魚腥草注射液原料藥材資源與質量控制研究進展

郝利軍 梁愛華 宋經元

摘要?魚腥草注射液的原料藥材只有一味魚腥草，魚腥草的品質直接影響魚腥草注射液的質量。魚腥草野外分布較廣，資源豐富，但隨著其需求量不斷提高，野生資源逐漸減少，當前魚腥草供應以人工種植為主。2006年魚腥草注射液不良反應事件引發了公眾對中藥注射劑的廣泛關注，影響深遠。本文綜述了魚腥草的鑒定、資源分布、品種選育、栽培種植、化學成分分析、農藥殘留和重金屬檢測等方面，以期規范化原料藥材的生產，為中醫臨床用藥和企業藥品生產提供安全有效的藥材，為魚腥草注射液完善質量標準和上市后再評價提供理論依據，同時對其他中藥注射劑原料藥材研究具有示范作用。

關鍵詞?魚腥草;注射液;品種選育;栽培種植;貯藏保鮮;化學成分分析;重金屬檢測

Research Progress on the Raw Material Resources and Quality Control of Houttuynia Cordata Injection

HAO Lijun1， LIANG Aihua2， SONG Jingyuan1，3

（1 Key Lab of Chinese Medicine Resources Conservation， National Administration of Traditional Chinese Medicine of the People′s Republic of China， Institute of Medicinal Plant Development， Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College， Beijing 100193， China; 2 Key Laboratory of Beijing for Identification and Safety Evaluation of Chinese Medicine Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China; 3 Engineering Research Center of Chinese Medicine Resource， Ministry of Education， Beijing 100193， China）

Abstract?The raw material of Houttuynia cordata Injection is a single ingredient，H. cordata. The quality of H.cordata directly affects the quality of H.cordata injection.H.cordata is widely distributed in the wild with abundant resources.However， the wild resources of H.cordata have gradually declined with the increasing demand.At present， the supply of H.cordata is mainly from the agricultural planting.In 2006， the adverse events of H.cordata Injection aroused the public′s extensive attention with far-reaching influence on the traditional Chinese medicine injection.This paper summarizes the identification， resource distribution， breeding， cultivation， chemical composition analysis， determination of pesticide residue， and heavy metal elements of H.cordata， aiming to standardize the production of raw materials.It provides safe and effective medicinal materials for clinical medicine of traditional Chinese medicine and production of pharmaceuticals for enterprises， and provides theoretical basis for perfecting quality standards of Houttuynia cordata Injection and evaluation after market.Meanwhile， it plays a guiding role in researches on the raw materials of other traditional Chinese medicine injections.

Keywords?Houttuynia cordata; Injection; Breeding; Cultivation; Fresh keeping; Chemical composition analysis; Determination of heavy metal elements

中圖分類號：R286.0文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.05.001

魚腥草別名折耳根，狗心草等，是一味傳統常用中藥，在我國應用歷史悠久，《本草綱目》記載：魚腥草辛，微溫，有小毒。可散熱毒癰腫，斷店疾，解硇毒。現代研究發現魚腥草有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗腫瘤、抗炎、增強免疫、平喘利尿的作用，可清熱解毒、消癰排膿、利尿通淋等[1-2]，2002年魚腥草被國家原衛生部認證為83種藥食同源中藥之一[3]。

20世紀70年代，我國自主研發了魚腥草注射液，由魚腥草鮮品用重蒸餾提取，再加入適量的增溶劑吐溫80制成。魚腥草注射液的主要活性成分為魚腥草素和甲基正壬酮，多用于治療呼吸系統疾病，亦可治療流行感冒等傳染性疾病及防止術后感染[4]。2003年“非典”期間，為應對疫情，全國防治“非典”指揮部科技攻關組迅速行動，篩選出8個中成藥作為控制SARS不同階段癥狀的最有效藥物，魚腥草注射液就在其中[5]。魚腥草注射液對SARS患者有清熱、解毒、鎮咳平喘功效，能改善患者臨床癥狀，減輕炎性反應，保護臟器功能[6]。由于出色的療效，魚腥草注射液被譽為“非典功臣”，“非典”過后，生產魚腥草注射液的企業迅速增多。中藥注射劑超過半數為獨家品種，只由一家企業生產，但截止2020年1月，不同企業生產的不同規格魚腥草注射液多達106種。一方面由于歷史原因，魚腥草注射液上市前臨床試驗數據不足，另一方面短時間內大量魚腥草注射液被批準上市，其安全性有效性難以保證，魚腥草注射液的不良反應問題隨之日益突出。

