淺談微生物樣品的采集及送檢

[摘要] 樣品的采集和送檢是微生物檢測結果客觀、公正的基礎。在不同領域，微生物樣品的采集和送檢要求存在一定差別。該文總結了食品、水、化妝品、衛生用品等領域的微生物樣品的采集及送檢要求。各領域在樣品采集方面并沒有統一的標準，但是樣品送檢的要求是基本一致的。為了更好地進行市場競爭，檢測實驗室可以根據工作需要，針對不同的樣品和項目制定相關規則，以提高客戶服務質量。

[關鍵詞] 微生物;樣品;采集;保存;運輸

[中圖分類號] R155.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2020）02（c）-0166-04

[Abstract] The collection and submission of samples is the objective and fair basis for microbial test results. The requirements for collection and submission of microbial samples vary in different areas. This article summarizes the requirements for the collection and submission of microbial samples in the fields of food， water， cosmetics， and hygiene products. There is no uniform standard for sample collection in various fields， but the requirements for sample submission are basically the same. In order to better compete in the market， the testing laboratory can formulate relevant rules for different samples and projects according to the work needs to improve the quality of customer service.

[Key words] Microorganism; Sample; Collection; Preservation; Transportation

微生物具有傳播廣、無處不在，生長繁殖迅速和對環境很快適應的特性[1]。一旦遇到合適的環境，就會快速繁殖，在食品、水、化妝品和衛生用品中，都會攜帶微生物或者被微生物污染，導致大面積傳播，其中含有的病原菌會對環境安全、人身健康造成嚴重的威脅，引起公共衛生事件，因此，有必要做好微生物檢驗工作[2-3]。

檢驗工作離不開樣品的采集、運輸和保存，這是保證檢驗工作質量的基礎，是影響結果的重要因素。因此抽樣人員要依據科學的方法、使用合理的器具、按照規范的操作，采集具有代表性的樣品，并確保運輸和保存的條件。這些工作的質量直接決定了微生物檢驗工作的水平。

該文主要依據現行標準，對食品、水、化妝品和衛生用品微生物檢驗中樣品采集、送檢等內容進行總結，以便實驗室能制定合理的質量控制方案，提高樣品采集工作的質量，確保檢測結果的準確性，同時能夠更好地服務市場，服務客戶。

1? 樣品的采集

1.1? 食品

目前食品中微生物的檢測依據是食品安全國家標準GB 4789系列，判定標準為相關產品的食品安全國家標準和《食品安全國家標準 食品中致病菌限量》（GB 29921-2013）[4]。

《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗總則》（GB 4789.1-2016）中規定了樣品的采樣方案，應根據二級或三級采樣方案進行樣品的采集。二級采樣方案設有n、c和m值，三級采樣方案設有n、c、m和M值。

其含義為n表示同一批次產品應采集的樣品數;c表示最大可允許超出m值的樣品數;m在二級采樣方案中表示最高安全限量值，在三級采樣方案中表示可接受水平限量值;M值在三級采樣方案中表示的是最高安全限量值。

1.2? 水

1.2.1 生活飲用水及其水源水? GB/T 5750.12-2006和GB 5749-2006分別給出了生活飲用水的的微生物檢測方法和限量指標，在《生活飲用水標準檢驗方法 水樣的采集和保存》（GB/T 5750.2-2006）中規定了樣品的采集和保存要求。同一水源、同一時間采集幾類檢測指標的水樣時，應先采集供微生物學指標檢測的水樣。采樣時應直接采集，不得用水樣涮洗已滅菌的采樣瓶，并避免手指和其他物品對瓶口的沾污[5-7]。

進行微生物檢測的水樣，應使用滅菌的具塞玻璃瓶進行盛放，采集體積至少為0.5 L，并在每125 mL水樣中加入0.1 mg硫代硫酸鈉除去殘留余氯。但是目前也有使用可封口的無菌采樣袋進行樣品采集的，使用起來較為方便，不必再提前對容器進行滅菌處理，且不易破碎、漏液。

