內生放線菌SR-1102對蔬菜立枯病的防效及其促生作用

王艷　劉琴　黃金金　徐健　祁建杭　徐彬　韓光杰　李傳明

摘要：試驗分析內生放線菌SR-1102對番茄、辣椒立枯病的防治效果及其促生增產作用。結果表明，內生放線菌SR-1102能有效防治蔬菜立枯病，包衣、蘸根、灌根處理蔬菜種子或幼苗，對立枯病的防效在66.81%～83.65%之間，其中包衣處理防效最高。內生放線菌SR-1102對辣椒、處理后番茄發芽無抑制作用，同時能促進蔬菜生長、增加產量，處理后番茄、辣椒增產率分別為10.10%～14.61%、7.67%～13.53%。多地田間試驗表明，SR-1102種子包衣對番茄、辣椒立枯病的防治效果分別為76.67%～80.08%、77.81%～81.36%，因此可以應用內生放線菌SR-1102防治蔬菜立枯病的危害。

關鍵詞：內生放線菌;蔬菜立枯病;促生作用;增產防效;生物農藥

中圖分類號： S436.3;S182文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）07-0123-04

蔬菜立枯病是由立枯絲核菌（Rizoctonia solani）侵染引起的一種重要苗期土傳病害，危害番茄、辣椒、黃瓜等多種蔬菜，可引起幼苗生長遲緩或迅速死亡。近年來，隨著設施蔬菜種植面積的擴大、復種指數的提高，蔬菜土傳立枯病的發生和危害日益加重，一般田塊死株率為15%～20%，嚴重時高達70%以上[1]，常造成毀種重播，嚴重制約了蔬菜產業發展。目前蔬菜立枯病的防治一般采用霉靈、代森鋅、五氯硝基苯等化學農藥，但長期應用大量的化學農藥帶來了農藥殘留風險加大、病害抗性增強、土壤微生物類群惡化等諸多問題[2]。

生物農藥具有高效、低毒、環境兼容性好等特點，利用微生物或次生代謝產物防治蔬菜病害是理想的生防途徑之一，對農業可持續發展具有重大意義[3]。國內外已有研究表明，木霉（Trichoderma spp.）菌株對立枯病具有防治作用[4-6]。黃新琦等運用熒光假單胞菌（Pseudomonas fluoreseens）防治黃瓜和水稻立枯病，且取得了很好的效果[7-8]。輪枝孢菌、芽孢桿菌等對立枯病菌也有一定防效[9]。植物內生放線菌婁徹氏鏈霉菌（Streptomyces rochei）是放線菌的重要類群，在番茄、辣椒、印楝、水稻等多種植物組織內被分離獲得[10]。江蘇里下河地區農業科學研究所自番茄根莖中分離獲得了婁徹氏鏈霉菌SR-1102菌株，該菌株對黃瓜枯萎病菌、茄子黃萎病菌、番茄灰霉病菌等多種靶標真菌具有拮抗活性[11]。本研究利用分離篩選到的內生放線菌SR-1102，采用種子包衣、醮根、灌根等3種方式處理辣椒和番茄種苗，以明確SR-1102對辣椒和番茄生長發育的影響以及對立枯病的防效，以期為探索利用植物內生放線菌防治蔬菜土傳病害提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試菌株和病原菌

