“奧尼爾”藍莓增殖及生根培養(yǎng)研究*

李軍萍，徐崢嶸，楊遂明

（云南省玉溪農業(yè)職業(yè)技術學院，云南玉溪 653106）

藍莓為杜鵑花科越橘屬植物，藍莓果實為藍色或紅色，酸甜適中，營養(yǎng)豐富，特別是抗氧化能力為所有果品蔬菜之首，具有極高的營養(yǎng)價值和醫(yī)療保健作用，堪稱“世界水果之王”。“奧尼爾”是南高叢藍莓的代表品種之一，適合栽培在暖溫帶至亞熱帶地區(qū)，極早熟至早熟，具有極豐產、果個大、暗藍色、果粉較多、果肉質硬、香味濃、風味佳、果蒂痕小、耐貯運等特點，對土壤的適應性較強，適宜在我國長江流域大部分地區(qū)種植。作為21世紀極具發(fā)展?jié)摿Φ囊粋€新興樹種，大規(guī)模發(fā)展藍莓產業(yè)勢在必行，但由于其材料來源有限、繁殖系數(shù)低、無法實現(xiàn)規(guī)模化生產，而組織培養(yǎng)是解決這一問題的重要途徑。試驗以“奧尼爾”藍莓組培苗為材料，研究培養(yǎng)基激素濃度、種類及組合、活性炭濃度對藍莓增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的影響，篩選出最佳的增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)條件，為實現(xiàn)藍莓工廠化、規(guī)模化生產提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為“奧尼爾”藍莓無菌初代組培瓶苗。

1.2 試驗方法

1.2.1 增殖培養(yǎng)

試驗分兩步進行，首先在WPM培養(yǎng)基中加入ZT（玉米素）（1.0 mg/ L、1.5 mg/ L、2.0、2.5 mg/ L）和2 ip（異戊烯基腺嘌呤）（4.0 mg/ L、8.0 mg/ L、12.0 mg/ L），共7個處理，然后在第一步的最佳處理中添加 IBA（0.1 mg/ L、0.15 mg/ L、0.2 mg/ L、0.25 mg/ L）共4個處理，篩選出最佳增殖培養(yǎng)基配方。所有處理每個月繼代1次。

將誘導的無菌芽切成1.5 cm長，分別接種到不同的培養(yǎng)基中。每瓶培養(yǎng)基接種2個芽,每個處理重復30次。將接種好的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)室內培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度 25℃ ± 1℃，光照 12 h /d，光照強度 2 000 Lx。30 d 后統(tǒng)計各處理芽苗生長狀況及增殖系數(shù)。培養(yǎng)基均以WPM為基本培養(yǎng)基，加入0.7%瓊脂和 3% 的蔗糖，pH4.8～5.0。

1.2.2 生根培養(yǎng)

取繼代增殖培養(yǎng)基中生長健壯的2～3 cm“奧尼爾”藍莓幼苗，轉接于含不同濃度IBA和活性炭的生根培養(yǎng)基中。每瓶接種5棵單苗，6次重復。接種后置于 25 ℃±1 ℃ 的室內恒溫條件下暗培養(yǎng)1周,然后轉移到光暗周期為16 h/8h條件下培養(yǎng) ,光照強度 1500 Lx。60 d 后觀察記錄苗生根情況。培養(yǎng)基均以WPM為基本培養(yǎng)基，加入0.7%瓊脂和 2% 的蔗糖，pH4.8～5.0。

1.3 數(shù)據(jù)處理分析

增殖系數(shù)=總叢生芽數(shù)/總接種芽個數(shù)；

生根率=生根組培苗數(shù)/接種組培苗數(shù)×100%；

平均生根數(shù)（條/株）=生根總條數(shù)/生根苗數(shù)；

平均根長（ cm）=所有根總長度/生根總條數(shù)。

2 結果與分析

2.1 細胞分裂素對藍莓增殖培養(yǎng)的影響

由表1知，不同細胞分裂素種類及濃度對藍莓增殖系數(shù)及生長影響很大，ZT增殖效果明顯優(yōu)于2 ip。添加ZT的4個處理平均增殖系數(shù)為3.40，而添加2 ip的3個處理平均增殖系數(shù)僅為2.57。在添加ZT的4個處理中，增殖系數(shù)隨著濃度增大呈現(xiàn)先升高后降低，ZT為2.0 mg/ L時增殖系數(shù)最大，達到4.2。從生長狀況看，添加ZT和2 ip的株高差異不大，總體長勢瘦弱。因此，只添加細胞分裂素時，“奧尼爾”藍莓最佳增殖培養(yǎng)基配方是 WPM＋ ZT2.0 mg/ L。

表1 細胞分裂素對藍莓增殖培養(yǎng)的影響

表2 ZT與生長素IBA組合對藍莓增殖培養(yǎng)的影響

2.2 ZT與生長素IBA組合對藍莓增殖培養(yǎng)的影響

由表2知，添加生長素IBA后，腋芽的萌發(fā)率明顯提高，添加IBA后的4個處理平均增殖系數(shù)為7.55，比只添加ZT的高出4.15，增長了122.05%。在添加IBA的4個處理中以0.20 mg/ L的增殖系數(shù)最高，達到了8.4。從芽苗的生長狀況看，添加IBA后腋芽的生長速度也顯著高于只添加細胞分裂素的培養(yǎng)基，芽苗生長健壯，葉色嫩綠，平均株高從原來只添加ZT的0.95 cm增高到1.35 cm，增高了42.11%。綜合增殖系數(shù)和生長狀況，“奧尼爾”藍莓最佳增殖培養(yǎng)基配方是 WPM＋ZT2 mg/ L＋IBA0.2 mg/ L。

