金川區奶牛結核病檢測技術試驗

張惠芳，秦 江 ，趙長紅，趙艷紅，李曉霞

（甘肅省金昌市金川區動物疫病預防控制中心，甘肅 金昌 737100）

牛結核病是由牛結核分枝桿菌引起的一種人畜共患慢性傳染病，奶牛最易感，人也可被感染。結核病病牛是本病的主要傳染源，臨床通常呈慢性經過，以長期頑固性干咳為特征，消瘦，持續下痢與便秘交替出現，糞便常帶血或膿汁。結核病的廣泛傳播與蔓延，對人畜健康和畜牧業的發展帶來了嚴重危害。目前，金川區對奶牛結核病的檢測主要采用牛型分枝桿菌提純蛋白衍生物（PPD）進行單純頸部皮內變態反應試驗（SICT），對檢出的陽性牛進行隔離或淘汰。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗血清 采集轄區3家奶牛場血清樣品450 份，冷藏保存。

1.1.2 試劑 提純牛型結核菌素：哈藥集團生物疫苗有限公司（生產批號：201802），規格：50頭份/瓶；牛分枝桿菌抗體檢測試劑盒：廣州悅洋生物技術有限公司（生產批號EB0319501）。

1.1.3 儀器設備 單道移液器（生產廠家：艾本德，規格：10～100 ul）、多道移液器（生產廠家：大龍，規格：10～100 ul）、滴頭（10～100 ul）、電子倒計時器、加樣槽、蒸餾水、酶標儀（生產廠家：帝肯/F50，HydroFLEX，波長：630 nm）、恒溫培養箱(生產廠家：上海博訊實業有限公司，型號：HP-9162ME)。

1.2 試驗方法

選擇轄區3家奶牛場不同年齡段、不同圈舍的泌乳牛共450頭，分別進行單純頸部皮內變態反應試驗（SICT）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。皮內變態反應試驗按照動物結核病診斷技術（GB/T 18645-2002）進行，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）按照試劑盒說明書進行。

1.3 測定指標

結核病陽性數、陽性率以及兩種方法的符合率，具體判定方法詳見表1、表2。

表1 頸部皮內變態反應試驗（SICT）檢測判定指標

表2 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測判定指標

S/P=（樣品OD-陰性對照OD平均值）/(陽性對照OD平均值-陰性對照OD平均值)

按照ELISA檢測試劑盒要求分別設置了陰性對照孔、陽性對照孔，對照孔OD值符合試驗要求，證明該試驗是有效的。對兩種方法檢測出的牛進行分類，設置陰性、可疑、陽性3個組，每組計算百分率，分析試驗結果，為生產實際應用提供建議。

2 試驗結果

2.1 結核病陽性率檢測結果

對奶牛場1、奶牛場2和奶牛場3的各150頭奶牛進行SICT檢測，檢測出陽性數分別為0頭、5頭、45頭；按照ELISA對該批牛血清進行檢測，檢測出陽性數分別為0頭、1頭、5頭，檢測結果詳見表3。

表3 兩種方法檢出結核病的陽性結果比較

2.2 兩種方法符合率情況

將ELISA檢測出的陽性牛同SICT檢測出的陽性牛比較，發現ELISA檢測出的陽性牛全部包括在SICT檢測出的牛群中，比對結果詳見表4。

表4 兩種方法檢測出結核病陽性牛符合率情況

3 結果與討論

3.1 結果分析

通過上述試驗，表明SICT和ELISA兩種方法檢出結核陽性率差異非常大，通過查閱國內外結核病檢測資料，分析原因主要有以下幾點：一是SICT主要檢測細胞免疫，ELISA是檢測體液免疫，因此從理論上講，SICT與ELISA檢測結果不一定吻合。二是不同廠家生產的結核菌素產品本身存在質量差異，而國標中并未明確具體的生產廠家，導致檢測結果出現差異。三是SICT檢測方法存在較高的非特異性，從感染早期至感染中后期均可檢測。準確性受人員操作規范，其他疾病的交叉反應（副結核、禽結核）及環境因素等影響。

3.2 討論

3.2.1 檢測方法優缺點比較 由于目前西北地區奶牛結核病檢測方法相對滯后，主要檢測方法有以下3種。一是γ-干擾素檢測法，是目前已知方法中準確率最高的一種結核檢測方法，但該種方法的缺點是對獸醫實驗室級別要求高，檢測成本高（γ-干擾素：平均80～100元/頭份），時效性要求高。二是皮內變態反應試驗，是目前實踐中檢測牛結核病的最常用方法。該方法操作簡單、檢測費用便宜，深受廣大奶牛養殖場青睞，但存在工作量大、檢測時間長、準確率低等缺點。三是ELISA檢測法，該方法具有方便、快速、高通量、特異性強等特點，可以有效補充SICT的缺點和不足。但是與SICT比較，ELISA檢測尚未列入結核病國家檢測標準，存在檢測費用（平均 15～45元/頭份）較高，試劑盒有限期短（3～6月）等缺點。針對上述情況，考慮到經濟成本、獸醫實驗室建設及人員操作等誤差率的影響因素。針對河西地區奶牛養殖現狀，加以創新，最終探索出“SICT+Elisa” 的奶牛結核病檢測凈化方案。

3.2.2 實踐指導意義 由于結核病的病程較長，前期較難檢出，即便是檢出后，大多數陽性動物不會因此直接影響生產性能，從而不會被淘汰。綜上所述，對于結核病發病率低的牧場（如奶牛場1），建議在制定檢淘策略時，關注檢測的特異性，從結核病凈化和牛場成本方面考慮，選擇酶聯免疫吸附試驗（ELISA）進行結核病抽檢。通過逐年的檢淘，逐步將陽性比率控制到一個理想狀態，甚至是凈化。對于結核陽性牛較多（如奶牛場3），應該關注檢測的敏感性，建議對全群奶牛進行“SICT+Elisa”結合檢測，任意一種檢測出陽性，即確認為陽性牛進行淘汰，達到有效凈化與控制奶牛結核病的目的。奶牛場2應結合群體往年檢測結果，針對性地選擇合適的檢測方法，達到控制甚至凈化結核病的目標。