供試菌株為婁徹氏鏈霉菌SR-1102，由江蘇里下河地區農業科學研究所分離自黃瓜枯萎病地塊中植株根際土壤，保存于實驗室[11]。

供試病原菌為立枯絲核菌（Rhizoctonia solani），由江蘇省農業科學院植物保護研究所提供，實驗室活化、搖瓶培養，供盆缽接種使用。

1.1.2 培養基

試驗用培養基為高氏一號培養基、PDA培養基，參照方中達的方法[12]進行配置。

1.1.3 [JP3]供試材料

供試辣椒品種為揚椒5號，番茄品種為瑞豐一號，購自于揚州農科農業發展有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 鏈霉菌SR-1102發酵液的制備 將SR-1102菌株在高氏一號斜面培養基上活化5 d后，挑取單菌落接種到裝有50 mL發酵培養基（30.0 g玉米粉、2.0 g K2HPO4、2.0 g MgCl2和1.0 g NaCl，1 000 mL 蒸餾水）的250 mL三角瓶中，在32 ℃、180 r/min 搖床上培養4 d，收集菌液濃縮成生物菌量>18%的懸浮液。加入適量增稠劑、成膜劑制成生物種衣劑，供種子包衣試驗使用。

1.2.2 SR-1102包衣處理對番茄和辣椒種子發芽率的影響

番茄、辣椒種子分別用生物種衣劑以藥種比（質量比）1 ∶10、1 ∶20、1 ∶30的不同比例進行拌種包衣，包衣后攤曬2～3 h，晾干。用保濕培養法[9]進行培養，取2層濾紙平展在為直徑15 cm的玻璃培養皿中并充分吸水，將各處理的包衣種子擺放在吸水紙上，以未包衣種子作為對照。每處理1皿，每皿播種20粒種子，每個處理重復3次。置于溫度為（25±1） ℃、光—暗周期為14 h—10 h的光照培養箱中培養，發芽期間每日記錄發芽數。在第7天種子發芽結束時測發芽率。

1.2.3 SR-1102不同處理方式對苗期立枯病的防治效果

以番茄立枯病、辣椒立枯病為防治對象，分析SR-1102發酵液包衣拌種、蘸根、灌根等不同處理方式對蔬菜立枯病的防治效果。包衣處理采用盆缽試驗。取田間自然土室內破碎過50目篩，在160 ℃ 鼓風干燥烘箱內消毒4 h后，等量分裝到直徑為25 cm的盆缽內。番茄、辣椒種子用SR-1102種衣劑以藥種比（質量比）1 ∶10 的比例拌種包衣，陰涼風干后播入裝有消毒土壤的盆缽內，每盆播種20粒。分別取20 mL番茄立枯病菌、辣椒立枯病菌培養液，均勻滴加到盆缽內，并以清水澆灌濕潤土壤，在溫度為25 ℃室內培養，每處理重復3次，另以未處理種子接種病原菌作對照。出苗后定期觀察植株感病情況，記錄病株率并計算防效。蘸根處理：在穴盤營養土中育苗，選取長勢一致的3葉1心番茄、辣椒苗在SR-1102發酵液100倍稀釋液中蘸根5 min，晾干后移栽定植到大棚病土中。灌根處理：在穴盤育種苗移栽定植時，以SR-1102發酵液200倍稀釋液灌根，每株灌液量為50 mL。同時，以未處理的育種苗移栽作對照。每處理育苗定植30株，重復3次，定植20 d調查病株率，計算防效。

1.2.4 SR-1102對蔬菜生長發育和產量的影響

以番茄和辣椒種子或育種苗為試驗對象，采用SR-1102發酵液種子包衣、蘸根、灌根等3種不同處理方式進行處理后，播種或定植于連作溫室大棚中，以未處理種子或育種苗為對照，方法同“1.2.3”節。每個處理重復3次，每處理隨機選定5株，定株調查花期株高，及時采收果實，并稱質量，計算產量。

1.2.5 大田試驗

2017年分別在北京昌平、江西南昌、江蘇揚州等不同地區選擇土傳病害番茄立枯病、辣椒立枯病發生較重的大棚進行田間試驗。試驗采用SR-1102發酵液分別對番茄和辣椒種子按藥種比（質量比）1 ∶10的比例進行包衣拌種處理，以未包衣種子為對照，播種20 d后調查病株率，參照方中達的方法[12]統計病情指數，計算防效。

