子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143、HIF-1α mRNA表達(dá)及與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

陳紅林，曾慶維，，陳曉宇，李桂榮，劉靜云

1開灤總醫(yī)院林西醫(yī)院，河北唐山063000；2唐山市婦幼保健院

子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率上升且呈低齡化趨勢，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。子宮內(nèi)膜癌術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高，患者5年生存率低[2]，因此，明確子宮內(nèi)膜癌發(fā)病相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制，對探索新治療靶點、改善患者預(yù)后有重要意義[3]。miRNA-143(miR-143)編碼位于人染色體5q32，被證實在多類惡性腫瘤中呈相對高表達(dá)或低表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展[4]。目前國內(nèi)針對miR-143與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究甚少。缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)在子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤中過表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[5]。近期研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α作為miR-143的靶基因參與惡性腫瘤的發(fā)生進(jìn)展[6,7]。基于此，本研究觀察了子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143、HIF-1α mRNA的表達(dá)變化，分析二者與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 組織標(biāo)本和臨床資料 2017年1月～2019年7月行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者126例，收集手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本(距腫瘤邊緣至少5 cm)。所有標(biāo)本在離體后30 min內(nèi)快速置入液氮，存于-80 ℃冰箱中備測。納入標(biāo)準(zhǔn)：①子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)證實，癌旁組織標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)證實無腫瘤細(xì)胞侵犯；②患者在術(shù)前未接受過免疫治療、放化療等抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重心腦血管疾病；③合并血液系統(tǒng)疾病。126例子宮內(nèi)膜癌患者年齡31～72(54.68±8.79)歲，腫瘤最大直徑≤2 cm 40例、>2 cm 86例，F(xiàn)IGO分期Ⅰ+Ⅱ期89例、Ⅲ+Ⅳ期37例，腫瘤分化程度為低分化59例、中分化36例、高分化31例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例，絕經(jīng)85例、未絕經(jīng)41例。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 miR-143及HIF-1α mRNA檢測 采用qRT-PCR法。根據(jù)miRNA提取試劑盒說明提取組織中總RNA，紫外分光光度儀檢測總RNA含量、純度，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。將cDNA作為模板，進(jìn)行qRT-PCR檢測。miR-143上游引物序列為5′-TGTAGTTTTCGGAGTTAG-TGTCGCGC-3′，下游引物序列為5′-CCTACGATCGAAAAC-GACGCGAACG-3′；內(nèi)參U6上游引物序列為5′-GTTTTGTAGTTTTTGGAGTTAGTGTTGTGT-3′，下游引物序列為5′-CTCAACCTACAATCAAAAACAACACAAACA-3′。HIF-1α上游引物序列為5′-ATCCATGTGACCATGAGGAAATG-3′，下游引物序列為5′-TCGGCTAGTTAGGGTACACTTC-3′；內(nèi)參GAPDH上游引物序列為5′-ATCAAGAAGGTGGTGAAGCAGG-3′，下游引物序列為5′-CGTCAAAGGTGGAGGAGTGG-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性4 min，95 ℃變性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環(huán)。以2-ΔΔCt表示miR-143及HIF-1α mRNA相對表達(dá)量。實驗均重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 子宮內(nèi)膜癌組織和癌旁組織中miR-143、HIF-1α mRNA表達(dá)比較 子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁組織中miR-143相對表達(dá)量分別為0.35±0.05、1.12±0.13，HIF-1α mRNA相對表達(dá)量分別為2.64±0.27、0.97±0.09，子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143相對表達(dá)量低于癌旁組織，HIF-1α mRNA相對表達(dá)量高于癌旁組織(P均<0.05)。

2.2 miR-143及HIF-1α mRNA表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 miR-143在子宮內(nèi)膜癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，在FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期患者中表達(dá)低于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。HIF-1α mRNA在子宮內(nèi)膜癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，在FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期患者中表達(dá)高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。miR-143和HIF-1α mRNA表達(dá)在不同年齡、腫瘤最大直徑、腫瘤分化程度及絕經(jīng)情況患者中差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。詳見表1。

