橄欖油抗氧化性能及抗氧化活性物質(zhì)的研究

2020-06-07 02:23:58向方桃李書(shū)華陳封政

樂(lè)山師范學(xué)院學(xué)報(bào) 2020年4期

向方桃，李書(shū)華，陳封政,c※

(樂(lè)山師范學(xué)院 a.校醫(yī)院；b.化學(xué)學(xué)院；c.樂(lè)山特色農(nóng)產(chǎn)品藥用成分研發(fā)工程中心，四川樂(lè)山 614000)

0 引言

油橄欖鮮果經(jīng)過(guò)清洗，在室溫條件下直接壓榨出果汁，果汁經(jīng)油水分離得到橄欖油。橄欖油是地中海區(qū)域居民膳食結(jié)構(gòu)中的重要組成部分，對(duì)降低當(dāng)?shù)鼐用竦男难芗膊『桶┌Y的發(fā)病率做出了重要貢獻(xiàn)[1]。橄欖油含有70%左右的油酸，其所含有的油酸、亞油酸和亞麻酸的比例近似母乳，這種組成為其贏得了“食用植物油皇后”美譽(yù)。近年來(lái)的研究表明橄欖油還具有多種生理功能：其高含量的油酸對(duì)血液中的膽固醇具有雙向調(diào)節(jié)作用，能減輕血管粥樣硬化，降低心腦血管梗塞的風(fēng)險(xiǎn)[2]；含有多種脂溶性維生素，且油性溫和，可直接用于皮膚美容或作為護(hù)膚品的基質(zhì)油[3]；所含的類胡蘿卜素、角鯊烯等弱極性物質(zhì)是橄欖油在低溫甚至常溫下避光保存較長(zhǎng)時(shí)間不變質(zhì)的主要因素，這些物質(zhì)具有抗衰老的作用[4]。前人的研究主要集中在橄欖油的組成、功效以及活性成分的研究[5-7]，尚無(wú)直接研究橄欖油的抗氧化性能。基于此，本文研究橄欖油的抗氧性，探索橄欖油中的抗氧化物質(zhì)，并分離鑒定之，探明橄欖油的抗氧化因子。

1材料與方法

1.1 材料與儀器

材料：橄欖油由四川天源油橄欖有限公司提供；維生素C，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；DPPH(1，1-二苯基-2-三硝基苯肼)購(gòu)自北京中生瑞泰科技有限公司。

儀器：RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)，分光光度計(jì)(尤尼柯儀器有限公司)，Varian INOVA 400核磁共振譜儀。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 橄欖油的抗氧化性能測(cè)定

根據(jù)參考文獻(xiàn)[8]，采用DPPH自由基清除的方法，研究橄欖油的抗氧化性能，并以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照。考慮到橄欖油在甲醇中的溶解度不好，而在分光光度法測(cè)定過(guò)程中采用的波長(zhǎng)是517 nm，故將溶劑改成丙酮，這樣既能很好地解決橄欖油的溶解度，又因?yàn)楸臉O限波長(zhǎng)為330 nm，遠(yuǎn)小于517 nm，而不影響試驗(yàn)的測(cè)定。

1.2.2 橄欖油中抗氧化物質(zhì)的提取與分離

橄欖油的成分主要為油酸，其次為亞油酸和亞麻酸等，極性較弱，而橄欖油中的微量成分，如類胡蘿卜素、角鯊烯等弱極性的物質(zhì)已有研究，因此，本文主要關(guān)注橄欖油中極性略大的抗氧化物質(zhì)。

取1000 mL橄欖油，用1000 mL石油醚溶解，轉(zhuǎn)入分液漏斗中，然后加入1000 mL的乙腈，搖勻，靜置分層，放出下層乙腈層；再次向分液漏斗中加入1000 mL乙腈振搖，靜置分層，放出下層乙腈層。合并兩次的乙腈萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在60 ℃條件下減壓濃縮，得到橄欖油的乙腈萃取物21 g。

