NB-UVB聯(lián)合復(fù)方白芷酊及鹵米松乳膏對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者AMMC細(xì)胞黑素合成量的影響

方兆珺 李俊杰 周韻聰

[摘要]目的：探究窄譜中波紫外線（NB-UVB）聯(lián)合復(fù)方白芷酊及鹵米松乳膏對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)療效及患者毛囊外根鞘無(wú)色素黑素細(xì)胞（AMMC）黑素合成情況的影響。方法：選取2016年12月-2019年3月在筆者醫(yī)院皮膚科就診的70例進(jìn)展期白癜風(fēng)患者，隨機(jī)分成常規(guī)組（35例）和聯(lián)合組（35例）。常規(guī)組給予鹵米松乳膏+NB-UVB治療，聯(lián)合組在常規(guī)組的基礎(chǔ)上加用復(fù)方白芷酊。兩組患者均連續(xù)治療24周。觀察并比較兩組療效、不良反應(yīng)發(fā)生情況及AMMC細(xì)胞黑素合成量。結(jié)果：治療12周時(shí)，聯(lián)合組與常規(guī)組總有效率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（82.86% vs 68.57%，P>0.05）;治療24周時(shí)，聯(lián)合組總有效率高于常規(guī)組（97.14% vs 80.00%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組均有少部分患者出現(xiàn)輕度紅斑反應(yīng)，均在治療后自行緩解，無(wú)其他嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。聯(lián)合組AMMC細(xì)胞黑素合成量為顯著高于常規(guī)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：鹵米松乳膏+NB-UVB+復(fù)方白芷酊對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者療效顯著，能夠提高AMMC細(xì)胞黑素合成量，有效促進(jìn)白斑消退，緩解其臨床病癥，值得臨床推廣與應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]進(jìn)展期白癜風(fēng);窄譜中波紫外線;復(fù)方白芷酊;鹵米松乳膏;毛囊外根鞘;無(wú)色素黑素細(xì)胞;黑素合成

Abstract： Objective? To investigate the effect of narrow-band ultraviolet B （NB-UVB） combined with compound angelica dahurica tincture and halometasone cream on on the efficacy of vitiligo and melanin synthesis of amelanotic melanocytes （AMMC） in the outer root sheath of hair follicles in patients with progressive vitiligo. Methods? 70 patients with progressive vitiligo who visited the dermatological department of our hospital between December 2016 and March 2019 were randomly divided into the conventional group （35 cases） and the combined group （35 cases）. The conventional group was treated with halometasone cream +NB-UVB， while the combined group was treated with compound dahurian angelica tincture on the basis of the conventional group. All patients were treated continuously for 24 weeks. The curative effects， the occurrence of adverse reactions and in the two groups were observed and compared. Results? After 12 weeks of treatment， there was no significant difference in the total effective rate between the combined group and the conventional group （82.86% vs 68.57%， P>0.05）. At 24 weeks of treatment， the total effective rate in the combined group was higher than that in the conventional group （97.14% vs 80.00%， P<0.05）. A small number of patients in both groups developed mild erythema reaction， which were relieved after treatment without other serious adverse reactions. The amount of melanin synthesis in AMMC cells in the combined group was significantly higher than that in the conventional group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion? Halometasone cream +NB-UVB+ compound angelica dahurica tincture has a significant effect on patients with advanced vitiligo. It can improve melanin synthesis of AMMC cells， effectively promote leukoplakia regression. It is worthy of clinical promotion and application.

Key words： progressive vitiligo; narrow-band ultraviolet B （NB-UVB）; compound angelica dahurica tincture; halometasone cream; outer root sheath of hair follicle; amelanotic melanocyte（AMMC）; melanin synthesis

