P53、EGFR在膠質瘤組織中的表達及意義

張誠 丁建玲 麥麥提依明·托合提

摘要：目的? 評估P53、表皮樣生長因子受體（EGFR）在膠質細胞瘤患者組織中的表達情況，分析二者與膠質瘤分級的相關性。方法? 選取2018年1月～2019年7月新疆維吾爾自治區人民醫院確診膠質瘤患者組織標本40例作為實驗組，選取同期腦外傷或高血壓腦出血患者手術切除的正常腦組織15例為對照組，采用S-P免疫組化法檢測實驗組及對照組標本中的P53及EGFR在膠質瘤中的表達情況，分析P53及EGFR與膠質瘤分級的相關性。結果? 實驗組不同性別、年齡及腫瘤大小中P53、EGFR的表達比較，差異無統計學意義（P>0.05）;實驗組腦組織中P53及EGFR陽性表達率均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）;P53、EGFR在不同級別膠質瘤中陽性表達率均呈正相關（r=0.057、0.520，P=0.012、0.017）。腦膠質瘤組織中P53與EGFR表達無明顯相關性（r=0.436，P=0.052）。結論? 腦膠質瘤組織中P53、EGFR的表達可能與性別、年齡及腫瘤大小無關，P53、EGFR在不同級別膠質瘤中陽性表達率均較高，且膠質瘤級別越高，組織P53、EGFR陽性率越高，聯合檢測P53及EGFR可能作為膠質瘤分子病理診斷的新指標。

關鍵詞：膠質瘤;P53;EGFR

Abstract：Objective? To evaluate the expression of P53 and epidermoid growth factor receptor （EGFR） in the tissues of patients with glioma， and to analyze the correlation between the two and the grade of glioma.Methods? From January 2018 to July 2019， 40 patients with glioma diagnosed in Xinjiang Uygur Autonomous Region were selected as the experimental group， and 15 normal brain tissues surgically removed from patients with brain trauma or hypertensive cerebral hemorrhage during the same period were selected as the control group. S-P immunohistochemical method was used to detect the expression of P53 and EGFR in gliomas in the experimental and control samples， and to analyze the correlation between P53 and EGFR and the grade of glioma.Results? There was no statistically significant difference in the expression of P53 and EGFR in different genders， ages and tumor sizes in the experimental group （P>0.05）; the positive expression rates of P53 and EGFR in the brain tissue of the experimental group were higher than that of the control group，the difference was statistically significant （P<0.05）; The positive expression rates of P53 and EGFR in different grades of gliomas were positively correlated （r=0.057， 0.520， P=0.012， 0.017）. There was no significant correlation between P53 and EGFR expression in glioma tissues （r=0.436， P=0.052）.Conclusion? The expression of P53 and EGFR in glioma tissue may not be related to gender， age and tumor size. The positive expression rates of P53 and EGFR in gliomas of different grades are higher， and the higher the grade of glioma， the tissue P53 and EGFR The higher the positive rate， the joint detection of P53 and EGFR may be used as a new indicator of molecular pathological diagnosis of glioma.

膠質瘤（glioma，GBM）是顱內第1大腫瘤，惡性程度比較高，腫瘤呈浸潤生長，術后復發率高，目前缺乏有效治療措施。抑癌基因的失活及原癌基因的激活雙重因素導致了膠質瘤的發生，其中表皮樣生長因子受體（EGFR）的過度表達及擴張激活以及抑癌基因P53的缺失、突變是導致膠質瘤發生的主要分子事件。近年來，隨著分子靶向治療研究的不斷深入，P53、EGFR成為腫瘤研究新的熱點[1]，二者在膠質瘤的發生、發展中起到了不同的作用，可能為精準治療膠質瘤提供了潛在新靶點。本研究通過檢測膠質瘤組織中的P53及EGFR的表達情況，以期為臨床膠質瘤分子病理診斷提供指導。

1資料和方法

1.1一般資料? 收集新疆維吾爾自治區人民醫院自2018年1月～2019年7月確診膠質瘤患者組織標本40例作為實驗組，15例腦外傷或高血壓腦出血需行手術切除治療的部分非腫瘤腦組織作為對照組。本研究經新疆維吾爾自治區人民醫院倫理委員會批準，患者家屬知情同意并簽署同意書。實驗組男性26例，女性12例;年齡33～59歲，平均年齡（46.58±13.10）歲;對照組男性10例，女性5例;年齡39～59歲，平均年齡（49.14±10.64）歲。術后腫瘤分級：Ⅰ級2例，Ⅱ級8例，Ⅲ級10例，Ⅳ級20例。