1.2.2 包裝飲用水? 《食品安全國家標準 包裝飲用水》（GB 19298-2014）中給出了需要檢測的微生物指標，分別為大腸菌群和銅綠假單胞菌，均是參照食品中給出的二級采樣方案進行樣品采集[8-10]。

1.2.3 飲用天然礦泉水? 《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水》（GB 8537-2018）中將原標準的兩步檢測進行了整合，樣品量從1+4變為了初檢時的5份樣品，所設指標大腸菌群、銅綠假單胞菌、糞鏈球菌和產氣莢膜梭菌也是按照二級采樣方案進行樣品采集[11-14]。

其指標多采用濾膜法進行檢測，檢樣用量較大，因此應根據樣品的規格采集足夠用的樣品數量。

1.3? 化妝品

化妝品中微生物的檢測方法和指標限量目前遵循《化妝品安全技術規范》（2015年版）的規定[15]。

該規范要求所采集的樣品，應具有代表性，根據每批化妝品數量大小，隨機抽取相應數量的包裝單位。檢驗時，應從不少于2個包裝單位的取樣中共取10 g或者10 mL。包裝量小于20 g的樣品，采樣時可適當增加樣品包裝數量。

對于化妝品來說，不同類型的產品其成分、狀態和包裝差異較大，尤其是部分樣品在取樣時相對比較困難，因此應加大采樣量。另外，在采集化妝品時，也需考慮部分樣品的價格因素。

1.4? 衛生用品

該文所指衛生用品是指在《衛生紙（含衛生紙原紙）》（GB/T 20810-2018）和《一次性使用衛生用品衛生標準》（GB 15979-2002）中所涵蓋的樣品類別。其樣品采集要求是，應從同一批號的3個運輸包裝（大包裝）中至少抽取12個最小銷售包裝樣品，其中1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另1/2樣品必要時用于復檢[16-18]。

2? 樣品的送檢

2.1? 食品

在《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 總則》（GB 4789.1-2016）中規定了樣品運輸和保存的條件要求。應將采集后的樣品盡快送進實驗室進行檢驗，在運輸過程中應注意保持樣品的完整性，不應出現破損、泄露等情況[19]。如果不能及時進行檢驗，應將樣品保存在接近原有貯存溫度條件的環境下，或者可采取必要防護措施，防止樣品中的微生物數量發生變化[20-23]。

在03版食品衛生微生物學檢驗標準中肉與肉制品、蛋及蛋制品、水產食品、冷凍飲品、飲料、調味品、冷食菜、豆制品、糖果、糕點、蜜餞和酒類的檢驗中也都明確規定了對樣品采集和送檢應按照GB 4789.1的要求執行。當涉及到具體項目的檢驗方法時，對樣品的保存要求可能會有一定差異，如何設置保存條件和時間，應該參考具體的檢驗方法[24-27]。

2.2? 水

GB/T 5750.2-2006中明確規定了采集的水樣應在低溫避光條件下進行保存，并且須在4 h內送實驗室進行檢測。因此，要注意采集、送檢時間，且在送檢前需跟檢測實驗室提前溝通，做好檢驗準備。必要時，這些信息也應告知客戶。

包裝飲用水和礦泉水的標準中雖然沒有給出保存和送檢要求，但是在具體工作中也應該做到保存條件能夠接近樣品的銷售環境或其原貯存條件，以防止樣品中的微生物數量發生變化。

2.3? 化妝品

《化妝品安全技術規范》（2015版）中也提到了樣品的送檢要求。在檢驗前，樣品應嚴格保持原有的包裝，不應破損，防止樣品污染。如不能及時檢驗，可以將樣品在室溫陰涼干燥的條件下進行存放，但是不要冷藏或冷凍。而且，當一份樣品如果既要做微生物學檢驗，又要做其他檢驗，應該先進行微生物檢驗，再將剩余樣品做其他檢驗分析。