白癜風(fēng)是一種先天性或獲得性色素脫失性皮膚病，主要病理特征為黑素細(xì)胞漸進(jìn)性、選擇性破壞，亦有研究證實(shí)其屬于器官特異性自身免疫性皮膚病，T細(xì)胞亞群水平，與其病情進(jìn)展密切相關(guān)[1-3]。現(xiàn)階段，白癜風(fēng)治療方法及藥物種類眾多，但尚無(wú)根治辦法。如何選擇藥物以提高白癜風(fēng)的治療效果仍為當(dāng)下研究熱點(diǎn)之一。窄譜中波紫外線（Narrow-band Ultraviolet B，NB-UVB）及復(fù)方白芷酊、鹵米松乳膏等藥物治療是當(dāng)下常用治療方法，但關(guān)于其聯(lián)合應(yīng)用對(duì)白癜風(fēng)的療效研究報(bào)道甚少[4-5]。基于此，本研究對(duì)筆者醫(yī)院皮膚科就診的70例進(jìn)展期白癜風(fēng)患者為研究對(duì)象進(jìn)行對(duì)比性研究，旨在為提高白癜風(fēng)臨床治療效果提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理研究委員會(huì)審核通過(guò)后，選取2016年12月-2019年3月在筆者醫(yī)院皮膚科就診的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者，共70例，根據(jù)入院順序隨機(jī)分成常規(guī)組（35例）和聯(lián)合組（35例）。常規(guī)組：男16例，女19例;年齡21～56歲，平均（34.42±8.43）歲;皮損面積1%～5%，平均（3.27±0.84）%;病程：1個(gè)月～15年，平均（8.57±4.04）年;局限型12例，散在型4例，泛發(fā)型19例。聯(lián)合組：男15例，女20例;年齡18～57歲，平均（36.19±8.89）歲;皮損面積1%～5%，平均（3.19±0.82）%;病程：1個(gè)月～15年，平均（8.57±4.04）年;局限型13例，散在型5例，泛發(fā)型17例。常規(guī)組和聯(lián)合組進(jìn)展期白癜風(fēng)患者的性別、年齡、病程、白癜風(fēng)類型等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有均衡性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《白癜風(fēng)診療共識(shí)2018版》中進(jìn)展期白癜風(fēng)的相關(guān)癥狀、臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型[6];②年齡18～60歲，臨床資料完整，簽署知情同意書(shū);③近1個(gè)月內(nèi)未用過(guò)免疫調(diào)節(jié)劑、抗白癜風(fēng)藥物、抗白癜風(fēng)物理治療;④皮損無(wú)明顯感染征象者;⑤無(wú)血液系統(tǒng)疾病、活動(dòng)性消化道病史、臟器出血性病史者。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并銀屑病、濕疹、特應(yīng)性皮炎、梅毒性白斑、多形性日光疹、貧血痣、頭癬、無(wú)色素痣等其他皮膚病者;②合并自身免疫疾病、惡性腫瘤以及肝腎系統(tǒng)等嚴(yán)重受損者;③皮膚光過(guò)敏、存在紫外線照射禁忌、對(duì)本研究所用藥物過(guò)敏者;④合并精神病史、吸毒史、酗酒者;⑤2周內(nèi)外用過(guò)皮質(zhì)類固醇藥物者。

1.4 脫落標(biāo)準(zhǔn)：①療程中出現(xiàn)癥狀加重者;②受試期間合并應(yīng)用其他可能影響白癜風(fēng)治療效果的藥物者;③未按時(shí)復(fù)診者;④不愿繼續(xù)進(jìn)行臨床試驗(yàn)，主動(dòng)退出者。

1.5 方法

1.5.1 常規(guī)組：給予常規(guī)治療。首先予以鹵米松乳膏（生產(chǎn)企業(yè)：香港澳美制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：HC20100039，規(guī)格：10g）外用，皮損處涂抹，2次/d;然后給予NB-UVB治療儀（型號(hào)：UVl00L，德國(guó)Waldmann公司）照射皮損處，起始劑量為最小紅斑量的70%，若出現(xiàn)水皰或紅斑持續(xù)超過(guò)72h，下次治療劑量減少20%～50%，且治療時(shí)間應(yīng)推后至癥狀消失;若以起始劑量持續(xù)治療4次后未出現(xiàn)紅斑或紅斑持續(xù)時(shí)間<24h，治療劑量可增加10%～20%;若紅斑持續(xù)24～72h，則維持原劑量治療。每周2～3次。

1.5.2 聯(lián)合組：在NB-UVB治療后加用復(fù)方白芷酊（生產(chǎn)企業(yè)：北京市非凡制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字：B20020555，規(guī)格：50ml），于皮損處涂抹，2次/d。兩組患者均連續(xù)治療24周。