早在1988年，魚腥草注射液的不良反應就引起了關注，國家藥品不良反應監測中心數據顯示，1988—2006年間含魚腥草中藥注射劑的不良反應超過5 000例，其中222例為嚴重不良反應[7]。2003年發布的第4期《藥品不良反應信息通報》中，對魚腥草注射液引起嚴重不良反應的情況進行了通報[8]。2006年1月到5月，相關不良反應事件急劇增多，引起社會廣泛關注。6月1日國家食品藥品監督管理局發布《關于暫停使用和審批魚腥草注射液等7個注射劑的通告》[9]，宣布在全國范圍內暫停使用魚腥草注射液等7個注射劑，暫停受理和審批魚腥草注射液等7個注射劑的各類注冊申請，引發了中藥注射劑行業的大地震，整個魚腥草注射液產業鏈遭受巨大損失。直到9月5日《關于魚腥草注射液等7個注射劑有關處理決定的通知》發布，魚腥草注射液等品種才逐漸恢復使用[10]。

魚腥草注射液事件影響巨大，嚴重損害了中藥注射劑的公信力，事件發生后隨著時間的發酵，波及整個中藥注射劑行業，北京一些醫院甚至全面禁止中藥注射劑的使用[11]。中藥注射劑不良反應的成因很多，從原料藥材到臨床使用的每一個環節出錯都可能產生嚴重的不良反應。原料藥材是中藥注射劑生產的源頭，原料藥材的安全性和有效性是中藥注射劑安全性和有效性的基礎，本文擬以魚腥草注射液為例，分析原料藥材的鑒定、種植、質量控制、農藥殘留和重金屬檢測等，保證其安全有效，從源頭上減少魚腥草注射液不良反應的發生。

1?魚腥草的鑒定

2015版《中華人民共和國藥典》規定：魚腥草為三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的新鮮全草或干燥地上部分。藥典中鑒別項包括性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別和薄層鑒別[12]。而2011年7月29日國家藥典委員會公布的魚腥草注射液公示標準草案（下稱公示標準）中鮮魚腥草藥材標準新增了指紋圖譜項，要特異性鑒別22個特征峰。此外，藥典中薄層鑒別只以甲基正壬酮為對照品，而公示標準中新增4-萜品醇對照品、α-松油醇對照品[13]。魚腥草的偽品主要有巴東過路黃、百部還魂、抱莖眼子菜和水苦荬，其中巴東過路黃全體密布鐵銹的柔毛且揉搓后無魚腥氣，此外魚腥草有鹽酸鎂粉反應，而巴東過路黃的甲醇提取液經三氯化鋁乙醇液顯色后在紫外下有鮮黃色熒光，可據此與魚腥草區分[14]。百部還魂則可根據其與魚腥草葉形態-脈序圖譜的不同加以區分，如魚腥草表面有灰白色氣孔小凸起而百部還魂無，魚腥草托葉-葉柄鞘的舌狀凸起明顯而百部還魂不明顯等[15]。魏藝聰等[16]還利用matK片段建立了兩者特異PCR鑒別方法，進行快速的分子鑒定。文獻報道甘肅省某些地區存在誤把抱莖眼子菜和水苦荬當做魚腥草使用，甚至制成魚腥草注射液用于臨床，宋學華總結了魚腥草和兩者的真偽鑒別方法，分別從性狀、組織、理化方面給出了鑒別方法[17]，張順辰亦給出了三者性狀鑒別和顯微鑒別的特征[18]。總體來看，魚腥草的混偽品并不多見，只在部分地區少量出現。推測與魚腥草鮮明的特征有關：鮮魚腥草有強烈魚腥氣，干燥后亦有魚腥氣，可與常見偽品區分。藥典中魚腥草的鑒別相對簡單，而公示標準中鮮魚腥草的標準更加詳細，為其鑒別提供了明確依據。

2?魚腥草的資源分布與品種選育

魚腥草屬于三白草科蕺菜屬，為單屬種植物，野外主要分布在我國南方各省，以四川、湖北、湖南、江蘇等省居多[19]。唐代《新修本草》記載：“此物，葉似蕎麥，肥地亦能蔓生，莖紫赤色，多生濕地、山谷陰處。山南江左人，好生食之，關中謂之菹菜也”。魚腥草歷代以來作為野菜廣受歡迎，但隨著魚腥草注射液等藥品的興起，其需求量不斷增大，野生資源也日漸減少，部分地區甚至出現毀滅性采挖，魚腥草逐漸由野生馴化為家種[20]。