2.4? 衛生用品

衛生用品的標準中也簡單提到了對樣品的防護，對于采集的最小銷售包裝不應有破損，在檢驗前不應打開樣品包裝，這樣做同樣是為了防止樣品被污染。

這里要重點提出的是，衛生用品的微生物測試指標中的細菌和真菌總數是允許進行復檢的，因此在正式出具結果之前，要對復檢樣品進行必要的防護。

3? 討論

3.1? 采樣方案的制定

通過上述信息，可以看出對于采樣方案的制定，食品微生物檢驗中給出的信息會相對更全面一些，它采用了ICMSF制定的食品微生物學分析采樣方法，這是目前在國內外被廣泛應用的方法。與以往的采樣方法不同，不再是通過一個樣品的檢驗結果來判定整批樣品是否合格，而是采用了更科學、更客觀的方式，從統計學的角度來進行樣品采集[28]。而且目前包裝飲用水和礦泉水的采樣方案中也是采用了該方法。

目前的食品安全國家標準中定量檢測的項目使用三級采樣方案，如菌落總數、大腸菌群、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌;霉菌在大多數標準中使用的二級采樣方案，但是在《食品安全國家標準 沖調谷物制品》（GB 19640-2016）中為三級采樣方案。定性檢測項目一般為二級采樣方案，如沙門氏菌、大腸桿菌O157、單增李斯特氏菌;金黃色葡萄球菌在進行定性檢測時也采用二級采樣方案，如《食品安全國家標準 發酵乳》（GB 19302-2010）等。

3.2? 樣品數量與重量

食品中采用二級或者三級采樣方案時，樣品數量一般為n=5，即5份樣品，每份的重量應滿足檢測項目的總需求。生活飲用水、化妝品和衛生用品的樣品采集方式相當于是二級采樣，n=1、c=0，再設置相應的m值，即該類樣品的最高安全限量值，這里的“1”指的是滿足檢驗工作要求的“1份樣品”，不單純指“1個樣品”或者“1個包裝”。如果每份樣品的凈含量可以滿足所有檢測項目，則采取n個樣品即可;如果不能滿足，需要相應增加每份樣品的數量。

另外，商品價格和售賣量是在采樣過程中制約樣品數量和重量的重要因素。為了能夠使樣品量滿足微生物和化學所有的檢測項目，在不影響檢測結果的前提下，可以先檢測微生物項目，剩余的樣品再進行其他項目的檢測。

3.3? 樣品的保存

樣品在送檢過程中的保存要求，在標準中是有共同點的，即樣品采集后應盡快運送至實驗室進行檢驗，同時，應在接近樣品原有狀態的條件下進行運輸和保存，并采取相應措施，防止交叉污染，這是為了不使樣品中原有的微生物狀態發生變化，以免影響檢測結果。

行業內部為了達成一致的協議，也會制定一些行業標準，對樣品的采集、運輸和保存做出具體的規定，那么當遇到相應的樣品時，也應該參考這些信息。

3.4? 檢測實驗室

針對實驗室的具體工作來說，必要時，可以將相關信息形成文件，明確工作流程和各節點的時間控制，確保關鍵崗位人員（市場人員、采樣人員、檢測人員、審核人員和報告簽發人員等）都能得到并按照這些文件執行。這樣既能節省資源，又能提高工作質量，利于實驗室內部工作和外部市場開拓，也是比較好的質量控制措施。例如，實驗室可以設定在樣品采集后2 h、4 h或者6 h內送至實驗室開始進行檢測，明確的信息設置可以使工作人員尤其是檢驗員有充分的時間進行準備工作，也可以作為市場人員用來提升市場競爭力的要素。

綜上所述，微生物學檢驗是產品檢驗的重要環節，實驗室應在標準規定的范圍內，科學合理地實施采樣方案，采取有效措施保證運輸和保存條件，確保檢驗結果的準確性，不斷提高和完善服務能力。同時，希望相關標準制定部門能夠提出更科學、合理，實施性、操作性更強的樣品采集方案，以持續提高結果的可信度，提高產品衛生質量。

[參考文獻]

[1]? 蔣艷梅，謝永剛，王玉芝.關于微生物基本知識及控制方法探討[J].釀酒，2003（2）：81-82.

