副溶血性弧菌毒性相關因子及其外分泌蛋白的研究進展

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(1.徐州工程學院食品(生物)工程學院,江蘇徐州 221018; 2.徐州工程學院江蘇省食品資源開發與質量安全重點建設實驗室,江蘇徐州 221018; 3.山東省棗莊市市中區環保局環境監測站,山東棗莊 277100)

副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)隸屬于γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria),弧菌目(Vibrionales),弧菌屬(Vibrio),是一種無芽孢的嗜鹽嗜堿性的革蘭氏陰性短桿狀細菌。1950年,日本大阪發生了一起由沙丁魚引發的爆發性食物中毒事件,造成了272人感染腹瀉疾病,20人死亡,這是世界首次對V.parahaemolyticus引發的食物中毒事件的報道[1]。自此之后,該細菌引發的食物中毒事件陸續被報道,現已成為世界范圍內重要的食源性致病菌。V.parahaemolyticus廣泛存在于近海的海水、海底沉積物和魚、蝦、貝殼等海產品中,例如,牡蠣、鮑魚、海魚、海蝦、海蟹、海蜇等。除海產品外,淡水魚、咸菜、畜禽肉、蛋品等食品中均檢測到V.parahaemolyticus[2]。該菌在環境中的分布與溫度和鹽度息息相關,夏秋季為其引發食物中毒的高發季節。生態學研究表明,V.parahaemolyticus冬季主要存在于海底沉積物中,晚春或初夏時分,當水溫上升到14 ℃以上時,該菌會由沉積物釋放到水體環境中[3]。低溫水域新鮮捕獲的海產品中,V.parahaemolyticus的密度通常低于103cfu/g,而在溫度偏高的水域中,海產品中該菌的密度則高于103cfu/g,若未經冷藏,該菌在24 h內會呈現50～790倍的增長[4]。國家食源性監測網對我國食源性疾病發生情況的監測統計數據顯示,每年因V.parahaemolyticus導致急性腹瀉病例665.5萬人,占食源性病例的68.0%,比例遠高于發達國家水平且主要發生在我國東南沿海地區[5]。隨著經貿及交通運輸的迅速發展,V.parahaemolyticus引發的食物中毒已經由沿海地區逐漸向內地發展,已發展成為嚴重的食源性公共衛生問題[6-7]。

流行病學研究顯示,頻繁外出就餐及貝類消費是V.parahaemolyticus感染的兩個危險因素[6]。生食或食用未完全煮熟的被該菌污染的海產品或鹽腌漬品會引起食物中毒,一般發病潛伏期為4～96 h[8]。主要引起急性腸胃炎,其感染率及嚴重性取決于感染劑量和菌株毒力,通常會伴隨腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、畏寒發熱,大便似水樣等癥狀。大部分病人發病后3 d左右恢復正常,少數嚴重病人若搶救不及時,會導致死亡[9]。部分臨床病例顯示,V.parahaemolyticus會引起淺表創傷感染,通常發生在有傷口的漁民身上[10]。若患有肝臟疾病,免疫疾病等自身免疫力低下的患者感染V.parahaemolyticus可導致敗血癥,嚴重威脅生命[9]。V.parahaemolyticus在環境中廣泛存在,但僅有很少一部分菌株具有致病性,且其致病能力通常是與宿主細胞之間的相互作用而決定。一般認為,致病菌的毒性及抗藥性主要是通過分泌系統分泌蛋白和毒素進入外界環境,或者直接作用宿主細胞的靶位點,使宿主致病,水平傳播耐藥基因[11]。本文從V.parahaemolyticus毒性相關因子及其分泌系統相關分泌蛋白進行概述,概括闡明近年來針對V.parahaemolyticus毒性及分泌蛋白的相關研究進展。

1 V. parahaemolyticus毒性相關因子和結構

V.parahaemolyticus在致病過程中,菌株產生毒素,直接作用于宿主表面或進入宿主細胞,對細胞造成損傷及干擾破壞正常代謝或機能。這些過程與V.parahaemolyticus毒力因子息息相關,主要包括溶血素、尿素酶、黏附因子和分泌系統等。另外,V.parahaemolyticus的鞭毛系統,生物被膜和群體感應也是其生存及侵入宿主的重要因子[10](圖1)。

