基于國標血常規參考區間的驗證分析

杜桂艷，唐生堯，皮豐華，熊建，徐瑤

（1 恩施市婦幼保健院檢驗科，湖北 恩施；2 湖北民族大學附屬民大醫院檢驗科，湖北 恩施）

0 引言

參考區間，俗稱參考范圍，是兩參考限之間包括兩參考限的區間，通常是參考分布中間95%區間。臨床醫生根據參考區間對病人進行檢驗報告的解釋。不適宜的參考區間給醫生的診療工作帶來不便，甚至導致不合理的醫學干預。血細胞分析參考區間行業標準指出，實驗室應首選通用參考區間[1]。目前實驗室在用的參考區間來源于教科書或廠家說明書，國標WS/T405 建議進行一定標本數的適用性驗證分析。恩施地區具有獨特的地域環境和多少數民族，通過對引用的WS/T405 血細胞分析參考區間進行驗證，為本科室選擇符合所服務人群的參考區間提供依據。

1 參考個體的選擇與實驗方法

1.1 參考個體的選擇

從本地免費婚檢和免費孕前優生健康檢查人群中募集，按照WS/T405-2012 篩選標準，篩選出符合下列條件的人群：（1）自覺健康，無血液系統疾病（貧血、白血病、血小板疾病）和急慢性感染；（2）目前無就醫治療情況；（3）近期未服用過任何藥物；（4）近期未曾獻血或輸血；（5）無完全素食或節食等特殊飲食；（6）無高血壓、高血脂；（7）近期未做劇烈運動；（8）未長期飲酒或1 周內大量飲酒；（9）無吸煙量＞20 支/d；（10）女性未處于特殊時期如月經期或妊娠期。最終確定了男女健康參考個體。

1.2 儀器與試劑

儀器為日本sysmex XN-2800 全自動五分類血細胞分析儀；試劑為日本sysmex XN-2800 原裝配套試劑和質控品。

1.3 實驗方法

1.3.1 檢測系統

按照儀器標準操作規程對儀器進行日常操作和維護保養，每日用中值濃度水平的質控品進行室內質控，質控結果在控，變異系數CV 也在允許范圍內，確保了儀器的精密度。本年度參加湖北省臨床檢驗中心的三次室間質量評價成績均為100 分。

1.3.2 樣本的采集與檢測

按照樣本采集手冊，進行參考個體血液樣本的采集。（1）參考個體準備：采血者未突然改變正常生活飲食習慣，3d 內未做劇烈運動和重體力勞動，采血當天至少空腹8h 以上。（2）采血：參考個體采取坐位，真空靜脈采血，抽取肘靜脈血2ml 于紫色抗凝管內，顛倒混勻。（3）上機檢測：按照儀器和項目標準操作程序進行樣本檢測，對白細胞（white blood cell ，WBC）計數、紅細胞（red blood cell ，RBC）計數、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、紅細胞比積（hematocrit，Hct）和血小板（platelet ，PLT）計數這5 個項目的檢測結果進行記錄。

1.3.3 剔除離群值

離群值檢驗采用 Dixon 方法。首先分別將5 個項目的檢測結果按照大小排序并計算極差 R，然后分別計算最大值和最小值與其相鄰數值之差 D(Dmax 和Dmin)，若 D/R ≥1/3則將最大值或最小值視為離群值予以剔除。將余下數據重復前述步驟進行離群值檢驗，直至剔除所有離群值。剔除離群值后則另選參考個體直到補足20 個數據。最終保留了每個項目各20 個合格實驗數據。

1.3.4 參考區間的驗證

根據WS/T405 的驗證要求，將參考個體檢測值與引用的參考區間比較，計算比率R ，比率（R）= 檢測值在引用區間的參考個體數/總的參考個體數。若R ≥ 90%，驗證結果可以接受，說明可以引用該參考區間；若R ＜ 90%，則分析查找原因后重新進行參考區間的驗證 ，即另選至少20 名合格參考個體,重新按照上述判斷標準進行驗證。

2 結果

2.1 離群值檢驗

采用 Dixon 方法，WBC、RBC、Hb、PLT 和Hct 這5 個項目的所有檢測結果的D/R ＜1/3，說明所收集的檢測數據為合格的實驗數據，見表1。

表1 離群值檢驗

表2 參考區間驗證結果

2.2 所得檢測結果與參考區間比較

落在參考區間的數據大于90%，表示驗證通過，可直接使用參考區間，見表2。

3 討論

參考區間是解釋檢驗結果、分析檢驗信息的基本尺標，是臨床判斷受試者健康與否的依據，實驗室必須保證給臨床提供的參考區間正確實用，否則會導致漏診、誤診。本科室服務的主要人群集中在18-59 歲，因此本次實驗選取的參考個體年齡設置在18-59 歲，未納入兒童參考個體。兒童因其生長發育的生理性原因，其全血細胞計數參考區間與成人存在較大差別，成人的參考區間并不適用于兒童[2]。在男、女之間RBC、Hb、Hct 三項的參考區間由于性別差異，參考區間具有統計學差異[3]，所以在驗證過程中RBC、Hb、Hct 三項需要分別收集至少20 名參考個體驗證男、女的參考區間。在RBC、Hb、Hct 三項結果有性別差異，主要原因是男性睪酮水平表達高于女性，而睪酮會促進促紅細胞生成素的分泌，使RBC、Hb、Hct 相應增高，故男性RBC 相關參數高于女性[4]。WBC 在男、女性別間差異無統計學意義[5]。

本次試驗是在儀器性能可靠，室內質控在控，室間質量評價成績100 分的前提下進行的，選擇了本地區健康參考個體男女至少20 名進行的參考區間驗證。在WBC、RBC、Hb、、Hct、PLT 這五項結果均落在WS/T405 血細胞分析參考區間范圍內，表示驗證通過，與同類報道相似[6]。由于醫學教材血常規參考區間與衛生部WS/T405 血細胞分析參考區間范圍不一致，在臨床應用中是否需要修改統一，仍需進行臨床科室的驗證和探討[7]。在日常工作中，我們不僅要為臨床發出及時可靠的檢測報告，還應提供合理的參考區間，為臨床醫生判斷病情和給予治療提供診斷依據[8]。