1.2納入與排除標準? 納入標準：①所有患者術前均經MRI檢查，術后病理確診為腦膠質瘤;②術前未進行放、化療，且患者均為第1次手術。排除標準：①復發膠質瘤患者;②顱內其他惡性腫瘤患者;③伴有嚴重意識障礙的患者。

1.3方法? 兩組組織經10 %甲醛固定，常規石蠟組織包埋，5 μm厚連續切片，采用免疫組化S-P染色法檢測兩組標本中的P53、EGFR表達情況，一抗終濃度分別為EGFR 1∶100（兔抗人EGFR多克隆抗體，北京博奧森生物技術公司）、P53 1∶100（兔抗人P53多克隆抗體，北京博奧森生物技術公司），蘇木素復染、脫水透明，顯微鏡下觀察。

1.4結果判定? ①P53腫瘤組織內陽性染色密集區選取400倍鏡下計數500 個細胞，無陽性細胞為“-”，細胞核染色為陽性，若陽性細胞≤10%為“+”，若陽性細胞10%～50% 則為“++”，若陽性細胞>50%則為“+++”[2];②EGFR為棕黃色顆粒，主要在細胞質及細胞膜中表達，400倍鏡下計數1000個腫瘤細胞，細胞膜及細胞質棕黃色染色為陽性，陽性細胞百分率計分標準如下：>75%計4分，51%～75%計3分，26%～50%計2分，10%～25%計1分，<10%計0分;染色強度評分標準：棕色或棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色計1分，無色計0分;以計分和染色強度評分乘積>4分為陽性[3]。

1.5觀察指標? 比較不同性別、年齡、腫瘤大小的膠質瘤組織中P53、EGFR的表達情況，不同組織中P53、EGFR的陽性表達率，P53、EGFR與不同級別膠質瘤組織的關系及腦膠質瘤組織中P53與EGFR表達的關系。

1.6統計學方法 采用SPSS 19.0進行統計學分析，計數資料使用[n（%）]表示，比較采用？字2檢驗。相關性分析采用Spearman相關性分析法，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1不同臨床特點腦膠質瘤患者P53、EGFR的表達比較? 實驗組不同性別、年齡及腫瘤大小中P53、EGFR的表達比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2兩組腦組織中P53及EGFR表達比較? 實驗組腦組織中P53及EGFR陽性表達率均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2;對照組HE染色切片見腦組織局灶血管官腔擴張、大小不一、可見較多急慢性炎性細胞浸潤;實驗組腦組織細胞較密集、有絲分裂活動活躍、微血管增生明顯，見圖1;實驗組P53免疫組化染色見超過30%的細胞顯示出核陽性，見圖2;實驗組EGFR的免疫組化見EGFR呈彌漫性分布，細胞膜及細胞質顯示陽性，見圖3。

2.3 P53、EGFR與不同分級膠質瘤組織的關系? P53、EGFR在不同級別膠質瘤中陽性表達率均呈正相關（r=0.057、0.520，P=0.012、0.017），見表3。

2.4腦膠質瘤組織中P53與EGFR的相關性? 腦膠質瘤組織中P53與EGFR表達無明顯相關性（r=0.436，P=0.052），見表4。

3討論

盡管神經膠質瘤的診斷和治療有所發展，但此類惡性腫瘤進展訊速，患者的預后仍然很差。了解神經膠質瘤的分子機制和進展有助于準確判斷影響神經膠質瘤患者預后的因素并選擇適當及有效治療。

P53通過調控細胞生長、維護DNA完整性、防止具有癌變傾向的基因突變細胞產生，從而發揮抑癌作用，也是目前研究最多的腫瘤基因，現有研究表明多種腫瘤發生發展常伴有P53基因的突變[4]。P53基因有野生型和突變型兩種。P53基因突變是腦膠質瘤中最常見的基因突變，一項兒童膠質瘤研究中發現P53基因突變，且一半患者存在P53顯著表達[5]。McNulty SN等[6]研究顯示膠質瘤患者中P53突變率高達35%～60%。另有研究顯示[7]，高惡度膠質瘤P53免疫組化陽性率顯著高于低惡度膠質瘤。表皮樣生長因子受體（EGFR）為酪氨酸受體，EGFR的基因重組、擴增及表達通過酪氨酸激酶途徑傳至細胞核，進而引起細胞增殖。在腫瘤組織中，EGFR促進腫瘤細胞增殖、粘附、新生血管形成、侵襲、轉移以及抑制腫瘤細胞凋亡。膠質瘤、頭頸部鱗癌、食管癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌組織標本均發現EGFR高表達[8]。