圖1 V. parahaemolyticus毒力相關因子Fig.1 Virulence factors of V. parahaemolyticus

1.1 溶血素

溶血素(Hemolysin)是V.parahaemolyticus中首先被發現、鑒定的毒力相關因子,包括耐熱直接溶血素(Thermostable direct hemolysin,TDH)、耐熱直接相關溶血素(TDH-related hemolysin,TRH)和不耐熱溶血素(Thermolabile hemolysin,TLH)。其中,與V.parahaemolyticus引起的腸胃炎直接相關的是TDH和TRH。

1950年在日本大阪腸胃炎爆發期的臨床樣本中分離到的V.parahaemolyticus在我萋氏平板(Wagatsuma blood agar)上會產生溶血圈,這種現象被稱為神奈川現象(Kanagawa phenomenon,KP)。Sakurai等[12]首次發現溶血素直接作用于紅細胞,并會導致KP現象。在100 ℃條件下加熱10 min,其生物學活性不會喪失,之后將其命名為TDH。研究發現,利用TDH制備的抗血清可以有效抑制KP現象,因此,TDH可用于檢測V.parahaemolyticus的致病性。除溶血活性之外,TDH作為一種成孔蛋白,可以在細胞膜上形成通道,改變細胞滲透壓,進而破壞腸上皮細胞,增加細菌的侵襲能力[13]。此外,TDH還具有心臟毒性[14-15]。

1985年在馬爾代夫爆發的腹瀉事件中,臨床分離的V.parahaemolyticus呈現KP陰性。研究發現,除TDH以外,還存在另一重要致病因子—TRH[16]。此致病因子的生物學活性與TDH相似,也具有腸毒性和細胞毒性,但其對熱的耐受能力最高上限為60 ℃處理10 min[17]。流行病學研究發現,90%～99.8%的臨床分離株中可檢測到tdh或/和trh基因,而環境分離株中僅0.2%～10%檢測為陽性。因此,tdh和trh基因成為判定V.parahaemolyticus是否具有致病性的檢測依據[9]。

除了上述兩種溶血素之外,V.parahaemolyticus還產生TLH,此種溶血素只在卵磷脂存在條件下才具有溶血活性,因此并不作為其主要毒力相關溶血素[18]。但是,TLH在該菌中廣泛及特異性存在,其編碼基因tlh制備的基因探針已用于V.parahaemolyticus菌株特異性的檢測[19]。

1.2 尿素酶

尿素酶(Urease)由ure基因簇編碼,其分子質量為275 kDa,等電點為5.2,在細菌感染中較為常見,是許多細菌重要的致病因子[20-21]。研究表明,V.parahaemolyticus尿素酶和TRH有著密切的關系。Suthienkul等[22]對分離自泰國腹瀉患者的489株V.parahaemolyticus的研究發現,8%的菌株呈現尿素酶檢測陽性(Ure+),并且這些菌株均含有trh基因,而不攜帶trh的菌株,其尿素酶檢測均呈陰性(Ure-)。Okuda等[23]對1979至1995年美國西海岸分離得到的Ure+和Ure-的V.parahaemolyticus進行檢測,結果發現Ure+菌株,分別有90%和98%攜帶tdh和trh基因,在Ure-菌株中,80%攜帶tdh而trh的檢出率則為0。因此,尿素酶可作為KP檢測為陰性的V.parahaemolyticus致病菌株的一個重要生物學標志。

1.3 黏附因子

病原菌與宿主細胞的接觸通常是引起感染的首要條件。黏附因子分布于細胞表面或釋放到胞外,為其毒性因子與宿主細胞的接觸提供平臺[24]。研究發現,在V.parahaemolyticus侵染過程中,莢膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)、甘露糖敏感血凝素(Mannose-sensitive hemagglutinin,MSHA)和多價粘附分子7(Multivalent adhesion molecule 7,MAM7)可為細菌提供對宿主細胞的黏附能力。

CPS位于細菌細胞壁外,其組成、結構、細菌的病原性和血清型相關,受LuxR-型群聚轉錄調控因子OpaR的調控[25]。V.parahaemolyticus的CPS在其致病性中發揮重要作用[26]。研究表明,V.parahaemolyticus存在透明和不透明兩種菌落形態,OP型菌落會產生更多的CPS,對上皮細胞Int-407的黏附能力比TR型高出10倍。當TR生長轉變為OP型時,其CPS生成能力及對細胞的黏附力也恢復到OP型菌落的水平[27-28]。