[2]? 朱江輝.中國食品微生物風險評估進展與展望[J].中國食品衛生雜志，2016（2）：139-143.

[3]? 黃亞楠，吳艷芳，于慧穎.食品微生物檢驗樣品的采集和保存及檢驗方法[J].現代食品，2018（23）：70-71，78.

[4]? 王文娟.江西省礦泉水和包裝飲用水中銅綠假單胞菌污染情況分析[J].醫藥衛生科技，2017（3）：124-126.

[5]? 張丹.生活飲用水水質微生物檢驗分析的重要性研究[J].中國保健營養，2019，13（15）：391.

[6]? 高月霞.生活飲用水與水源水微生物檢驗結果的探討[J].中國醫藥指南，2019（6）：296-297.

[7]? 扎麗帕·熱合曼，董憲春.生活飲用水水質微生物檢驗分析的重要性[J].世界最新醫學信息文摘，2017（77）：175.

[8]? 聶炎炎，劉冬虹，吳環，等.2015年廣東省化妝品微生物污染狀況調查[J].吉林建筑工程學院學報，2016（6）：33-34.

[9]? 稅丕容.微生物檢測在化妝品質量檢驗中的應用[J].化工管理，2017（22）：49.

[10]? 郭毅.化妝品中微生物的檢測及應用[J].化工管理，2018（23）：233-234.

[11]? 曹高飛.紡織品抗菌整理過程發展的趨勢[J].科技資訊，2015（14）：195.

[12]? 李軻，郭會清，王永杰，等.紡織品微生物檢測標準綜述[J].棉紡織技術，2015（9）：81-84.

[13]? 趙瑩，黎俊宏，歐陽運富，等.常州市一次性使用衛生用品微生物檢測結果分析[J].中國消毒學雜志，2018（8）：602-604.

[14]? 付影，雷曉雨，田晶.解析食品微生物檢驗樣品的采集及保存注意事項[J].飲食科學，2018（8）：5.

[15]? 李巖.食品微生物檢驗樣品采集和保存的注意事項及其檢驗技術[J].中國衛生產業，2017（6）：39-40.

[16]? 陳璐璐.提高食品微生物檢驗質量的思考[J].食品界，2017（10）：104.

[17]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 4789.1-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 總則》[S].北京：2016.

[18]? 中華人民共和國衛生部.GB/T 5750.2-2006《生活飲用水標準檢驗方法 水樣的采集和保存》[S].北京：2006.

[19]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》[S].北京：2014.

[20]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 8537-2018《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水》[S].北京：2018.

[21]? 中華人民共和國國家食品藥品監督管理總局.《化妝品安全技術規范 2015年版》[S].北京：2015.

[22]? 中華人民共和國國家市場監督管理總局.GB/T 20810-2018《衛生紙（含衛生紙原紙）》[S].北京：2018.

[23]? 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.GB 15979-2002《一次性使用衛生用品衛生標準》[S].北京：2002.

[24]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 4789.7-2013《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗》[S].北京：2013.

[25]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 4789.13-2012《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 產氣莢膜梭菌檢驗》[S].北京：2012.

[26]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 4789.14-2014《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 蠟樣芽胞桿菌檢驗》[S].北京：2014.

[27]? 中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員.GB 4789.35-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 乳酸菌檢驗》[S].北京：2016.

[28]? 李志勇，胡小云，凌莉.國內外的食品微生物檢驗[J].檢驗檢疫科學，2004（6）：53-56.

（收稿日期：2019-11-20）