大豆磷脂中α-生育酚的檢測方法學研究

徐璠峰，王 翠，時 晨

（南京威爾藥業股份有限公司，江蘇南京 210042）

大豆磷脂不僅具有較強的乳化、潤濕、分散作用，還在促進體內脂肪代謝、肌肉生長、神經系統發育和體內抗氧化損傷等方面發揮很重要的作用。大豆磷脂可以抑制腸內膽固醇的吸收，故能降低血液膽固醇和抗脂肪肝的作用。此外本品還能促進細胞增殖，使其活力旺盛。主要用于動脈粥樣硬化，急、慢性肝炎，脂肪肝，肝硬化，神經衰弱等。制成軟膏可用于慢性潰瘍等。

大豆磷脂作為藥用輔料目前已收錄于中國藥典2015版，EP9.0和USP40中，對相關質量指標提出了更高的要求，但在這幾國藥典中，均未對大豆磷脂中的抗氧劑做出要求，抗氧劑的加入會對以大豆磷脂為輔料的制劑穩定性和安全性產生未知的影響，所以增加抗氧劑的檢測是必不可少的。

本文主要介紹一種抗氧劑α-生育酚的檢測方法，通過HPLC 的分析手段，能準確、迅速、簡便地分析出大豆磷脂中α-生育酚的含量。

1 試驗樣品

甲醇，ACS 公司，63Y1808AD，色譜級；乙醇，ACS 公司，43Y1803AT，色譜級；α-生育酚，阿拉丁，K1729039，分析純；大豆磷脂，上海太偉。

2 方法驗證

2.1 專屬性和系統適用性實驗

分別取空白溶劑、α-生育酚對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，結果空白溶劑在生育酚出峰位置沒有干擾。

2.2 檢測限和定量限

取α-生育酚對照溶液逐級稀釋至S/N 約為10作為定量限，S/N 約為3作為檢測限。結果分析：α-生育酚達到0.1226μg/ml（24.52×10-6）時可以被檢出，濃度達到0.306 5μg/mL（61.3× 10-6）時可以被定量。如表1所示：

表1 α-生育酚檢測限和定量限

2.3 線性范圍

精密稱取α-生育酚對照品0.103 2g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作線性儲備液（α-生育酚1.032mg/ml），取此溶液適量，加乙醇分別稀釋至不同濃度的溶液，作為不同濃度的對照溶液，分別取不同濃度的混合對照溶液10μL 注入液相色譜儀，實驗結果顯示：y=1.021x-1.364，R2=0.999，表明線性良好。

2.4 進樣精密度實驗

精密稱取α-生育酚對照品0.1032g，置于100ml 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作儲備液（α-生育酚1.032mg/ml），取α-生育酚對照品儲備液0.25ml 至50ml 容量瓶，加乙醇溶解并稀釋至刻度即得對照溶液（α-生育酚5.16μg/ml）。取對照溶液連續進樣6針，考察進樣精密度，結果表明α-生育酚進樣的相對標準偏差RSD 小于0.48%，說明測定數據間的波動性小，即本方法精密度試驗符合要求。如表2所示。

表2 α-生育酚進樣精密度

2.5 重復性

取大豆磷脂（R161-150-1）樣品100mg，精密稱定，置20ml 量瓶中，加乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液，按照測定方法進行測定，平行操作6份，計算α-生育酚的含量，均未檢出。結果表明，該方法重復性良好。

2.6 回收率試驗

精密稱取α-生育酚對照品0.106 0g，置于100mL 容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度作儲備液（α-生育酚1.060mg/mL），取α-生育酚對照品儲備液1mL 至20mL 容量瓶，加乙醇溶解并稀釋至刻度即得對照溶液（α-生育酚53μg/mL）。取大豆磷脂（R161-150-1）樣品100mg，精密稱定，置20mL量瓶中，加溶劑適量使溶解，分別加入α-生育酚對照品溶液1.2、1.0、0.8mL，加溶劑稀釋至刻度，作為供試品溶液，按外標法以峰面積計算測得量，計算回收率，每個水平平行操作3份，計算回收量和回收率。如表3所示。

表3 α-生育酚加樣回收率

結果表明：相對標準偏差RSD 為1.17%，該方法測定α-生育酚，回收率良好。

2.7 α-生育酚方法的建立

2.7.1 供試品溶液的制備取本品100mg，精密稱定，置20mL 量瓶中，加乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.7.2 對照溶液的制備精密稱取α-生育酚對照品適量，加乙醇定量稀釋至α-生育酚濃度為5μg/mL，作為對照品溶液。

2.7.3 限度

按外標法以峰面積計算，α-生育酚不得過1 000×10-6。

2.8 樣品檢測

按已建立的方法檢測本品中的α-生育酚，檢測太偉和我司產品，結果顯示：太偉和我司產品Well（R161-150-1）中α生育酚均未檢出。

3 結束語

上述大豆磷脂中α-生育酚含量的檢測方法在專屬性、線性和范圍、檢測限、定量限、準確度、精密度等方面均表現良好。