HPVE6/E7mRNA檢測在ASCUS中的應用

薛蕓，許寶珍，周月華

南京市溧水區人民醫院婦產科，江蘇南京 211200

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，全球每年新發52.6萬人，死亡26.6萬人。東南亞地區發病率及病死率均高，根據最新發布的中國癌癥數據統計顯示2015年中國子宮頸癌新發病例9.89萬，死亡病例3.05萬[1]。2016年ACOG指南顯示美國歷經25年篩查使宮頸癌發病率從14.8/10萬降至6.7/10萬。早期篩查早期診斷早期治療是預防子宮頸癌的關鍵。研究表明，持續的高危型HPV感染是導致宮頸上皮內瘤變的必要因素[2]，對于TCT檢測結果為ASCUS的人群，需要HPV檢測進行有效分流，該次研究選擇2018年6月—2019年5月在南京市溧水區人民醫院就診的165例TCT為ASCUS患者，同時進行Aptima HPVE6/E7mRNA與HC2檢測，以陰道鏡下活檢病理診斷為金標準，探討HPV E6/E7mRNA檢測在ASCUS分流中的應用，指導陰道鏡轉診，最大程度節省資源但又能早期診斷疾病，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取165例TCT為ASCUS患者，年齡為30～71歲，平均（45.56±9.69）歲，排除宮頸手術史，同時進行 Aptima HPV E6/E7mRNA與HC2檢測，并于陰道鏡下進行宮頸活檢。按病檢結果進行分組，慢性炎癥有87例，CIN1有35例，CIN2有24例，CIN3有18例，子宮頸癌有1例。

1.2 檢測方法

1.2.1 TCT檢測 使用TCT專用刷在宮頸移行帶區旋轉3～5周，刷取的脫落細胞置于專門的保存液中貯存送至病理科，采用TBS診斷系統進行閱片及診斷。

1.2.2 HC2檢測 使用HC2專用細胞刷在宮頸管內旋轉3～5周，將刷子置于專門保存液中，按照試劑盒說明進行，能檢測13種高危型亞型HPV。結果判讀：≥1.0為陽性

1.2.3 HPVE6/E7mRNA檢測采用豪洛捷公司的全自動核酸檢測系統，簡稱Aptima HPV，可以檢測14種高危HPV亞型（16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68），將標本轉移至樣本轉移試劑，可裂解細胞，分離和純化核酸，通過轉錄介導的等溫擴增法（TMA）進行目標擴增，使用發光核酸探針檢測擴增核酸，DNA雜合體發射出的光可用光度計來測定，檢測其光子信號，（相對光單位RLU），最終檢測結果根據該分析物信號與閾值之比（S/CO）進行判讀，≥0.5為陽性。

1.2.4 陰道鏡檢查及活檢 所有ASCUS患者均行陰道鏡檢查，醋酸染色1 min，然后進行碘染色，在不著色區進行多點活檢，未見明顯異常者采用3,6,9,12點進行活檢，轉化區暴露不清者加做宮頸管搔刮。所有病理切片均由高年資病理科醫師閱片，根據病理結果分為慢性炎癥、CIN1、CIN2、CIN3及子宮頸癌。

1.3 統計方法

使用SPSS 17.0統計學軟件分析數據。計量資料采用單個樣本t檢驗，用均數±標準差（）表示。計數資料采用χ2檢驗或連續校正、Fisher精確概率法，以頻數和百分比（%）表示，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 165例ASCUS患者活檢病理結果情況

診斷為慢性炎癥有87例、CIN1有35例、CIN2有24例、CIN3有18例，子宮頸癌有1例，其中CIN2+占25.45%（42/165），CIN1 及以下者占 73.94%（122/165）。 見表 1。

2.2 兩種檢測方法檢測HPV感染情況

HPV E6/E7mRNA檢測HPV感染陽性率為60.00%（99/165），用HC2檢測HPV感染陽性率為72.73%（120/165）， 高于 HPV E6/E7mRNA 組 （χ2=38.990，P＜0.05）。CIN2+中 HPV E6/E7mRNA檢測陽性率為 95.24%（40/42），CIN1及以下感染率為 47.54%（58/122）， 低于 CIN2+組（χ2=30.278，P＜0.05）。 HC2 檢測組 CIN2+HPV 陽性率為88.10%（37/42），CIN1及以下組 HPV陽性率為 67.21%（82/122），低于 CIN2+組（χ2=7.176，P＜0.05）。 見表 1。

表1165 例ASCUS患者HPV E6/E7mRNA和HC2檢測結果情況[n（%）]Table 1 Results of HPV E6/E7 mRNA and HC2 detection in 165 ASCUS patients[Case(%)]