MSHA屬于IV型菌毛超家族成員,在IV型菌毛的凝血活性中起決定作用,但受甘露糖及其水解產物1-α-D吡喃甘露糖的特異性抑制[29-30]。研究發現,缺失MASH的菌株,對Caco-2細胞的黏附能力下降,并且誘導Caco-2細胞的裂解,并且細胞圓形化和白細胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)分泌能力隨之減弱,影響菌株對宿主細胞的黏附及致病性[31]。

MAM7在革蘭氏陰性菌中保守存在,含有高度保守的N-末端跨膜結構域和七個哺乳動物細胞入侵(Mammalian cell entry,mce)結構域,在細菌黏附宿主細胞的初始過程和III型分泌系統(T3SS)誘導的細胞死亡中起關鍵作用[32]。研究發現,在非致病性大腸桿菌(Escherichiacoli)中表達MAM7,可使其產生細胞黏附能力[32]。抑制V.parahaemolyticus中MAM7的表達,V.parahaemolyticus對宿主細胞的黏附能力和毒性均下降。在其他存在MAM7的致病性革蘭氏陰性菌中也存在這一現象[33-34]。MAM7與膜磷脂酸和纖維連接蛋白相結合,在細菌與宿主細胞之間形成三分子復合物,介導細菌黏附宿主細胞的初始階段[32,35]。與其他已知的與脂質配體(肌醇磷酸鹽或溶血磷脂酸)結合的蛋白,例如,Raf-1,mTOR,SHP-1不同,MAM7與宿主細胞膜磷脂酸具有高度親和特異性[36]。MAM7與纖維連接蛋白在黏附初始過程中起到拉伸作用,可增大黏附接觸面積[10]。MAM7的生物學特性,使其為V.parahaemolyticus或其他致病菌感染疾病的治療提供了潛在的藥物靶標。

2 V. parahaemolyticus分泌系統概述

細菌的分泌系統可介導大分子轉運穿過細胞膜,不同細菌所分泌的蛋白質其功能亦有差異,但研究表明,致病菌通常是通過相對較少的幾種分泌機制分泌毒性蛋白或效應因子,當其進入外界環境或直接作用于宿主靶位點時即可使宿主致病,目前認為有Ⅰ-Ⅸ九型[37]。其中,較常見的為Ⅰ-Ⅶ型。Ⅰ型分泌系統(Type I secretion system,T1SS)由ATP結合轉運蛋白(ABC protein)、膜融合蛋白(Membrane fusion protein,MFP)和外膜孔道構成,主要是一步分泌毒素、細胞表面蛋白、蛋白酶、脂肪酶、細菌素和血紅素結合蛋白[38]。Ⅱ型分泌系統(Type II secretion system,T2SS)由12～16個蛋白構成,存在于細菌細胞膜、細胞質和細胞周質中,為兩步分泌,首先內膜上的Sec和Tat系統將蛋白轉運至細胞周質,之后再由T2SS外膜蛋白將其轉運至胞外[39]。G-的IV型分泌系統中菌毛裝配蛋白是T2SS中相應蛋白變體,有些時候兩種分泌系統共用部分蛋白[40]。Ⅲ型分泌系統(Type Ⅲ secretion system,T3SS)屬于一步分泌,由超過20個蛋白組裝而成,大多坐落在內膜上,形成注射器狀結構,可以將分泌蛋白從供體胞質直接注入到受體胞質,其中10個蛋白質基因同G+和G-中鞭毛編碼基因同源[41]。Ⅳ型分泌系統(Type Ⅳ secretion system,T4SS)最初來源于F質粒的發現,是多基因編碼實現單一功能的系統,與細菌接合機制有關,介導基因水平轉移[42],主要用于轉移DNA、DNA-蛋白復合體和一些效應蛋白[43]。根瘤農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)的VirB/D4 系統是典型的T4SS,大部分革蘭氏陰性菌中發現的T4SS與VirB/D4 T4SS相似,由12個蛋白質組成,包括VirB1-VirB11和VirD4,可以形成一條包括胞外菌毛、胞質ATP酶、核心復合物、轉運通道等結構的橫跨整個細菌內外膜的通道[44]。V型分泌系統(Type V secretion system,T5SS)是最為簡單的分泌系統,也稱為自轉運系統,為兩步分泌。首先經由Sec系統跨內膜轉運至細胞周質,之后再由分泌蛋白自身的C末端在外膜上形成β-筒狀通道轉移至胞外[45]。Ⅵ型分泌系統(Type Ⅵ secretion system,T6SS)最初在霍亂弧菌(Vibriocholerae)和銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)中被發現,其基因簇由12～25個基因構成,大部分微生物染色體中存在1～2個拷貝,在菌株致病性傳播上扮演重要角色[46-47]。Ⅶ型分泌系統(Type Ⅶ secretion system,T7SS)于2009年在結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)和牛結核分枝桿菌(Mycobacteriumbovis)中被鑒定,共發現5種類型(ESX1-ESX5),與基因組島相關[48-49]。Ⅲ型分泌系統(Type Ⅲ secretion system,T3SS)和Ⅵ型分泌系統(Type Ⅵ secretion system,T6SS)在V.parahaemolyticus的毒力中起到重要作用。

