代謝：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究顯示，Sortilin基因敲除小鼠的血漿LDL-C水平、動(dòng)脈粥樣斑塊面積及動(dòng)脈鈣化程度均低于野生型小鼠[112-13]。而Patel等[14]研究發(fā)現(xiàn)，特異性巨噬細(xì)胞Sortilin基因敲除小鼠血漿LDL-C水平與正常對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但主動(dòng)脈及主動(dòng)脈根部的動(dòng)脈粥樣硬化較對(duì)照組顯著減少；進(jìn)一步的體外細(xì)胞研究結(jié)果顯示，Sortilin-/-的巨噬細(xì)胞對(duì)LDL的攝取減少，并且泡沫細(xì)胞的形成也減少。(2)炎癥反應(yīng)：Mortensen等[15]利用脂多糖誘導(dǎo)Sortilin-/-巨噬細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分泌的炎癥介質(zhì)如白細(xì)胞介素6、γ干擾素明顯減少。(3)調(diào)節(jié)PCSK9的分泌：Gustafsen等[7]研究發(fā)現(xiàn)Sortilin蛋白可作為PCSK9的高親和力受體，促進(jìn)PCSK9的分泌。(4)胰島素抵抗：Rabinowich等[16]研究發(fā)現(xiàn)，Sortilin蛋白促進(jìn)脂肪和肌肉細(xì)胞中胰島素敏感型葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4存儲(chǔ)小泡的合成，并且阻礙了這些儲(chǔ)存小泡的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，這與胰島素抵抗及2型糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。另外，Goettsch等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Sortilin可直接引起動(dòng)脈鈣化，且獨(dú)立于其對(duì)血脂及血管壁炎癥的調(diào)節(jié)；同時(shí)，Sortilin蛋白可通過胞外囊泡的形式釋放入血，而血液循環(huán)中Sortilin蛋白水平與冠心病的關(guān)系如何目前尚未完全清楚。

本研究結(jié)果顯示，冠心病組血清Sortilin蛋白水平高于非冠心病組(P<0.05)，與Oh等[17]的研究結(jié)果相似。但Ogawa等[18]的研究結(jié)果顯示有高心血管風(fēng)險(xiǎn)的非冠心病患者血漿Sortilin蛋白水平高于健康人群及使用阿司匹林治療的冠心病患者，這與本研究結(jié)果不一致，究其原因可能與該研究納入的患者使用阿司匹林有關(guān)，阿司匹林可以抑制血小板的激活，而血小板的激活可以刺激Sortilin蛋白釋放入血。另外，Ogawa等的研究入選的受試者大部分接受了他汀類藥物的治療，而他汀類藥物能夠降低循環(huán)中的Sortilin蛋白水平[19]。

研究顯示，血漿Sortilin蛋白與多個(gè)冠心病危險(xiǎn)因素呈正相關(guān)[20]。LDL-C是指南[21]推薦的動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性疾病防治的首要干預(yù)靶點(diǎn)，其與冠心病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。PCSK9是冠心病機(jī)制研究的另一個(gè)熱點(diǎn)，高PCSK9水平被認(rèn)為是冠心病的新型危險(xiǎn)因素，PCSK9通過介導(dǎo)肝細(xì)胞表面的LDL受體的降解，減少肝對(duì)血清LDL-C的吸收，升高血清LDL-C水平[22]。另外有研究表明，PCSK9還可以通過降脂以外的其他機(jī)制促進(jìn)冠心病的發(fā)生發(fā)展。PCSK9單克隆抗體新藥已批準(zhǔn)上市，可使LDL-C水平降幅達(dá)到60%[23]。而高血糖、高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥及C反應(yīng)蛋白水平升高都是冠心病常見的危險(xiǎn)因素[10]。相關(guān)性分析結(jié)果顯示冠心病組血清Sortilin蛋白與空腹血糖、LDL-C、三酰甘油、總膽固醇、C反應(yīng)蛋白、血清PCSK9均呈正相關(guān)(均P<0.05)，提示Sortilin可能通過影響冠心病各種危險(xiǎn)因素水平參與冠心病的發(fā)生發(fā)展。為避免急性ST段抬高型心肌梗死應(yīng)激狀態(tài)下對(duì)炎癥指標(biāo)及代謝指標(biāo)的影響，本研究沒有納入急性ST段抬高型心肌梗死患者。本研究中，NSTE-ACS組血清Sortilin蛋白水平高于SAP組，病變累及冠脈數(shù)越多的患者血清Sortilin蛋白水平越高，且相關(guān)分析結(jié)果顯示血清Sortilin蛋白水平與Gensini評(píng)分呈正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，提示Sortilin蛋白水平越高，其冠脈病變程度越嚴(yán)重。而ROC曲線分析結(jié)果提示血清Sortilin蛋白對(duì)冠心病具有較好的診斷意義。因此，臨床上檢測(cè)Sortilin水平對(duì)冠心病的診斷及冠脈病變程度的評(píng)估具有較大的臨床意義。

綜上所述，冠心病患者血清Sortilin蛋白升高，其或可以作為冠心病診斷及病情嚴(yán)重程度評(píng)估的新型生物學(xué)標(biāo)志物。但本研究樣本量小，相關(guān)結(jié)果仍需要大規(guī)模的臨床研究來證實(shí)；且本研究未納入急性ST段抬高型心肌梗死患者，血清Sortilin蛋白對(duì)急性ST段抬高型心肌梗死的診斷價(jià)值如何仍需要進(jìn)一步研究。