2.3 不同濃度IBA對藍莓生根培養(yǎng)的影響

從表3知，生根培養(yǎng)基中添加IBA后，對藍莓組培苗生根有促進作用。而不同濃度IBA對于藍莓生根和長勢尤為明顯：在 0.1 ～ 1.2 mg/ L 范圍內，生根量和生根率隨著濃度增大而增大，但到0.8 mg/L后，二者開始下降。從苗的長勢看，隨著IBA濃度的增大，苗的長勢逐漸變強。綜合看, WPM +0.8 mg/ L的IBA生根培養(yǎng)基對藍莓生根量、生根率及根苗長勢效果最好。

2.4 不同活性炭濃度對藍莓生根培養(yǎng)的影響

在 WPM +0.8 mg/ L 的 IBA 培養(yǎng)基中添加不同濃度的活性炭。從表4知，在“奧尼爾”藍莓生根培養(yǎng)中，添加適量的活性炭對于生根數(shù)、生根率、根長、生根時間的縮短有明顯促進作用。添加200 mg/ L、400 mg/ L 的活性炭生根率達到 85.7% 和85.6%，平均根長為3.1和3.5，平均根數(shù)為8.3條、8.2條，生根時間縮短了4～5 d。試驗結果表明：“奧尼爾”藍莓生根培養(yǎng)中添加活性炭的適宜范圍是 200 ～ 400 mg/ L。

3 結果與討論

3.1 結 果

實驗表明：“奧尼爾”藍莓增殖培養(yǎng)中，ZT增殖效果明顯優(yōu)于2 ip，只添加細胞分裂素時，“奧尼爾”藍莓最佳增殖培養(yǎng)基配方是 WPM ＋ ZT2.0 mg/L，綜合增殖系數(shù)和生長狀況，“奧尼爾”藍莓最佳增殖培養(yǎng)基配方是 WPM ＋ ZT2 mg/ L ＋ IBA0.2 mg/L。“奧尼爾”生根培養(yǎng)中添加0.8 mg/ L濃度的IBA對藍莓生根量、生根率及根苗長勢效果最好。WPM+0.8 mg/ L 的 IBA 生根培養(yǎng)基中添加 200 ～ 400 mg/L的活性炭，對于生根數(shù)、生根率、根長、生根時間的縮短有明顯促進作用。

3.2 討 論

細胞分裂素不僅可以促進植物組織的分化，還可以抑制頂端優(yōu)勢，促進腋芽的萌發(fā)。藍莓增殖培養(yǎng)常用的細胞分裂素有ZT、2 ip、6-BA等，但6-BA的誘導效果差，因此在本試驗設計中沒有采用添加6-BA的處理。試驗結果表明，添加ZT的增殖效果明顯好于添加2 ip，說明ZT 在藍莓增殖培養(yǎng)過程中起關鍵作用，但因其價格較貴，在實際生產中用量較大，導致生產成本提高，尋求一種替代物解決生產成本過高問題值得進一步研究。

表3 不同濃度IBA對藍莓生根培養(yǎng)的影響

表4 不同活性炭濃度對藍莓生根培養(yǎng)的影響

廉家盛、李森、史文君、蘇艷、張力思等研究表明ZT 對藍莓叢生芽的誘導和增殖具有顯著效果，且不同的藍莓品種其用量也有差別。藍豐和維爾康誘導腋芽萌發(fā)效果最適ZT濃度為1.0 mg/ L，夏普蘭的則為1.251 mg/ L。本試驗中，“奧尼爾”最適ZT濃度為2.0 mg/ L，這與王大平等的研究一致。研究表明：隨著ZT濃度從1.0 mg/ L增至2.5 mg/ L, 增殖系數(shù)隨著濃度增大呈現(xiàn)先升高后降低,這個規(guī)律與徐宏，胡勇的研究一致。

很多研究表明，活性炭能明顯促進根的伸長生長。培養(yǎng)基中加入活性碳的主要目的是利用其吸附能力，減少一些有害物質的影響，而且活性炭會使培養(yǎng)基變黑，從而有利于某些植物生根。但隨著活性炭濃度增加其促進根生長的作用減弱。這可能是由于活性炭是一種吸附性較強的無機吸附劑，在吸附培養(yǎng)過程中有害物質的同時，也吸附培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分。雖然活性炭對藍莓根生長有一定的促進作用，但須選擇適宜的濃度，否則對生根會有抑制作用。

藍莓為弱根系無根毛植物，常規(guī)條件下生根周期長。“奧尼爾”生根培養(yǎng)過程中生根質量受外源激素的種類和濃度、活性炭濃度以及光照條件等多種因素的影響。本試驗僅只是對IBA和活性炭進行了初步研究，要提高“奧尼爾”生根質量，還需要從生根機制、遺傳機理后續(xù)基質的選擇、移栽條件等方面做進一步的研究。