2.1 Ⅲ型分泌系統

T3SS最早在致病性耶爾森氏菌(Yersiniaspp.)中發現,屬于一步分泌,由超過20個蛋白組裝而成,大多坐落在內膜上,形成注射器狀結構,可以將分泌蛋白從供體胞質直接注入到受體胞質,其中10個蛋白質基因同革蘭氏陽性和陰性菌中鞭毛編碼基因同源[50-51]。Tagomori[52]于2002年完成了第一株V.parahaemolyticusRIMD2210633的全基因組測序,并且發現該菌含有兩套III型分泌系統(T3SS)。測序結果顯示出V.parahaemolyticus,霍亂弧菌和其他弧菌在遺傳學上可能擁有共同的祖先[53]。V.parahaemolyticus中的T3SS分為兩套:一套位于染色體1上,稱為(T3SS1),存在于幾乎所有已測序的環境或臨床分離的V.parahaemolyticus中,基因序列與耶爾森氏菌(Yersiniavanloghem)的T3SS相似[52,54-55]。另一套位于染色體2的毒力島上,稱為T3SS2,只存在于神奈川現象陽性或含有編碼耐熱直接溶血素相關溶血素(TRH)基因trh的副溶血弧菌中,貢獻V.parahaemolyticus的致病力[54-55]。侵染過程中,T3SS向宿主分泌多種毒力因子(圖2),T3SS1可引發促炎性反應、裂解細胞,具有細胞毒性,T3SS2具有腸毒性[56]。研究發現,T3SS1缺失了編碼內膜蛋白的vcrD1,編碼外膜蛋白的vscC1或編碼細胞周質蛋白的vscN1任一基因后,菌株對HeLa細胞的毒性明顯降低,缺失基因互補表達后,細胞毒性恢復到原始菌株水平,但T3SS2結構蛋白編碼基因缺失后,細胞毒性幾乎不發生改變[57-58]。

圖2 V. parahaemolyticus Ⅲ型分泌系統介導的效應蛋白Fig.2 Type Ⅲ secreted effectors of V. parahaemolyticus

2.1.1 T3SS1結構 T3SS1系統可轉運的4種分泌蛋白(VopQ、VopR、VopS和VPA0450)。其中,VopQ由vp1680基因編碼,可誘導PI3激酶不依賴的HeLa細胞自噬,阻止小鼠巨噬細胞(RAW264.7)對副溶血弧菌的胞吞,并且作為MAPK信號途徑的激活蛋白,間接影響IL-8的分泌,是介導細胞毒性的主要毒力因子[59-61]。VopR位于細胞質膜促進細胞圓形化,并不直接導致細胞毒性,目前的作用機理還不明確[62-63]。VopS通過抑制NF-kB的活性介導Toll-樣受體依賴型巨噬細胞凋亡,還能在侵染引發吞噬的早期階段,抑制宿主細胞肌動蛋白的集聚和巨噬細胞肌動蛋白的快速重排,利于病原菌抵抗巨噬細胞的吞噬,引致細胞骨架破壞,細胞變圓后裂解[64-65]。最近的研究發現,VopQ 和VopS還會抑制炎性小體活性,有利于保護菌體免受宿主炎癥反應誘發的機體對致炎因子的清除[66-67]。VPA0450是一種5′-磷脂酰肌醇磷酸酶,通過水解胞質膜上的二磷酸酯,破壞細胞支架結合位點使質膜出泡,破壞細胞膜的完整性,引起細胞裂解[68]。此外,T3SS1還介導其他的毒力相關蛋白的分泌,例如,VopD編碼基因缺失突變株對兔紅細胞的溶血性及細胞毒性均下降[60],Vp1659影響肌動蛋白重排同時會誘導細胞發生自噬[69]。