2.3 兩種方法對ASCUS人群中診斷CIN2+效能評價

HPV E6/E7mRNA診斷CIN2+的靈敏度為95.34%，HC2診斷CIN2+的靈敏度為88.37%，使用Fisher精確概率法計算（P=0.221）。HC2診斷CIN2+的特異度為32.79%，HPV E6/E7mRN診斷CIN2+的特異度為52.46%，比HC2高 （χ2=27.274，P＜0.05）。 Youden 指數和一致率 HPV E6/E7mRNA均高于HC2。見表2。

表2 兩種檢測方法診斷CIN2及以上的效能評價Table 2 Evaluation of the effectiveness of two detection methods in the diagnosis of CIN2 and above

3 討論

該次研究發現165例ASCUS患者中CIN2+占25.45%。大多數診斷是CIN1或正常。Zhu Y等[3]研究發現ASCUS中18%患者診斷為CIN2+，僅8.3%診斷為CIN3+。因此可以看出，ASCUS中僅一小部分為真正的患有宮頸癌前病變人群，這是由于細胞學檢測主觀性大，ASCUS可重復性低，HPV檢測作為ASCUS細胞學分流的手段，就是為了將那些不確定的細胞學結果用HPV檢測可以降低無CIN的陰道鏡轉診率。HC2是經美國食品藥品監督管理局（FDA）批準認證的應用于高危型HPV DNA的檢測。該次研究發現使用HPV E6/E7mRNA檢測HPV陽性率低于HC2，與HPV一過性感染有關，病毒基因并未與宿主整合，故而未被Aptima HPV檢測出來。已有研究表明，大多數HPV會通過自身免疫力清除，只有持續的HPV感染才能發生宮頸的病變[4]。E6、E7基因作為HPV病毒的致癌基因，它們的轉錄mRNA所表達的蛋白是導致宮頸癌的關鍵因素，E6、E7癌蛋白通過抑制兩種抑癌蛋白 （p53及pRb）使被感染的宿主細胞無限增殖并惡變。有研究顯示，CIN及子宮頸癌患者中HPV E6/E7mRNA檢出率高于宮頸炎人群[5]。唐振利等[6]發現HPVE6/E7 mRNA陽性率隨著宮頸病變病理學級別升高呈增加趨勢，TCT聯合HPV E6/E7 mRNA檢測能提高對宮頸病變篩查的敏感性和特異性。張月輝等人[7]研究亦發現高級別上皮內瘤變患者中HPVE6/E7mRNA檢測率高于低級別上皮內瘤變及以下者。該次研究同樣發現CIN2+患者中HPV E6/E7mRNA檢測陽性率明顯高于CIN1及宮頸慢性炎癥者。由此可見，通過HPVE6/E7mRNA檢測可發現高風險人群，進而提前診斷及治療，預防子宮頸癌發生。

Castle PE等[8]研究 988例 ASCUS婦女發現 Aptima HPV診斷CIN2+的靈敏度為89.4%，特異度為63.1%，診斷CIN3+的靈敏度為95.2%，特異度為60.5%。潘瓊慧等[9]研究同樣發現HPV E6/E7mRNA的特異性顯著高于HPV DNA。梁馨元等[10]一項Meta分析顯示與HC2檢測相比，HPV E6/E7 mRNA檢測CIN3+表現出較高的特異度。潘學景等[11]在ASCUS分流管理的隨訪研究顯示，HPV E6/E7 mRNA檢測ASCUS中高度上皮內瘤變及子宮頸癌的敏感性與HPV DNA檢測無差異,而特異性高于HPV DNA檢測。該次研究結果Aptima HPV診斷CIN2+的靈敏度為95.34%，特異度為52.46%，結果與其研究相近。另外利用HC2診斷CIN2+的靈敏度為88.37%，特異度為32.79%。與Aptima HPV相比，具有相似的靈敏度，但Aptima HPV特異度更高，Youden指數和一致率Aptima HPV E6/E7mRNA均高于HC2，提示Aptima HPV在診斷子宮頸高級別上皮內瘤變中準確度更高，可用于ASCUS的分流，減少過多不必要的陰道鏡。

綜上所述，由于HPV E6/E7mRNA具有與HC2相似的靈敏度，且具有更高的特異度，對于TCT為ASCUS患者，應用HPV E6/E7mRNA進行分流，若陽性則轉診陰道鏡活檢，若為陰性，則一年后復測TCT及HPV E6/E7mRNA。HPV E6/E7mRNA可有效幫助ASCUS分流，對篩查子宮頸高級別上皮內瘤變具有較高的診斷價值，同時可以減少過度的不必要的陰道鏡，對于廣大基層婦女來說，同時減輕了經濟負擔及精神壓力。