急性川崎病患兒外周血中可溶性Tim-3表達變化及臨床價值＊

董瑤佳，郭卉，薛國輝

（1.江西省九江市婦幼保健醫院檢驗科；2.江西省九江市第一人民醫院檢驗科，九江332000）

川崎病（Kawasaki Disease,KD）又稱皮膚黏膜淋巴結綜合征,是嬰幼兒及兒童最常見急性自限性全身性血管炎癥疾病，臨床表現以皮膚、黏膜、淋巴結的改變最為典型[1]。其中心血管系統易受累，嚴重時可因冠脈病變而發生猝死。川崎病的發病機制和病因到目前都尚不完全清楚,目前有學者研究認為,外源性病原微生物的入侵是導致川崎病的首要誘因，當這些外源性微生物入侵機體時，機體的免疫系統由沉睡狀態立即轉變為激活狀態，從而打破機體免疫功能原本的平衡狀態使其失調，導致自身免疫反應的發生。

Tim-3是Th1細胞特異性表面分子，可負性調控Th1細胞介導的免疫反應，既往研究證實Tim-3具有調控細胞凋亡、控制炎癥以及免疫調節作用[2,3]，同時又有多項研究提示Tim-3可通過調控Th17/Treg作用軸參與炎癥性疾病的病因學過程，其在川崎病患兒中或許存在異常并與Th17/Treg密切相關[4-6]。本研究通過檢測川崎病患兒外周血中可溶性可溶性Tim-3的水平，旨在探討可溶性Tim3在川崎病免疫失衡中的作用及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2016年1月-2019年6月于九江市婦幼保健醫院急性期川崎病患兒50例，其中男28例，女22例，年齡0-4歲，平均年齡（2.59±0.12）歲。納入標準：⑴均符合美國心臟病學會川崎病診斷指南[7]；⑵入院時均處于急性期；⑶排除病毒性心肌炎、先天性心臟病等；⑷所有患兒在采血前均未使用靜脈丙種球蛋白(IVIG)和免疫抑制劑。排除標準：⑴臨床資料不完善；⑵已使用過IVIG或激素治療。同時選取本院健康體檢兒童30例作為對照組，其中男15例，女15例，年齡0～4歲，平均年齡（2.70±0.17）歲。兩組觀察對象在性別與年齡等一般資料間比較均無統計學差異（P＜0.05），具有可比性。

1.2 標本采集及處理 抽取所有川崎病患兒治療前清晨空腹靜脈血6ml，體檢兒童空腹靜脈血6ml，分別分裝3管，其中2ml分裝于干燥管中，4000rpm/10min分離血清后立即送檢，用于免疫比濁法測定血清CRP、C3和C4濃度，其測定儀器為西門子BN-II及其配套試劑；另2ml分裝于黑色頭蓋管（內含0.109mol/L檸檬酸鈉抗凝劑，抗凝劑與血液的體積比為1:4），立即送檢用于魏式測定ESR水平；最后2ml分裝于干燥管中，4000rpm/10min分離血清后-80℃凍存，用于可溶性Tim-3的測定。可溶性Tim-3酶聯免疫吸附法試劑盒（購自Cloud-Clone,USA）測定所有研究對象外周血中的可溶性Tim-3水平，最低檢測限為29pg/ml。所有步驟嚴格按照試劑說明書執行。

1.3 統計學處理 采用SPSS 25.0軟件對所有數據進行統計分析，實驗結果以()表示，2組間比較采用獨立樣本t檢驗，Spearman法用于分析各指標間的相關性，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 急性川崎病患兒外周血中可溶性Tim-3的濃度變化 川崎病患兒組（KD組）和健康體檢兒童組（對照組）外周血中可溶性Tim-3的水平分別為(73.33±23.96)pg/ml和(46.52±10.16)pg/ml，KD組的水平明顯高于對照組，兩組之間的差異有統計學意義（P＜0.001）。

2.2 KD組與對照組炎癥因子和血沉的結果比較川崎病患兒組外周血中的炎癥免疫因子如CRP、C3和C4以及ESR水平分別高于對照組，且之間的差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.3 可溶性Tim-3與其他炎癥因子的相關性比較根據Spearman相關性分析結果顯示，在急性期川崎病患兒外周血中，可溶性Tim-3與CRP、ESR和C3分別呈正相關(r=0.5654,0.3538,0.3328,P＜0.05)，而可溶性Tim-3與C4相關不顯著（P＞0.05）。

表1 KD組和對照組的結果比較()

表1 KD組和對照組的結果比較()

組別 CRP（mg/L） C3(g/L) C4(g/L) ESR(mm/H)KD組對照組P值13.27±7.00 2.26±1.70 P＜0.05 1.71±0.61 1.35±0.42 P＜0.05 0.39±0.17 0.26±0.14 P＜0.05 23.60±8.15 12.03±6.38 P＜0.05