魚腥草分布較廣，種質資源非常豐富。但不同種源魚腥草性狀質量差別很大。藍云龍研究分析了全國23個種源的魚腥草，結果顯示不同種源魚腥草產量及其揮發油、黃酮類成分含量存在顯著差異，且與形態特征相關[21]。關金枝[22]分析了湖北省的34個種質資源后發現，不同種源的魚腥草形態學存在豐富變異，且其中部分與地理來源具有相關性。遺傳分析發現不同種源魚腥草親緣關系與地理來源呈相關性，種內存在豐富的遺傳變異。為了選育優良的品種，伍賢進等[23]利用湖南省野生魚腥草，通過人工栽培和品比試驗選育出優質高產的魚腥草新品種“湘白魚腥草”并對其進行了初步研究。鐘軍等[24]篩選符合條件的野生魚腥草經過單株選留和地下莖無性繁殖方式使其擴種，又經過馴化栽培選育出高產優質的魚腥草新品種“紅玉”。

3?魚腥草的栽培種植

魚腥草既可有性繁殖也可無性繁殖，以無性繁殖為主：根莖繁殖、分株繁殖和插枝繁殖，其中根莖繁殖最為常用，在秋天選擇健壯而無病蟲害的老莖做種莖，將其埋在地下過冬，春天時挖出截成段植于苗床。黃放等[25]對魚腥草各種繁殖方法進行了詳細的介紹。不同種莖的長短、粗細、及生長年限有差異，各自的產量也不相同，研究發現15 cm切段長度時地上部分產量最高，粗種莖、10 cm切段長度時地下莖產量最高，魚腥草當年生種莖比多年生種莖更有優勢[26]。魚腥草喜溫暖陰濕環境，耐陰、耐澇、耐寒，對光照和土壤要求不嚴，適應性強，生命力旺盛，人工種植好管理。魚腥草適宜的生態環境見表1所示[27-29]。

魚腥草的主要活性成分包括揮發油和黃酮類物質，生態環境通過影響其活性成分的積累進而影響藥材的質量。石文婷等[30-31]研究發現適度的遮光有利于魚腥草揮發性成分的提高，吳丹等研究發現土壤條件包括養分、pH、微生物等會影響魚腥草中多酚和黃酮類物質的代謝積累。

門桂榮、印保林等[28-29]對魚腥草的栽培技術進行了詳細的總結，包括整地定植、田間管理、病蟲害防治、采收和銷售等。康公平等[27]總結了魚腥草露地栽培、大棚栽培和套種栽培等技術，認為魚腥草與其他作物套種可以取得更高的經濟效益。魏新雨[32]介紹的高產栽培技術中提出可以通過排澇、防高溫和間作套種提高魚腥草的產量。不同的采收時間也會影響魚腥草的質量，何剛等[33]利用氣相色譜-質譜聯用法測定了不同采收期鮮品魚腥草中揮發油含量，發現揮發性成分隨時間積累，8月中下旬后開始下降。雅安某公司對其魚腥草種植（GAP）基地的建設做了概述，介紹了基地概況和GAP實施的情況[34]。李濤等[35]綜述了魚腥草主要病蟲害及相應防治方法，為魚腥草GAP標準化生產提供了保障。鐘軍等[36]在闡述魚腥草藥材道地性評價策略時亦對魚腥草的栽培技術和產地加工提出了建議。

魚腥草注射液的原料藥材是鮮魚腥草，采收后應特別注意保鮮問題。伍賢進等[37]研究發現鮮魚腥草儲存過程中，其活性成分揮發油類不斷減少，藥效降低。伍賢進等[38]后續進一步研究了不同儲存溫度對魚腥草地下莖的保鮮效果，結果發現魚腥草在（30±2）℃下2 d就開始腐爛，（19±1）℃下9 d開始腐爛，（4±1）℃下可以保存30 d，期間魚腥草含水量不斷降低。實驗證明降低溫度有利于魚腥草的保存防腐。湯海燕[39]研究了在真空包裝下溫度對魚腥草保鮮效果的影響，結果發現相比于常溫保存，5 ℃時真空包裝的魚腥草保鮮效果最好，可以達到3個月，鮮重變化也最低。劉忠宇等[40]研究發現0～5 ℃條件下殼聚糖涂膜的保鮮能力最強。除了溫度，李白鴿等[41]研究發現充氣包裝保鮮中不同氣體比例同樣影響保鮮效果，實驗結果發現8% O2+30% CO2的空氣可以提高過氧化氫酶活性并且降低過氧化物酶和多酚氧化酶活性，維持多酚和黃酮類含量。此外，添加保鮮劑同樣可以延長魚腥草貯藏時間，郭峰等[42]研究發現水楊酸、赤霉素、6-芐氨基嘌呤合適的配比可以保存魚腥草30 d，徐俐等[43]實驗發現2 000 nL/L1-甲基環丙烯處理后可使大部分魚腥草保存60 d。