1.6 療效評(píng)定：全程監(jiān)測(cè)所有患者的生命體征，于治療前、治療后12周、24周行常規(guī)檢查，同時(shí)由同一醫(yī)師對(duì)患者皮損分布、面積、色素、白斑消退等的變化情況測(cè)量、對(duì)比及拍照存檔以評(píng)價(jià)臨床療效，可分為痊愈、顯效、有效、無(wú)效。白斑全部消退，恢復(fù)正常膚色記為痊愈;復(fù)色面積≥50%皮損面積，白斑部分消退或縮小記為顯效;復(fù)色面積為10%～49%，白斑小部分消退或縮小記為有效;復(fù)色面積<10%皮損面積，白斑無(wú)色素再生或范圍擴(kuò)大記為無(wú)效。總有效率=（痊愈+顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.7 觀察指標(biāo)：毛囊外根鞘無(wú)色素黑素細(xì)胞（AMMC）黑素合成情況：分別于治療前后采集兩組相關(guān)組織并進(jìn)行培養(yǎng)得AMMC細(xì)胞，參照Ando等[7]的方法對(duì)黑素合成情況進(jìn)行測(cè)定。AMMC細(xì)胞培養(yǎng)：把組織剪成小塊，在1% PBS（含20μg/ml慶大霉素、雙抗）中浸泡1h;再在0.5%～1%的Dispase中浸泡過(guò)夜;于第2天分離表皮、真皮，將表皮放入0.05%～0.1% Trypsin，并在37℃培養(yǎng)箱孵化15min，同時(shí)加入等量的10%胰酶抑制劑;然后取1 000g離心7min，加入1% PBS洗1遍;分別取3×106細(xì)胞放入培養(yǎng)瓶（75cm2），加入相應(yīng)的黑色素細(xì)胞培養(yǎng)液。黑素合成情況測(cè)定：收獲AMMC細(xì)胞后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，PBS液洗2次，依次加入200μl雙蒸水、1ml的乙醇、乙醚混合液（1：1）放置15min（室溫），離心5min（3 000r/min），取沉淀加入1ml NaOH（1mol/L，含10% DMSO），置80℃環(huán)境下30min溶解黑素，加入雙蒸水4ml把NaOH稀釋成0.2mol/L，然后分光光度計(jì)測(cè)定黑素的吸光度（A475nm） 。黑素含量可表示為（藥物處理組A475nm/細(xì)胞數(shù)）/（空白對(duì)照組A475nm/細(xì)胞數(shù)）×100。每一實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：患者白斑消退情況為計(jì)數(shù)資料，以例數(shù)（百分?jǐn)?shù)）[例（%）]表示，使用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析;AMMC細(xì)胞黑素合成情況為計(jì)量資料，使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x?±s）來(lái)表示，組間比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較使用配對(duì)t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2? 結(jié)果

2.1 兩組治療后12周、24周白斑消退情況比較：治療12周時(shí)，聯(lián)合組總有效率為82.86%，常規(guī)組總有效率為68.57%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;治療24周時(shí)，聯(lián)合組總有效率為97.14%，常規(guī)組總有效率為80.00%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 兩組不良反應(yīng)發(fā)生情況比較：兩組均有少部分患者出現(xiàn)輕度紅斑反應(yīng)，均在治療后自行緩解，無(wú)其他嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。

2.3 兩組治療后AMMC細(xì)胞黑素合成情況比較：治療前患者AMMC細(xì)胞黑素合成情況設(shè)定為1，治療后，聯(lián)合組AMMC細(xì)胞黑素合成量為4.32±1.27，常規(guī)組為3.29±1.15，聯(lián)合組顯著高于常規(guī)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.557，P=0.001）。