3 討論

川崎病也被稱為皮膚黏膜淋巴綜合征，是一種急性出疹發熱性小兒疾病，以全身血管炎為主要病變。川崎病于1961年被日本的川崎富作首先發現，并于1967年首次報道，該病常于冠狀動脈異常有關。有研究顯示我國許多地區的川崎病發病率逐年增加，已經成為兒童后天獲得性心臟病的最常見原因，同時也是激發冠狀動脈心臟病的關鍵危險因素[8]。

川崎病的致病機制和發病原因至今尚不完全清楚，大多數學者認為川崎病常發生在有遺傳易感性背景的個體,某些感染因素或某種病原體通過呼吸道或其他途徑進入人體，或是作為誘發因素，或是直接損害,或是通過超抗原活動引起機體免疫紊亂造成的系統性疾病綜合征[9]。感染誘發的自身免疫功能異常在致病過程中可能扮演核心角色。川崎病患兒急性期外周血B細胞多克隆活化，T細胞、單核/巨噬細胞數量增多，從而引起體內細胞免疫及體液免疫失衡,產生大量的炎性細胞因子，多種炎癥因子如IL-1β、IL-6、TNF-α參與了川崎病的病理生理過程[10-13]。T淋巴細胞是參與機體細胞免疫的主要細胞群組,在細胞因子的誘導下T細胞可以分化為Thl、Th2、Th17及Treg等輔助性T細胞。T細胞免疫球蛋白域黏蛋白域家族（T-cell immunoglobulin and mucin domain,Tim）是2001年由Mcintire等在小鼠11號染色體上發現編碼I型跨膜蛋白的基因家族。Tim分子作為新型免疫調節分子,在免疫功能調節方面具有重要作用[14]。有研究證實Tim基因家族可能是磷脂酞絲氨酸（PS）的一個受體家族，其可與PS結合，介導凋亡細胞的識別與清除。人Tim家族包括三個基因成員：Tim-1、Tim-3和Tim-4。Tim-1選擇性的表達于Th2細胞，且其是Tim-4的內源性配體；Tim-3是Th1細胞特異性表面分子，既往研究證實Tim-3具有調控細胞凋亡、控制炎癥以及免疫調節作用。有研究表明Tim-3在哮喘小鼠患者中發現mRNA增高并與Th17/Treg密切相關[15]，過敏性紫癜患兒中也發現Tim-3可能通過調控Th17/Treg平衡而參與疾病機制[16-18]。有報道稱在系統性紅斑狼瘡患者外周血中Tim-3水平明顯增高,且與SLEDAI評分呈正相關[19]；此外李雪蓮等[20]也發現在早期自然流產患者外周血PBMC中Tim-3 mRNA表達增高，并與Th17/Treg細胞比例呈顯著正相關性。

本次研究中急性期川崎病患兒外周血中的可溶性Tim-3的水平為73.33±23.96 pg/ml，而作為對照組的健康兒童外周血中可溶性Tim-3的水平為46.52±10.16 pg/ml，兩組結果相比較，川崎病患兒外周血中可溶性Tim-3水平明顯升高，且與對照組存在顯著的統計學差異(P＜0.001)。川崎病患兒外周血中可溶性Tim-3水平的升高提示了其可能在川崎病的免疫功能調節方面起到了重要的作用，但其在川崎病中具體的作用機制尚需要做進一步研究。本次研究發現，川崎病患兒外周血中CRP、C3、C4和ESR的水平明顯高于健康對照組，并且存均存在顯著性差異（P＜0.05），此結果與以往外報道類似[21,22]。與此同時，我們在將可溶性Tim-3水平與其他相關的炎癥指標做相關性分析時，發現可溶性Tim-3與CRP、C3和ESR呈正相關(P＜0.05)，而與C4的相關性并不顯著（P＞0.05）。美國心臟學會（AHA）修訂的川崎病診斷指南提出WBC、Hb、PLT和CRP等實驗室指標可應用于川崎病的輔助診斷，同時亦有多個研究證實CRP、ESR和C3等炎癥指標在川崎病患者外周血中會明顯升高[23-27]，這些實驗室指標均是川崎病良好的輔助診斷指標，外周血中可溶性Tim-3與CRP、C3和ESR良好的相關性也使得其可能成為川崎病的輔助診斷指標。

綜上所述，雖然對于Tim-3在川崎病致病過程中的作用機制尚需要做進一步的研究，但可溶性Tim-3在急性期川崎病患者外周血中的水平顯著增高并與CRP、C3和ESR顯著正相關使得其可作為川崎病輔助診斷指標。