黃樟葉的顯微和薄層鑒別研究

王鶴　李海勝　安婷婷

摘要 [目的]制定黃樟葉質量標準中的顯微鑒別和薄層鑒別。[方法]通過顯微鑒別，對黃樟葉橫切面及其粉末進行觀察，鑒別其組織或結構特征等。對照藥材法進行薄層鑒別，并進行方法驗證。[結果]顯微鏡所見細胞壁、葉肉柵欄組織、主脈維管束、薄壁細胞和油細胞。薄層色譜的展開條件為乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5），點樣量為5 μL，置于365 nm處檢視。此薄層條件各斑點清晰，分離效果理想，重復性和穩定性良好。[結論]顯微鑒別和薄層色譜鑒別均可列入黃樟葉的質量標準。

關鍵詞 黃樟葉;顯微鑒別;薄層色譜鑒別

中圖分類號 R282.5文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2020）11-0182-04

Abstract [Objective] The research aimed to identify the microscopic identification and TLC of Cinnamomum porrectum leaves.[Method] Through microscopic identification， observed the cross section of Cinnamomum porrectum leaves and its powder to identify its tissue or structural characteristics.The thin layer identification was conducted against the medicinal material method， and the method was verified.[Result]Microscopic observed cell wall， mesophyll palisade tissue， main vein， vascular bundle， parenchyma cell and oil cell.The conditions for the development of TLC were ethyl acetatechloroformformic acid（5∶2∶0.5）， and the sample size was 5 μL， which was examined at 365 nm.This conditions had the advantages of clear spots， ideal separation effect， good repeatability and stability.[Conclusion]Microscopic identification and TLC can be used for the quality standard of Cinnamomum porrectum leaves.

Key words Cinnamomum porrectum leaves;Microscopic identification;TLC

黃樟Cinnamomum porrectum （Roxb.）Kosterm，又名南安、香喉、山椒等，分布于我國海南、廣東、廣西、福建、江西、湖南、貴州、四川、云南等地，以及巴基斯坦、印度經馬來西亞至印度尼西亞等國家。黃樟性溫，味辛、微苦，歸肺、脾、肝經;具祛風散寒、溫中止痛、行氣活血的功效，民間用于治療風寒感冒、風濕痹痛、胃寒腹瀉、泄瀉、痢疾、跌打損傷、月經不調等癥[1]。黃樟葉為黃樟干燥葉，精油率比較高，一般為2%～5%[2-3]。目前《中國藥典》2015年版一部尚無黃樟葉質量標準，因此制定黃樟葉質量標準，有利于醫藥部門對其質量的監控，確保用藥安全。筆者從黃樟葉的顯微鑒別、薄層色譜鑒別方面進行研究，制定藥材的質量標準，保證藥材的質量，保證其應用安全有效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器。

中草藥粉碎機（FW100）;二號藥典篩（浙江上虞市英超儀器經營部）;四號藥典篩（浙江上虞市英超儀器經營部）;電子天平（島津AUW220D）;光電顯微鏡（50i尼康）;尼康相機（P7100）;水純化系統（Milli-Q Integral）;數顯恒溫水浴鍋（HH-4）;硅膠G板（規格：100 mm×200 mm，20150912）;薄層層析硅膠板si60（HC30863956）;薄層色譜展開缸（規格：100 mm×200 mm）;三用紫外分析儀（WFH-203）。

1.1.2 試劑與藥材。

水合氯醛（批號30037517，國藥集團化學試劑有限公司）;甘油（批號0904102，汕頭市西隴化工廠有限公司）;醋酸（批號20131002-2，廣州化學試劑廠）;鹽酸（批號20140406-1，廣州化學試劑廠）;乙醇（95%）（批號20150601-2，廣州化學試劑廠）;無水乙醇（批號20151003-2，廣州化學試劑廠）;甲醇（批號150106 1，西隴化工股份有限公司）;乙酸乙酯（批號20150901-2，廣州化學試劑廠）;三氯甲烷（批號20130702-2，廣州化學試劑廠）;甲酸（批號140919 2，西隴化工股份有限公司）;所有試劑均為分析純。黃樟葉對照藥材（自制）。

1.2 方法

1.2.1 黃樟葉顯微鑒別[2]。

1.2.1.1 橫切面制片。

取黃樟葉干燥藥材在水中浸軟，切片，滴加水合氯醛透化，再滴加幾滴甘油醋酸，蓋上蓋玻片，制成臨時切片，對葉橫切面進行顯微觀察、描述、拍照[4]。

1.2.1.2 粉末制片。

取少量黃樟葉粉末（過四號篩）于載玻片上，滴加2～3滴水合氯醛試液，在酒精燈上灼燒透化，重復滴加幾次試液使粉末充分透化。再滴加幾滴甘油醋酸，蓋上蓋玻片，濾紙擦去蓋玻片以外的殘液，再置于光電顯微鏡下觀察。

1.2.2 黃樟葉薄層鑒別。

1.2.2.1 薄層鑒別[5]。

精密稱取黃樟葉粉末（過二號篩）2 g，加20 mL 60%乙醇，加熱回流1 h。過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解并移至10 mL容量瓶中，定容，作為供試品溶液。另取黃樟葉對照藥材粉末（過二號篩）2.0 g，同法制成對照藥材溶液。取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視[6-7]。

1.2.2.2 方法學驗證。

按表1制備黃樟葉供試品溶液。

專屬性：分別取供試品溶液1、對照藥材溶液、甲醇各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視[8-10]。

最低檢出限：取供試品溶液1各1、2、4、6、8、10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

穩定性：分別取對照藥材溶液、供試品溶液1、供試品溶液2、供試品溶液3各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

重復性：分別取供試品溶液1、對照藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。同一實驗人員重復上述操作3次，不同實驗人員重復上述操作2次。

耐用性1（不同提取方法）：取上述供試品溶液4～9、對照藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

耐用性2（不同展開劑）：取供試品溶液1、對照藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，將展開劑的比例依次調節如下：乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（4∶2∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶1.6∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.4）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（6∶2∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2.4∶0.5）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.6）。

耐用性3（不同廠家薄層板）：分別取供試品溶液1、對照品藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

耐用性4（溫濕度的影響）：分別取供試品溶液1、對照品藥材溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（5∶2∶0.5）為展開劑，不同溫濕度（20 ℃，30%;25 ℃，50%;25 ℃，60%），取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。

2 結果與分析

2.1 顯微鑒別結果

2.1.1 葉橫切面。

上下表皮各一列細胞（圖1），細胞壁明顯增厚，細胞內含紅色或紅棕色油脂。葉肉柵欄組織為1列細胞，海綿組織排列疏松，細胞內含黃色油脂。主脈維管束外韌型，呈凹槽狀，細胞內可見紅色油脂。

2.1.2 葉粉末。

粉末呈黃綠色，表皮細胞長方形或類長方形，薄壁細胞中含黃色或黃棕色油脂，可見油細胞（圖2～3）。

2.2 薄層鑒別的試驗結果

從圖4～11可以看出，供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點。在3種溫濕度條件下的薄層圖譜一致，即此薄層方法不受溫濕度影響。

3 結論與討論

該研究以黃樟葉為對象，顯微方法描述了油細胞、細胞壁等具有特征性。薄層鑒別的方法各點分離度好、專屬性強、重復性和穩定性好，不受溫濕度的限制，且簡單易行、準確可靠，為黃樟葉質量標準的建立打下基礎。

參考文獻

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