2.1.2 T3SS2功能 T3SS2系統轉運分泌蛋白,除VopA、VopC、VopL和VopT之外(圖1-2),還包括VopV、VopO和VopZ。VopA是一種乙酰轉移酶,可以抑制絲裂原活化蛋白激酶的信號傳遞途徑,抑制細胞分裂,引發生長停滯[70]。VopC是一種脫酰胺酶,可促進被感染細胞內形成肌動蛋白應力纖維,與致病性大腸桿菌的細胞毒性因子(CNF1)高度同源(38%)[71]。VopL也可促進被感染細胞內形成肌動蛋白應力纖維,拉長細胞的肌動蛋白[72]。VopT是一種核糖轉移酶,可將ADP-核糖體轉移到GTP酶的單體蛋白Ras上抑制其活性,對V.parahaemolyticus的侵染起了重要的作用并且貢獻了V.parahaemolyticus對Caco-2的細胞毒性[73]。VopV作為纖維狀肌動蛋白結合效應器,在含有T3SS2的V.parahaemolyticus中貢獻腸毒性[74]。VopO作為T3SS2關鍵的效應蛋白,可激活RhoA-ROCK途徑,促進T3SS2依賴型應力纖維的形成,同時參與到對上皮細胞的破壞[75]。VopZ通過抑制一種炎癥反應相關酶TAK1引發腹瀉及腸道疾病[76]。另外,V.parahaemolyticus中新發現的一種T3SS2效應蛋白VPA1380是一種需要肌醇己糖磷酸(IP6)誘導的半胱氨酸蛋白酶,在酵母中表達,對菌株產生毒性[77]。

2.2 Ⅵ型分泌系統

T6SS最初在霍亂弧菌(Vibriocholerae)和銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)中被發現,其基因簇由12～25個基因構成,大部分細菌染色體中存在1～2個拷貝,為倒置的T4噬菌體結構,在細菌致病性傳播上扮演重要角色,介導細菌對宿主細胞的黏附作用[78-79]。T6SS在37 ℃條件下無活性,其對宿主的影響主要不是通過分泌蛋白來完成,可能還依靠于其他的毒力因子[80]。與T3SS相似,根據所處位置不同,T6SS分為T6SS1和T6SS2。T6SS1只存在臨床分離的V.parahaemolyticus中,而T6SS2在環境與臨床分離株中均存在[80-81]。T6SS1在溫暖的海洋環境中(3% NaCl,30 ℃)較為活躍,可通過三種效應蛋白(VP1415,VP1388和VPA1263)抵抗環境中其他細菌分泌的有害物質并選擇性的抑制其他細菌的生長,增強其的環境適應性[82-83]。T6SS2在低鹽低溫環境中(1% NaCl,23 ℃)較為活躍。研究發現,T6SS1的結構基因(icmF1)和效應蛋白(hcp1)的缺失,會降低該菌對HeLa和Caco-2細胞的黏附能力,而T6SS2相關基因缺失僅影響細菌對HeLa細胞的黏附能力[84]。

2.2.1 T6SS結構 不同細菌中T6SS結構蛋白相對比較保守,構成了分泌系統的核心組件。這些蛋白包括IcmF-和IcmH-樣蛋白、脂蛋白、ClpV以及轉位蛋白Hcp和VgrG[11]。位于細菌細胞膜中的T6SS的核心組件DotU和IcmF,對分泌系統的穩定至關重要[85]。目前,研究T6SS中最為關注的一個結構蛋白是IcmF,它參與Hcp導管的形成與跨膜,缺失了IcmF編碼基因的細菌無法在上清中檢測到Hcp蛋白[46,86-87]。

