水飛薊提取物長期服用安全性研究

李旭東 張平 王文忠

【摘要】 目的：連續灌胃SD大鼠90天水飛薊提取物， 研究水飛薊提取物對SD大鼠的長期毒性情況，以了解水飛薊提取物長期服用的安全性。方法：選用雌雄各半的SD 大鼠，隨機分為對照組和水飛薊提取物低、中、高（0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg ）三個劑量組，連續灌胃 90 d，以 SD 大鼠的體重、攝食量、食物利用率、血液生化指數及臟器系數檢查等作為檢查指標，全面評價連續灌服水飛薊提取物對大鼠的毒性作用。結果：受試動物一般情況良好，試驗結束時雌雄大鼠體重、總增重、總攝食量及總食物利用率與對照組比較均無顯著性差異（P>0.05）;臟器重量、臟器系數均無異常改變;眼部檢查未發現異常變化;尿液指標、血液學指標及生化指標結果顯示，各項指標均在正常范圍;各臟器病理組織學檢查均未見與受試樣品有關的病理改變（P>0.05）。結論：水飛薊提取物連續灌服90天對 SD 大鼠無不良影響，提示其長期服用具有安全性。

關鍵詞：水飛薊提取物;大鼠;長期毒性

水飛薊（silybum marianum L.Gaertn）是歐洲民間的一種草藥，用于治療肝膽疾病。我國直到20世紀60年代末以H.Wagner 為代表的德國藥學家，對其有效成分進行提取后， 我國才將它作為一種保肝藥用植物推廣種植。水飛薊主要有效物質為水飛薊素，研究指出水飛薊素主要成分有水飛薊賓 （silybin）、異水飛薊賓（isosilybin）、水飛薊亭（silychristin）等[1-2]。 其中，以水飛薊賓含量最高，活性也最強，它具有一定保肝作用[3-5]。水飛薊素在臨床應用以來，因其高效、低毒和良好的耐受性，已被廣泛應用。但國內有關水飛薊長期服用安全性的報道較少，因此本試驗通過動物實驗，連續灌胃SD大鼠90天水飛薊提取物，觀察水飛薊提取物連續灌胃對大鼠的長期毒性，評價水飛薊提取物長期服用的安全性。

1材料與方法

1.1試驗藥物

水飛薊提取物，為實驗室自提，水飛薊經研磨輾壓、提取（90%乙醇提取3次）、過濾、濃縮、萃取、干燥等主要工藝加工制成的黃色粉末，人體推薦劑量為0.2g/d。

1.2實驗動物

清潔級SD大鼠80只，體重在60g～80g，平均分為4組，每組動物20只，雌雄各半。組內動物個體體重相差不超過平均體重的10%， 組間平均體重相差不超過5%。

1.3 劑量選擇及分組

試驗設3個劑量組和一個對照組，劑量組按照人體推薦服用量的25、50、100設計，分別為0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg ，用蒸餾水配置成一定濃度的受試物液，對照組給予等體積的蒸餾水，每日灌胃一次（ 1.0 ml/100 g·bw） 。

1.4 方法及時間

采用經口染毒，每日灌胃一次，連續90d。每天觀察并記錄動物的一般表現、行為、中毒表現和死亡情況。每周稱1次體重和2次食物攝入量。 計算動物增重、攝食量、食物利用率等，在試驗前和試驗結束時，至少對高劑量組和對照組大鼠進行眼部檢查。若發現高劑量組動物有眼部變化，則應對所有動物進行檢查。 測定血常規、生化等血液學指標。大鼠在試驗結束時進行尿液常規檢查，實驗結束將動物處死并進行大體解剖，肉眼觀察有無異常，稱量并計算臟體比值，進行主要組織病理學檢查。

1.5 數據處理 ?采用SPSS11.0統計軟件對數據分別進行One-way ANOVA分析及Dunnett檢驗，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1 一般情況觀察 ?各組動物生長發育、活動均正常，大鼠毛發光潤，攝食、飲水、糞便均正常。無中毒表現和死亡。

2.2 對大鼠體重、增重及食物利用率的影響 ?以0.083 g/kg、0.167g/kg 和 0.333g/kg 三個劑量的水飛薊提取物經灌胃給予大鼠，連續90天。與陰性對照組相比，各劑量組動物每周體重、體重增加量、進食量和食物利用率均無統計學差異（P>0.05）。90天喂養結束時，與陰性對照組相比各劑量組動物總體重增加量、總進食量和總食物利用率均無統計學差異（P>0.05）。結果見表1，2。

