氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析皂角刺揮發(fā)油成分

黃小安， 藍(lán)云英， 李莎莎， 彭桂原

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東廣州 510405；2.廣東省中醫(yī)院，廣東廣州 510120；3.廣東省職業(yè)病防治院，廣東廣州 510300）

皂角刺（Chinese Honeylocust Spine）為豆科植物皂莢（Gleditsia sinensis）的干燥棘刺，味辛，性溫，歸肝、胃經(jīng)，功能為活血消腫、排膿通乳、搜風(fēng)拔毒[1]。《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）收錄大皂角和皂角刺為皂莢藥用部位。現(xiàn)代研究表明，皂角刺主要含黃酮、酚類和三萜等化合物，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗癌等作用[2-8]。關(guān)于皂角刺中揮發(fā)性成分目前未見系統(tǒng)報道。為發(fā)掘藥用資源，合理使用及開發(fā)皂角刺，對皂角刺的揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行全面的分析十分必要。因此，本研究對皂角刺揮發(fā)油進(jìn)行成分鑒定和相對含量測定，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 儀器與試劑Agilent 7890氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）儀（美國Agilent 科技有限公司）；乙醚、正己烷、乙酸乙酯、無水硫酸鈉等均為分析純（北京化學(xué)試劑公司）。

1.2 藥材皂角刺藥材購自廣東省中醫(yī)院藥房（由康美藥業(yè)股份有限公司提供，批號:170510261），樣品標(biāo)本保存于廣東省中醫(yī)院科學(xué)院實驗室。

2 方法

2.1 供試品溶液的制備根據(jù)《中國藥典》2015年版四部2204揮發(fā)油測定甲法，準(zhǔn)確稱取400 g皂角刺于5 L 圓底燒瓶中，加入3 L 蒸餾水，先浸泡1 h，揮發(fā)油測定器加入3 mL 乙酸乙酯，加熱沸騰6 ～8 h，至特殊氣味黃色油狀液體不再增加，停止加熱。冷卻后，將乙酸乙酯層轉(zhuǎn)入含1 g 無水硫酸鈉的玻璃瓶中，靜置2 h，取上清液約1 mL 置于進(jìn)樣瓶。

2.2 GC-MS技術(shù)分析條件色譜條件:色譜柱為HP-5MS 毛細(xì)石英柱（30 m ×250 μm ×0.25 μm）；自動進(jìn)樣器，不分流，進(jìn)樣量3 μL，氣體流速為1.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度250 ℃；輔助加熱器溫度280 ℃；程序升溫:初始溫度為50 ℃，保持3 min，以3 ℃·min-1的速度升至140 ℃，保持2 min，再以10 ℃·min-1的速度升到260 ℃。質(zhì)譜條件:離子源EI；電離能70 eV；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；質(zhì)量掃描范圍30 ～550 amu；溶劑延遲3 min。

2.3 皂角刺揮發(fā)油成分分析將“2.1”項下制備的供試品溶液按照“2.2”項下分析條件，得到總離子流圖（見圖1）。采用NIST2014 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索并進(jìn)行比對。應(yīng)用峰面積歸一化法計算皂角刺揮發(fā)油中各化學(xué)成分的相對百分含量。

3 結(jié)果

在皂角刺揮發(fā)油中，共鑒定出65 個成分（見圖1、表1），占揮發(fā)油總面積的64.85%。其中含量較高的10 種成分占揮發(fā)油總含量的41.34%，分別 為 棕 櫚 酸（palmitic acid）15.14% 、 亞 油 酸（linoleic acid）6.96%、芳樟醇（linalool）4.82%、正己醛（caproaldehyde）4.65%、2-正戊基呋喃（2-pentylfuran）2.98%、正十四烷（N-tetracosane）2.31%、糠醛（furfural）2.28%、反油酸（elaidic acid）1.69%、植酮（fitone）1.68%、苯乙醛（phenylacetaldehyde）1.54%等。

圖1 皂角刺GC-MS總離子流圖Figure 1 Total ion chromatogram of GC-MS in Spina Gleditsiae

表1 皂角刺揮發(fā)油化學(xué)成分及其相對含量Table 1 The chemical components in volatile oil from Spina Gleditsiae and their relative contents

（續(xù)表1）

研究結(jié)果表明，皂角刺揮發(fā)油中主要為羧酸類、醛類和醇類成分，其中羧酸類占15.14%、醛類占15.89%、醇類占15.81%，此外脂類占7.32%、烯類占1.17%。

4 討論

本研究預(yù)實驗分別采用水蒸氣蒸餾、超聲、微波等方法制備皂角刺揮發(fā)油，并對其進(jìn)行GCMS 分析，發(fā)現(xiàn)水蒸氣蒸餾法出油量最多、總離子流圖峰數(shù)豐富。本次研究采取水蒸氣蒸餾法制備的皂角刺揮發(fā)油約1 mL，含量較少，表明皂角刺的揮發(fā)性成分偏少，且提取困難。本研究在預(yù)實驗中還對不同萃取劑進(jìn)行考察，分別利用乙酸乙酯、正己烷和乙醚三種萃取溶劑制備皂角刺揮發(fā)油，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯萃取的皂角刺揮發(fā)油總離子流圖峰數(shù)最豐富，且乙酸乙酯與正己烷、乙醚比較，更加穩(wěn)定，不易揮發(fā)。因此，本研究采用水蒸氣蒸餾法，以乙酸乙酯作為萃取溶劑，提取皂角刺中的揮發(fā)油，以期對皂角刺的揮發(fā)性成分進(jìn)行全面表征。

本研究結(jié)果顯示，總離子流圖45 min 以后的分離度較差，在條件優(yōu)化時已通過調(diào)整升溫速度及升溫時間進(jìn)行針對性的優(yōu)化，但結(jié)果改善不明顯。因此，我們認(rèn)為改善皂角刺揮發(fā)油的提取方法后可再次優(yōu)化總離子流圖的分離度。

本研究采用GC-MS 分析了皂角刺的揮發(fā)性成分，并通過譜庫檢索相結(jié)合的手段對檢出化合物進(jìn)行鑒定。方法操作簡單，結(jié)果可靠，且為皂角刺的定性鑒定提供了重要依據(jù)，下一步將要擴(kuò)大樣本，對皂角刺的質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分進(jìn)行研究，建立皂角刺的指紋圖譜。