由于魚腥草本身適應能力較強，其在野外分布較廣，人工種植亦不困難。雖然其種質資源豐富，但不同品種質量良莠不齊，性狀特征與生源環境相關性強，栽培時應選擇優良品種，在合適生態環境中種植。由于魚腥草氣味特殊，蟲害較少，主要關注白絹病的危害。此外，魚腥草注射液的原料是鮮魚腥草，藥效成分隨時間變化很大，采收和加工時應注意保鮮。

4?魚腥草的質量控制

當前魚腥草的法定質量標準主要是2015版《中華人民共和國藥典》和公示標準中的鮮魚腥草標準。兩者區別見表2所示[12-13]。

由于魚腥草注射液的原料藥材是鮮魚腥草，公示標準中只包含鮮魚腥草的標準，而藥典除了鮮魚腥草外還包括干魚腥草。藥典中未明確藥效成分的含量測定指標，而公示標準薄層鑒別新增了2個對照品，新增了指紋圖譜、檢查和含量測定項，貯藏項還對保存時間作了規定。魚腥草的活性成分揮發油含量隨時間減少，推測此規定旨在保證鮮魚腥草有效成分的穩定性[44]。除了法定標準，周日寶等[45]分析了衡山縣等地魚腥草的水分、總灰分、酸不溶灰分、水溶性浸出物和醇溶性浸出物，并給出了相應標準供參考。

魚腥草的化學成分復雜，主要有揮發油類、黃酮類、有機酸、生物堿和維生素等，其中癸酰乙醛（魚腥草素）、甲基正壬酮和月桂醛是其抗菌和抗病毒的主要活性成分，以槲皮素和槲皮苷為代表的黃酮類成分同樣有多種生物學活性[46-47]。法定標準中主要檢查以甲基正壬酮為代表的揮發油類，但未提及黃酮類。研究發現即使浸出物檢查項合格，不同魚腥草黃酮類成分含量差異很大，張思荻等[48]建立了基于金絲桃苷和槲皮苷的魚腥草質量分析方法，可為魚腥草的質量標準提供參考。黃萍[49]在2005版《中華人民共和國藥典》基礎上，進行了鮮魚腥草藥材質量標準的探索，除了與上述法定標準相同的部分，還增加了雜質、Pb、Cb、As、Hg、Cu以及農藥殘留的測定。包括重金屬和農藥殘留在內的外源污染物的檢測見下一節。文獻報道魚腥草中還含有馬兜鈴酸類物質，對人體可能有腎毒性和致癌性，此類物質需要重點關注[50]。

藥典質量標準中鮮魚腥草占比重較小，公示標準進行了補充，但仍只重點關注了揮發油類成分。魚腥草藥理作用多樣，其他活性成分的質量標準仍需探索。后續研究應與藥理實驗結合，探究魚腥草中除揮發油外的活性成分，并完善相應的質量標準。

4?外源污染物檢測

中藥材的外源污染物檢測一般包括：重金屬和有害元素、黃曲霉素、二氧化硫、殘留農藥、有機溶劑的檢測。因為魚腥草注射液直接以鮮魚腥草為原料，經水蒸氣蒸餾提取[13]，所以不涉及有機溶劑殘留;魚腥草的炮制過程也不涉及二氧化硫;鮮魚腥草保存時間較短，保存過程不產生黃曲霉素。所以魚腥草的外源污染物檢測重點是重金屬和有害元素污染以及農藥殘留的檢測。

