不同濃度戊二醛對種蛋表面消毒效果的影響

張 浩 張柱琦 關文怡 曹金元 周珍輝

北京農業職業學院，北京102442

福爾馬林熏蒸消毒是孵化廳消毒種蛋最常用的方法，福爾馬林熏蒸法可以殺死蛋殼表面絕大多數病原體[1]，消毒效果好，但福爾馬林熏蒸消毒存在諸多問題，對人呼吸道及眼的刺激性大，對孵化廳的工人造成傷害。據孫成浩等[2]報道，種蛋入孵前用28 mL/m3福爾馬林電磁爐加熱0.5 h，種蛋平均消毒合格率僅為80%左右，另外還存在冬季液體福爾馬林受凍凝固、熏蒸后殘渣不易處理、成本較高等問題。戊二醛是近年來常用于種蛋消毒的一種消毒劑[3]，它刺激性小，在國內許多孵化廳替代福爾馬林熏蒸消毒，為確定戊二醛的消毒效果，并篩選合適的消毒濃度，本試驗選用1%、2%和5% 3 種濃度的戊二醛進行種蛋的消毒效果對比試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1）試劑。戊二醛溶液：規格20%（g/g），產品批準文號：獸藥字(2014)162821278；培養基：營養瓊脂培養基（批號20190305），購于北京天壇生物制品股份有限公司，其制備按廠家提供的說明方法進行。

2）試驗儀器。生物安全柜（BSC-1360IIA2，北京東聯哈爾濱制造有限公司）、恒溫鼓風干燥箱（2XFD-B5140，上海智聯分析儀器制造有限公司）、電熱恒溫培養箱（2XDP-2160，上海智聯分析儀器制造有限公司）、立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器（LXB35L，合肥華泰醫療設備有限公司）、一次性使用培養皿（90 mm，泰州市順飛醫療器械有限公司）等。

3）被測種蛋。來自北京農效禽業有限公司父母代種雞場280日齡羅曼褐種雞。

1.2 方法

1）雞蛋分組編號。從孵化廳取大小基本一致的200 枚雞蛋，從中隨機選取40 枚，隨機分成4 組，1%、2%、5%濃度組和對照組，每組10 枚，4 個組的雞蛋分別放置于消毒的塑料袋內密封，常溫保存。

2）消毒液配制。將20%濃戊二醛溶液分別配制成濃度為1%、2%和5%的3 種溶液。

3）制作規板。規板用適當硬度的鐵絲圈制成，具有2 個圓環的夾子，圓環直徑3.5 cm。

4）培養基制備。按照營養瓊脂的配比制備平板培養基。

5）物品滅菌。準備40 個潔凈試管、包扎好的棉簽，121 ℃高壓滅菌30 min，滅菌的物品放置在紫外消毒后的生物安全柜。

6）雞蛋浸泡消毒。試驗組的雞蛋分別用1%、2%和5%戊二醛浸泡消毒1 min，使雞蛋完全浸濕，取出后放置于超凈工作臺中自然干燥，然后放入消毒的塑料袋內密封。

7）取樣。將被測種蛋夾在特制的規板內，在裝有滅菌生理鹽水的試管中浸濕滅菌棉簽，在試管壁上擠去多余的鹽水，然后在規板范圍內的雞蛋表面來回滾動擦拭20 次，剪下棉簽頭，浸入裝有9 mL滅菌生理鹽水的試管中，每個雞蛋做3 次重復，分別涂擦不同的區域。

8）細菌培養。用滅菌的吸管吸取1 mL 細菌液，注入滅菌的空平皿內，然后傾注熔化并冷卻到45～50 ℃的普通瓊脂，充分混合。

9）菌落記數。待普通瓊脂凝固后，置37 ℃恒溫箱中培養24 h，計數平板上的菌落數，平板菌落記數時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。

10）數據的統計與分析。試驗數據用Excel 軟件進行處理，并進行差異顯著性檢驗。

11）計算殺菌率。根據每個雞蛋3 次平行試驗菌落數，計算平行樣菌落平均數，再計算10 個雞蛋的平均菌落數，求出殺菌率。殺菌率=（消毒前菌落數－消毒后菌落數）÷消毒前菌落數×100%。

2 結果與分析

由表1 可知，1%、2%和5% 3 種濃度的戊二醛消毒液浸泡消毒雞蛋的殺菌率分別為86.70%、95.61%和96.95%，其中1%戊二醛與2%戊二醛和5%戊二醛以及對照組消毒效果差異顯著（P＜0.01），而2%戊二醛組和5%戊二醛組差異不顯著（P＞0.05）。從經濟成本考慮，得出結論：消毒種蛋最合適的戊二醛濃度是2%。

表1 3 種不同濃度戊二醛對雞蛋表面消毒效果的比較

3 討論

本試驗選用的戊二醛推薦使用濃度是2%或5%，從試驗結果看，1%戊二醛殺菌率只有86.70%，不能滿足種蛋消毒95%以上殺菌率要求[4]，而2%戊二醛和5%戊二醛殺菌率分別為95.61%、96.95%，達到了要求，可以做為種蛋消毒藥。2%戊二醛和5%戊二醛殺菌率差異不顯著（P＞0.05），說明戊二醛濃度達到2%以后，隨濃度的增加，殺菌率并沒有明顯增加，所以戊二醛消毒種蛋最合適的濃度為2%。本次試驗只做了種蛋表面殺菌效果試驗，沒有涉及對種蛋孵化率、出雛率及對雛雞的影響等試驗，有一定的局限性[5]。