2.3眼部檢查

在試驗前和試驗結束時，對高劑量組和對照組大鼠進行眼部檢查。未發現高劑量組和對照組動物有眼部異常變化。

2.4大鼠尿常規指標

經口給予大鼠不同劑量的水飛薊提取物90天，測定大鼠尿常規指標。結果各劑量組尿常規指標與陰性對照組相比，均無統計學差異（P>0.05）。

2.5 大鼠血液學指標

經口給予大鼠不同劑量的水飛薊提取物90天，測定各劑量組大鼠血液紅細胞計數、血紅蛋白水平、白細胞計數及其分類等指標、紅細胞壓積、血小板計數等指標。結果各劑量組的各指標與陰性對照組相比，均無統計學差異（P>0.05），結果見表3。

2.6 大鼠血液生化指標

經口給予大鼠不同劑量的水飛薊提取物90天，測定各劑量組大鼠血清丙氨酸氨基轉移酶、門冬氨酸氨基轉移酶、堿性磷酸酶、谷氨酰轉肽酶、尿素、肌酐、血糖、總蛋白、白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、氯、鉀、鈉的水平。結果各劑量組的各指標與陰性對照組相比，均無統計學差異（P>0.05），結果見表4。

2.7 大體病理及組織學檢查

經口給予大鼠不同劑量的水飛薊提取物90天，測定各組大鼠心臟、胸腺、腎上腺、肝臟、腎臟、脾臟、睪丸、卵巢絕對重量及相對重量（臟/體）。結果各劑量組的各指標與陰性對照組相比，均無統計學差異（P>0.05）。各劑量組雌雄大鼠大體解剖觀察均未見異常改變。大體解剖觀察未發現與受試樣品有關的組織病理學改變。

3結論

水飛薊已經被應用于保健食品原料，其保肝作用顯著，具有廣闊的市場前景。水飛薊提取物為水飛薊經一定工藝提取得到的固體粉末，有效成分為水飛薊賓，近幾年來逐漸被用作保健食品原料開發。有研究指出水飛薊提取物對孕鼠生長和胚胎發育無不良影響，無致畸作用[6]。水飛薊提取物對雌、雄昆明種小鼠的最大耐受劑量（MTD）均大于20.0g/kg·bw，屬無毒級;遺傳試驗中Ames試驗、骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗結果均為陰性[7]。

本研究針對水飛薊提取物長期食用安全性進行了研究，采用SD大鼠進行試驗。本試驗水飛薊提取物以0.083g/kg·bw/d、0.167g/kg·bw/d、0.333g/kg·bw/d的劑量給予大鼠90天，受試動物一般情況良好，試驗結束時雌雄大鼠體重、總增重、總攝食量及總食物利用率與對照組比較均無顯著性差異（P>0.05）;臟器重量、臟器系數均無異常改變;眼部檢查未發現異常變化;尿液指標、血液學指標及生化指標結果顯示，各項指標均在正常范圍;各臟器病理組織學檢查均未見與受試樣品有關的病理改變。表明水飛薊提取物連續灌服90天對 SD 大鼠無不良影響。為水飛薊提取物應用于保健食品原料安全性提供了依據。

參考文獻

[1] 柯銘清.中草藥有效成分理化與藥理特性[M].長沙：湖南科學技術出版社，1982：266.

[2] 閆玉峰，于建東.水飛薊化學成分及藥理研究進展[J].中國藥事，2000，14（5）： 335～337.

[3] 高華武，陳明，龍子江，等.水飛薊賓對高脂誘導非酒精性脂肪肝大鼠的調脂保肝作用[J].藥物評價研究，2017，40（06）：773-777.

[4] 郅敏，姚嘉茵，魯義，等.水飛薊賓治療非酒精性脂肪性肝病的實驗研究[J].新醫學，2010，41（10）：647-652+701.

[5]李巍，董曉彤，傅華，等.水飛薊賓膠囊對行肝切除術后患者肝臟保護作用的臨床評價[J].中國醫院藥學雜志，2017，37（10）：980-983.

[6] 李褔安，范雪麗，范文今.水飛薊提取物對孕鼠生長和胚胎致畸影響的研究.中國衛生檢驗雜志，2015，25 （19）：3256-3258.

[7]黃凰，張瑩瑩，胡余明，等.水飛薊提取物的急性毒性、遺傳毒性和亞慢性毒性研究.實用預防醫學，2016，23（1）：103-105，114.