伍鈞等[51]研究發現魚腥草可在Pb污染嚴重的土地中生存，對Pb和Zn有富集作用，部分自然生長的魚腥草葉中Pb含量超標。楊昱等[52]分析貴陽市金陽、烏當等地5個魚腥草種植區土壤中的Pb、Cd、Hg、As、Cu、Zn的含量，結果發現不同地區重金屬污染情況與當地產業建設有關，其中某區魚腥草中Hg污染最嚴重，為中等級別。魯連芳等[53]用微波消解-火焰原子吸收光譜法測定了銅仁區魚腥草中微量元素及重金屬的含量，結果表明魚腥草中對人體有益的微量元素含量較高，而重金屬Cd和Pb含量低于我國食品衛生標準的限量標準，可以食用。李娜等[54]采用國標方法分析了煤礦區產魚腥草中重金屬的含量，結果顯示與非礦區相比，礦區魚腥草植株可食部分中的Pb和Cr含量超過國標限量。李雅萌等[55]建立了電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）法，可同時測定魚腥草中14種重金屬的含量，且精密度、準確性和重復性較好。高智席等[56]建立了干灰化原子吸收光譜法測定魚腥草中微量元素和重金屬含量，該方法具有較高靈敏度和準確度，可同時測定微量元素和重金屬。不同檢測方法統計整理見表3。

魚腥草的栽培過程中常用農藥有百草枯和乙草胺，李俊等[57]試驗建立了測定魚腥草中百草枯和乙草胺殘留物的三重四級桿氣相色譜質譜方法。擬除蟲聚酯類農藥是一類優質的殺蟲劑，在藥材種植中有較多使用，魏進等[58]建立了氣相色譜法檢測魚腥草中的3種菊酯類農藥殘留的方法。雖然有機氯農藥在20世紀80年代就已經被禁止使用，但由于其曾經用量很大且難于降解，其在魚腥草中的檢測不能忽視，陳順琴等[59]提出了一種超聲提取-氣相色譜法測定魚腥草中有機氯農藥殘留方法，為魚腥草農藥檢測提供了參考。為保證農藥的合理使用，李濤等[60]制定了魚腥草種植基地農藥管理與使用標準操作規程，對GAP基地的建設很有借鑒意義。

魚腥草的外源污染物較少，污染情況并不嚴重，其中重金屬污染主要與產地環境有關，建立種植基地時應重點關注土壤中重金屬含量。農藥殘留問題則要重點關注農藥的合理使用，從源頭上減少農藥殘留的風險。

5?結語

中藥注射劑是我國醫藥衛生事業的重要組成部分，2017年中藥注射劑的銷售總規模已達千億[61]，發展中藥注射劑有利于推進中藥現代化和產業化，助力我國醫藥事業發展。與其他中藥注射劑相比，魚腥草注射液處方飲片的原料藥材只有一味魚腥草，作為傳統中藥，魚腥草口服制劑的安全性經歷了國人的考驗，制成魚腥草注射液后卻多有不良反應發生。張美玉等[7]分析歸納了魚腥草注射液產生不良反應的原因：藥材本身因素，制劑工藝和臨床不合理應用。藥材本身因素可以通過優良品種的選育，規范化的生產種植，合理的質量評價，嚴格的污染物監測予以控制，降低發生不良反應的風險。本文對魚腥草以上幾個方面進行了綜述，提出以下建議。

5.1?推廣魚腥草規范化種植，建設GAP基地?雖然魚腥草在野外分布較廣，野生資源豐富，但隨著其需求量不斷擴大，野生資源正不斷減少。相比于人工種植，野生資源往往無法保證質量均一穩定，增加了制劑不良反應的風險。此外魚腥草適應能力強，病蟲害較少，易于管理，建設GAP基地可為臨床用藥和制藥企業提供優質、穩定、無公害的藥材，推動魚腥草產業的健康發展。

5.2?加強魚腥草優良品種的選育?魚腥草野生種質資源豐富，為品種選育提供了基礎。但其質量不一，不同種源魚腥草的活性成分如揮發油類、黃酮類含量有顯著差異，產量差異也十分明顯，其品質往往受產地生態環境影響較大，選育出優質、高產、抗病蟲害的品種不僅可保證魚腥草質量，同時有較大經濟意義。

5.3?補充完善魚腥草標準?魚腥草功能主治并不單一，相應活性成分也有許多，但當前標準中往往只關注其中的揮發油成分，其他如黃酮類成分等并不檢測，無法全面評價魚腥草質量。仍需要開展更多的基礎研究，闡明魚腥草發揮藥效的物質基礎并制定相應的質量標準，為其臨床用藥和成方制劑的應用提供理論依據。

5.4?加強重金屬檢測?魚腥草對重金屬有較強的富集能力，可用于修復重金屬污染的土壤。因此魚腥草本身的重金屬檢測需要格外關注，在種植魚腥草時應重點關注土壤重金屬含量，避免藥材重金屬超標。此外，重金屬在魚腥草不同部位富集，全草入藥時應全面檢查各部位含量。

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（2020-02-10收稿?責任編輯：徐穎）