既往研究雖有報道其他類型的腫瘤與性別、年齡、腫瘤大小有一定相關性，但本研究中實驗組不同性別、年齡及腫瘤大小中P53、EGFR的表達比較，差異無統計學意義（P>0.05），說明腦膠質瘤患者腦組織中P53、EGFR的表達可能與上述因素無關。實驗組P53及EGFR陽性表達率均高于對照組（P<0.05），表明二者在腦膠質瘤組織中的表達高于正常腦組織。

不同級別膠質瘤組織中EGFR 表達率存在差異，在高級別膠質瘤中表達率明顯高于低級別膠質瘤，而在正常腦組織中基本沒有表達[9]。本研究中P53和EGFR陽性表達率均隨膠質瘤級別升高而升高，且不同級別膠質瘤中陽性表達率呈正相關，說明二者的表達水平與膠質瘤分級之間有密切關系，有助于評估腫瘤惡性程度，P53和EGFR過度表達可推測是膠質瘤不良分化的一種標志。

EGFR突變及過度表達可能為高度惡性膠質瘤的早期主要事件，P53也參與了此過程;而P53在低度惡性膠質瘤發生發展過程中同樣起作用，EGFR也參與了此過程，二者對腫瘤生發展可能存在促進作用。研究顯示[10]，P53及EGFR均可通過相關通路使血管內皮生長因子表達增高，促進腫瘤新生血管生成，為腫瘤生長提供必要營養，加速腫瘤細胞增殖，并形成惡性循環。本研究中腦膠質瘤組織中P53與EGFR表達無明顯相關性，與上述研究不一致，可能與本研究樣本量過小有關，有待進一步研究。

綜上所述，P53與EGFR在膠質瘤中隨腫瘤級別升高而使表達增強，說明P53、 EGFR均參與了膠質瘤的發生及惡化。因此同步檢測膠質瘤組織中的P53及EGFR，對膠質瘤分子生物學機制研究有重要意義，可能成為診斷膠質細胞瘤靶向治療的新靶點。

參考文獻：

[1]Khasraw M，Ameratunga MS，Grant R，et al.Antiangiogenic therapy for high-grade glioma[J].Cochrane Database Syst Rev，2014，9（9）：CD008218.

[2]趙清爽，王守森.TP53在髓母細胞瘤分子分型中的臨床意義與相關研究進展[J].臨床神經外科雜志，2017，14（4）：315-318.

[3]Canale M，Petracci E，Delmonte A，et al.Impact of TP53 mutations on outcome in EGFR-mutated patients treated with firstline tyrosine kinase inhibitors[J].Clin Cancer Res，2017，23（9）：2195-2202.

[4]Meder L，Konig L，Ozretic L，et al.NOTCH，ASCL1，p53 and RB alterations define an alternative patway driving neuroendocrine and small cell lung carcinomas[J].Int J Cancer，2016，138（4）：927-938.

[5]Rao S，Kanuri NN，Nimbalkar V，et al.High frequency of H3K27M immunopositivity in adult thalamic glioblastoma[J].Neuropathology，2019，39（2）：78-84.

[6]McNulty SN，Cottrell CE，Vigh-Conrad KA，et al.Beyond sequence variation：assessment of copy number variation in adult glioblastoma through targeted tumor somatic profiling[J].Human Pathology，2019（86）：170-181.

[7]Ogura R，Tsukamoto Y，Natsumeda M，et al.Immunohistochemical profiles of IDH1，MGMT and P53：Practical significance for prognostication of patients with diffuse gliomas[J].Neuropathology，2015，35（4）：324-335.

[8]Le Rhun E，Preusser M，Roth Pl.et al.Molecular targeted therapy of glioblastoma[J].Cancer Treatment Review，2019（80）：1-13.

[9]劉坤，王海江，孫振強，等.胃癌組織HER-2和VEGF及EGFR表達臨床意義研究[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（10）：781-785.

[10]殷長江，董保忠，杜曉光，等.腦膠質瘤患者圍術期腦脊液中HGF、TNF-α、IL-17水平變化及意義[J].山東醫藥，2016，56（9）：51-52.

收稿日期：2020-02-17;修回日期：2020-03-22

編輯/肖婷婷