表1 miR-143、HIF-1α mRNA表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143與HIF-1α mRNA表達(dá)的相關(guān)性 子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143與HIF-1α mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.952，P<0.01)。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展涉及復(fù)雜的生物學(xué)過程，目前臨床診治尚缺乏特異分子標(biāo)志物，故分析腫瘤生物學(xué)特性、探尋潛在生物標(biāo)志物成為研究重點。miRNA是基因轉(zhuǎn)錄過程中的重要調(diào)控因子。研究顯示，miRNA參與細(xì)胞生命活動過程，可作用于特殊靶點，進(jìn)而起抑癌基因或癌基因作用，參與腫瘤發(fā)生發(fā)展[8,9]。miR-143是miRNA家族重要成員，研究發(fā)現(xiàn)，miR-143在宮頸癌[10]、膀胱癌[11]、胃癌[12]等多種惡性腫瘤中呈相對低表達(dá)，通過作用于靶基因抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲，提高抗腫瘤藥敏感性；而在肝細(xì)胞癌中miR-143呈相對高表達(dá)，發(fā)揮癌基因作用[13]。Wang等[14]通過體外實驗發(fā)現(xiàn)，miR-143可結(jié)合靶基因的3′UTR，激活MAPK/ERK、PI3K/Akt信號途徑，進(jìn)而參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。目前國內(nèi)關(guān)于子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143表達(dá)情況的研究甚少。本研究表明，子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143表達(dá)水平低于癌旁組織，提示miR-143在子宮內(nèi)膜癌中可能起抑癌基因作用。進(jìn)一步分析顯示，miR-143在子宮內(nèi)膜癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，在FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期患者中表達(dá)低于Ⅰ+Ⅱ期患者，提示miR-143異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

HIF-1α是缺氧條件下的特異感受性轉(zhuǎn)錄因子，在血管新生、血管舒縮調(diào)節(jié)、維持腫瘤細(xì)胞能量代謝、促腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移等方面具有多樣生物學(xué)效應(yīng)[15]。目前國內(nèi)外研究證實，HIF-1α在肺癌、大腸癌、宮頸癌等腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展中起癌基因作用[16,17]。腫瘤細(xì)胞快速生長過程中，易導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌組織內(nèi)部缺氧，從而誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)。HIF-1α表達(dá)上調(diào)可與HIF-1β亞單位結(jié)合，再與目的基因缺氧反應(yīng)元件結(jié)合，進(jìn)而激活糖酵解酶、VEGF、促紅細(xì)胞生成素、環(huán)氧合酶2等多種基因轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)血管新生。趙寧等[18]研究表明，HIF-1α在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)增高，且與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。另有資料顯示，HIF-1α在子宮內(nèi)膜不典型增生、正常組織中表達(dá)增高不明顯，而在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)增加顯著[19]。本研究中，子宮內(nèi)膜癌組織中HIF-1α mRNA表達(dá)水平高于癌旁組織；HIF-1α mRNA在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，在FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期患者中表達(dá)高于Ⅰ+Ⅱ期患者，進(jìn)一步證實HIF-1α參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展，可作為潛在生物學(xué)標(biāo)志物。

Zhao等[6]研究發(fā)現(xiàn)，miR-143過表達(dá)可降低腫瘤細(xì)胞中HIF-1α mRNA和蛋白表達(dá)水平，雙熒光素酶報告基因測定表明HIF-1α是miR-143的直接靶標(biāo)。He等[20]研究表明，在體外，miR-143模擬物的加入明顯抑制了腫瘤細(xì)胞的遷移、增殖，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，miR-143通過下調(diào)HIF-1α表達(dá)發(fā)揮抑癌作用。以上研究提示，miR-143可能通過調(diào)控HIF-1α表達(dá)，進(jìn)而共同影響腫瘤的產(chǎn)生、進(jìn)展。本研究Pearson相關(guān)性分析顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143與HIF-1α mRNA表達(dá)負(fù)相關(guān)，提示miR-143與HIF-1α在子宮內(nèi)膜癌中可能存在靶向調(diào)控關(guān)系。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌組織中miR-143低表達(dá)，HIF-1α mRNA高表達(dá)，二者與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，可能共同作用于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展過程。但關(guān)于miR-143靶向調(diào)控HIF-1α在子宮內(nèi)膜癌中的具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步明確。