2 結果與分析

2.1 SR-1102包衣處理對種子發芽率的影響

發芽試驗結果（圖1）表明，采用3種藥種比的SR-1102包衣處理后的番茄、辣椒種子的發芽率均在91.67%～95.00% 之間，3個濃度處理間的發芽率無顯著差異，且與空白對照的發芽率也無顯著差異。說明以藥種比1 ∶10、1 ∶20、1 ∶30對種子進行包衣處理，對番茄、辣椒種子萌發無抑制作用。

2.2 SR-1102不同處理方式對立枯病的防治效果

SR-1102發酵液分別以藥種比1 ∶10包衣種子、 定植時100倍稀釋液蘸根和移栽時200倍稀釋液灌根3種方式處理番茄和辣椒種子或幼苗，分析不同處理方式對茄果類蔬菜立枯病的防治效果。結果（圖2）表明，不同施藥方式對立枯病均有一定防治效果，但不同處理方式對立枯病的防治效果存在顯著差異，其中包衣處理對辣椒、番茄立枯病的防治效果分別達82.78%、83.65%，100倍稀釋液蘸根處理的防治效果分別為74.03%、77.59%，200倍稀釋液灌根處理的防治效果分別為66.81%、68.91%，包衣處理防效明顯高于100倍稀釋液蘸根和200倍稀釋液灌根處理。

2.3 SR-1102對作物生長的影響

采用SR-1102發酵液包衣、蘸根、灌根等3種不同處理方式對番茄、辣椒種子或幼苗進行處理，結果（表1）表明，3種處理方式對辣椒和番茄生長均具有一定的促生作用，表現為植株株高增高、單果質量增加、座果期延長、單株產量增加，番茄平均單株產量增加10.10%～14.61%，辣椒平均單株產量增加7.67%～13.53%。

2.4 SR-1102田間試驗應用效果

在北京、江西、江蘇等省份開展不同地區SR-1102對蔬菜立枯病防效的田間試驗。結果（圖3）表明，采用SR-1102發酵液按照1 ∶10的比例對種子進行包衣處理后，對辣椒、番茄立枯病具有較好的防治效果。處理區番茄立枯病的病株率控制在3.13%～4.38%之間，對番茄立枯病防效達76.67%～80.08%;辣椒立枯病的病株率控制在3.75%～4.50%之間，對辣椒立枯病防效達77.81%～81.36%。不同處理區番茄、辣椒生長安全，未產生藥害或其他不良反應。

3 總結與討論

蔬菜立枯病是一種危害重、防治難的植物維管束病害。目前主要依靠栽培技術和化學藥劑防治等措施防治病害[13-14]。然而，這些措施不能完全有效地控制病害的發生，化學藥劑的使用會造成嚴重的農藥殘留和土壤污染。植物根圍土壤中廣泛存在能產生拮抗性物質、抑制病原菌、促進植物生長的有益內生菌，是經濟有效的生防因子，利用根圍細菌防治植物土傳病害，探索控制土傳病害的生物防治途徑，對農業可持續發展具有重要作用。

SR-1102是植物內生拮抗菌，對危害蔬菜的多種真菌土傳病害具有顯著防治效果。在室內盆缽病土中播種經過SR-1102包衣處理的番茄、辣椒種子，立枯病的防治效果在82.75%以上。種子包衣、稀釋液蘸根移栽、稀釋液灌根等多種處理方式對立枯病菌均具有一定防效，但不同處理方式對立枯病的防治效果存在顯著差異，以包衣種子處理防效最高。在北京、江西、江蘇等地用SR-1102包衣處理種子，對番茄、辣椒立枯病防效分別達76.67%～80.08%、77.81%～81.36%。同時，由于控制了蔬菜土傳立枯病害的危害，促進了根系生長發育，增強了作物抗逆能力，因此提高了蔬菜的產量。開發利用SR-1102等內生菌防治植物土傳病害，探索控制土傳病害的生物防治途徑，對農業可持續發展具有重大意義。

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