3? 討論

白癜風(fēng)病因及發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，臨床主要表現(xiàn)為皮膚黏膜脫色性白斑。進(jìn)展期白癜風(fēng)患者多表現(xiàn)為皮損逐漸擴(kuò)大、增多，可伴癢感等，嚴(yán)重影響患者的身心健康。在為進(jìn)展期白癜風(fēng)患者制定治療方案時(shí)，應(yīng)當(dāng)充分明確其臨床分型、皮損面積、部位、既往治療史和家族史等一般資料，并根據(jù)其制訂合理治療方案[8]。隨著中西醫(yī)的不斷發(fā)展，中西醫(yī)結(jié)合治療白癜風(fēng)成為當(dāng)下的熱點(diǎn)。其中，NB-UVB為常用西醫(yī)療法。而白癜風(fēng)的治療在中醫(yī)中已有幾千年歷史，復(fù)方白芷酊為其臨床常用中藥，具有良好的祛風(fēng)散邪、養(yǎng)血活血等功效[9-10]。本研究采用NB-UVB聯(lián)合復(fù)方白芷酊對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者進(jìn)行治療取得了較好效果。

祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，風(fēng)邪挾瘀是進(jìn)展期白癜風(fēng)的主要病理機(jī)制，又稱白駁風(fēng)、白癜等，文獻(xiàn)記載：“白癜風(fēng)……肝腎虧虛，風(fēng)邪挾瘀阻絡(luò)而致病”，故臨床治療應(yīng)以祛風(fēng)散邪、養(yǎng)血活血、滋補(bǔ)肝腎為主[11]。復(fù)方白芷酊主藥為補(bǔ)骨脂、白芷、蛇床子，同時(shí)輔以防風(fēng)、冰片、秦艽、馬齒莧、甘草、梔子等，其中補(bǔ)骨脂等可補(bǔ)氣補(bǔ)血、滋養(yǎng)肝腎、理氣活血;甘草、白芷等可潤(rùn)澤、祛風(fēng)、發(fā)散通絡(luò);甘草可調(diào)和諸藥，全方可養(yǎng)血益膚、祛風(fēng)通絡(luò)、調(diào)和氣血、潤(rùn)澤顏色、烏鬢等對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者發(fā)揮較好的治療效果。此外，復(fù)方白芷酊的主藥中均含有呋喃香豆類成分，配合NB-UVB照射后，可抑制表皮細(xì)胞DNA的合成、細(xì)胞的分裂，亦可增加細(xì)胞數(shù)量、提高其活性，還能使酪氨酸酶的活性顯著增強(qiáng)，促進(jìn)黑色素的生成，亦可保護(hù)黑素細(xì)胞DNA，使其避免氧化損傷，促進(jìn)AMMC細(xì)胞黑素合成，從而使白斑恢復(fù)正常膚色[12-13]。故而，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用復(fù)方白芷酊軟膠囊，可顯著提高治療效果，治療24周時(shí)，聯(lián)合組總有效率高于常規(guī)組（97.14% vs 80.00%）。

鹵米松乳膏為外用糖皮質(zhì)類固醇藥物，具有良好的收縮血管、抗過(guò)敏、抗炎、止癢、抗表皮增生等作用[14-15]。NB-UVB穿透性強(qiáng)，對(duì)皮膚的損傷及致癌性均較小，能夠有效促進(jìn)黑素細(xì)胞向皮損處移行，同時(shí)刺激或激活皮膚處及其周?chē)谒丶?xì)胞產(chǎn)生黑素，進(jìn)而促進(jìn)毛囊黑素細(xì)胞增殖。復(fù)方白芷酊中的中藥成分大多具有調(diào)節(jié)免疫的功能，進(jìn)而有效改善T淋巴細(xì)胞的表達(dá)水平，且補(bǔ)骨脂、白芷則為光敏藥物，可增強(qiáng)皮膚對(duì)紫外光的敏感性，進(jìn)而有效激發(fā)黑素細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸酶，促進(jìn)黑素的生成，蛇床子、秦艽、防風(fēng)等則可活血通脈、改善局部微循環(huán)，加速黑素再生，亦可祛風(fēng)止癢，緩解患者的臨床癥狀[16-17]。故而，鹵米松乳膏+NB-UVB+復(fù)方白芷酊對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者具有良好的治療作用，且不良反應(yīng)發(fā)生較少，安全性高。

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[收稿日期]2019-10-18

本文引用格式：方兆珺，李俊杰，周韻聰，等.NB-UVB聯(lián)合復(fù)方白芷酊及鹵米松乳膏對(duì)進(jìn)展期白癜風(fēng)患者AMMC細(xì)胞黑素合成量的影響[J].中國(guó)美容醫(yī)學(xué)，2020，29（4）：105-108.