稱取210 g薄層層析硅膠H，用二氯甲烷濕法裝填層析柱。將橄欖油的乙腈萃取物21 g用20 mL丙酮溶解，然后滴加到裝有10 g硅膠的蒸發(fā)皿中，然后將蒸發(fā)皿置于60 ℃的水浴鍋上加熱，丙酮揮發(fā)，橄欖油的乙腈萃取物則吸附在硅膠上。將吸附了樣品的硅膠小心地裝填在硅膠柱上，然后用二氯甲烷/甲醇(40∶1)的混合液300 mL為洗脫液，逐漸階梯式增大洗脫液的極性，依次用二氯甲烷/甲醇(35∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(30∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(25∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(20∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(15∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(10∶1)300 mL、二氯甲烷/甲醇(8∶1)300 mL洗脫層析柱；洗脫液按照每30 mL收集1瓶，合計(jì)得到80瓶洗脫液。將每瓶洗脫液通過(guò)硅膠薄層板點(diǎn)板層析，層析條件為二氯甲烷/甲醇(10∶1)，顯色劑為95%的硫酸乙醇溶液，加熱顯色。合并顯色相同的組分，收集顯色為單一斑點(diǎn)的組分，濃縮，得到純品化合物18 mg。

1.2.3 橄欖油中抗氧化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定

將1.2.2中得到的純品化合物以氘代甲醇為溶劑，用Varian INOVA 400核磁共振譜儀進(jìn)行核磁測(cè)試；通過(guò)核磁共振氫譜和碳譜圖解析化合物的結(jié)構(gòu)。

1.2.4 橄欖油中抗氧化物質(zhì)的抗氧化性能測(cè)定

將1.2.2中得到的純品化合物按照1.2.1的方法，采用DPPH自由基清除法，以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，研究該純品化合物的抗氧化性能。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

在1.2.1橄欖油的抗氧化性測(cè)定試驗(yàn)及1.2.4橄欖油中抗氧化物質(zhì)的抗氧化性能測(cè)定中，均以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，以空白作為分光光度計(jì)調(diào)零，做三組重復(fù)試驗(yàn)，抗氧化性能取三組試驗(yàn)的平均值。

2 結(jié)果與討論

2.1 橄欖油對(duì)DPPH自由基的清除試驗(yàn)

以維生素C為陽(yáng)性對(duì)照，不同濃度的橄欖油對(duì)DPPH自由基清除率見(jiàn)表1。

表1 橄欖油對(duì)DPPH自由基的清除率

由于橄欖油的主要成分是油，抗氧化能力可能不強(qiáng)，故其濃度盡管設(shè)定很高，但抗氧化活性物質(zhì)含量卻不高。表1的結(jié)果印證了這種推測(cè)：橄欖油對(duì)DPPH自由基有一定的清除能力，但其抗氧化能力較弱。

2.2 橄欖油中抗氧化物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定

將得到的純品物質(zhì)以氘代甲醇為溶劑，通過(guò)核磁共振儀測(cè)試，得到該化合物的核磁共振氫譜圖(圖1)和核磁共振碳譜圖(圖2)。通過(guò)核磁共振氫譜可以看出該化合物氫原子的信號(hào)：δ6.70(1H，d，J=8Hz，H-5)，δ6.67(1H，s， H-1)，δ6.55(1H，d，J=8.0，H-6)，根據(jù)這3處H信號(hào)推測(cè)該化合物含有一個(gè)苯環(huán)，苯環(huán)上有3個(gè)氫原子，其中一個(gè)氫原子無(wú)裂分，另外兩個(gè)氫原子則相鄰；由δ3.69(2H，t，J=8Hz，H-7)和δ2.68(2H，t，J=8Hz，H-8)推測(cè)出該化合物含有一個(gè) - CH2CH2O-片段。

圖1 化合物的核磁共振氫譜

通過(guò)核磁共振碳譜可以看出該化合物碳原子的信號(hào)為δ131.7(C-1)，116.3(C-2)，146.1(C-3)，144.6(C-4)，117.1(C-5)，121.2(C-6)，39.6(C-7)，64.6(C-8)；化學(xué)位移在100～150 PPM范圍有6個(gè)碳信號(hào)為131.7, 116.3, 146.1, 144.6, 117.1, 121.2；這6個(gè)碳信號(hào)為SP2雜化碳，由這6個(gè)碳原子組成了一個(gè)苯環(huán)；由化學(xué)位移在δ39.6處的C和64.6處的碳信號(hào)推測(cè)該化合物有- CH2CH2O-片段。