轉位蛋白包括Hcp和VgrG,Hcp和VgrG分別類似噬菌體尾巴和尾穗蛋白,它們共同構成T6SS裝置整個細胞外部分,形成分泌蛋白的管道,幫助分泌蛋白跨膜轉運,最終到達宿主表面[88]。Hcp是一個內徑為40 nm的六環形,當T6SS處于活化狀態時,Hcp在細胞周質中疊成長導管,嵌合于VgrG下面,能夠穿過細菌外膜;VgrG類似T4噬菌體穿刺細胞膜的針尖狀結構,能夠穿刺細菌細胞膜并將DNA注入到細菌的細胞質中[89]。一旦與宿主細胞接觸,VgrG針尖狀結構會穿透脂蛋白雙分子層,將原本隱藏的效應區域暴露于宿主細胞質中,使之與宿主細胞靶分子相互作用,繼而影響宿主細胞功能。當VgrG針尖狀結構從T6SS脫離后,會形成沒有加蓋的Hcp管道,效應蛋白會通過此管道進入宿主細胞,這也闡明了T6SS和噬菌體尾部刺突在結構和進化上的關系[89]。

2.2.2 T6SS功能 目前研究T6SS的熱點問題集中在其對巨噬細胞的細胞毒性上。研究發現霍亂弧菌V52感染巨噬細胞J774后,細胞形態發生明顯變化,構建icmF樣基因vasK突變株感染巨噬細胞后發現,細胞形態無明顯變化,由此推測出T6SS介導霍亂弧菌對巨噬細胞的毒性[46]。對嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)的T6SS研究發現,其對HeLa細胞也具有細胞毒性?；魜y弧菌T6SS的主要結構蛋白IcmF在體外被證實能夠促進細菌對腸上皮細胞的枯附能力[89]。缺失icmF的雞致病性大腸桿菌能夠降低對上皮細胞的粘附能力。由此推測T6SS介導細菌對細胞的粘附能力?；魜y弧菌的轉位蛋白VgrG1的C端含有肌動蛋白交聯相關結構域(ACD domain),在體外試驗中,VgrG1能與可以共價性的結合肌動蛋白,擾亂宿主細胞的肌動蛋白骨架[88]。

Parsons等[90]研究發現T6SS在鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)中能夠限制細菌在巨噬細胞中的復制能力,降低毒力,從而使細菌在巨噬細胞中長期存活。Chow等[91]發現缺失了T6SS的關鍵蛋白后,幽門螺旋菌(Helicobacterpylori)對小昆腸道上皮細胞(IEC)的粘附和定殖能力升高,感染的免疫缺陷小鼠的炎癥反應加劇,T6SS降低了肝幽門螺旋菌在宿主內的生長能力和毒力。Weber等[92]發現缺失了T6SS結構基因和轉位基因的鰻弧菌(Vibrioanguillarum)在高氧化性,高酒精度以及低pH的條件下,其存活率要明顯低于親本細菌。由此可以得出T6SS具有致病力的同時也可以限制細菌的復制和致病力,并且有利于鰻弧菌適應外界環境。

3 鞭毛、生物被膜與群體感應

V.parahaemolyticus具有兩種類型的鞭毛,一種為單端生鞭毛,由6種鞭毛蛋白組成,決定其游動能力,在pH8的高鹽環境中,具有單端生鞭毛的菌株運動速度可達60 μm/s[58]。另一種為周生鞭毛,當V.parahaemolyticus生存于過于黏稠或離子缺乏的環境條件下,菌株游動性被抑制,此時會產生許多無鞘的周生鞭毛,引起菌株集聚,而細菌的群體感應通過自身誘導物質(Auto-inducer,AI)的信號分子,感知環境中細菌菌群的數量,繼而啟動菌體中相關基因的表達,產生毒素、形成生物膜來適應環境的變化[93]。鞭毛系統、生物被膜、群體感應與細胞黏附相互關聯,同黏附因子相似,可為細菌與宿主細胞的接觸提供平臺,在細菌侵染的初始階段起關鍵作用并同時參與到菌株對抗生素的耐受性,引發較為嚴重的臨床問題[94]。

4 總結

V.parahaemolyticus是一種重要的食源性致病菌,廣泛存在與海洋環境中。近年來,隨著對V.parahaemolyticus分泌蛋白研究的不斷深入,已能從致病性和耐藥性傳播方面更好的闡述其作用機制。但未來仍有很多問題需要解決,例如:宿主細胞內不同的分泌蛋白是如何發揮功能的,分泌途徑是如何識別底物的,各分泌系間是否存在相互作用。另外,相對于其他分泌系統,T6SS的探索還處在初級階段,對于上述問題的探索和理解在細菌致病機理及制定相應防控措施上具有重要意義。