小金膠囊中麝香酮含量測定方法研究

萬佳麗 明凱利 向陽 林鳳杰 王丫頭 熊莉 周翔 余敏 黃志軍

摘要? 目的：建立準確可靠的小金膠囊中麝香酮含量測定方法。方法：采用（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷為固定相的色譜柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm），FID檢測器溫度為300 ℃，載氣為氮氣，流速為1.5 mL/min，未分流，柱溫為程序升溫，進樣量為1 μL。以正十八烷為內標物，采用內標法以峰面積比進行檢驗計算。結果：陰性對照品溶液在與內標溶液、對照品溶液和供試品溶液色譜圖相同時間處未見相同色譜峰，麝香酮在進樣量為0.120 1～1.200 6 ng的范圍內線性關系良好（R2=0.999 7），精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均<3%，平均回收率為99.93%，RSD為1.30%（ n =6）。結論：該方法操作簡便，與本品現行藥典方法相比，檢測結果更準確重復性更好，檢測時間大大縮短，可用于小金膠囊中麝香酮的含量測定。

關鍵詞? 小金膠囊;麝香酮;含量測定;氣相色譜法;內標法

Study on Determination Method of Musk Ketone Content in Xiaojin Capsules

WAN Jiali1，MING Kaili2，XIANG Yang2，LIN Fengjie1，WANG Yatou2，XIONG Li2，ZHOU Xiang2，YU Min2，HUANG Zhijun1，2

（1 Wuhan University of Technology，Wuhan 430070，China; 2 Jianmin Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Wuhan 430052，China）

Abstract Objective： To establish an accurate and reliable method for determination of musk ketone in Xiaojin Capsules. Methods： （5%-phenyl）-methylpolysilicone was used as the stationary phase column（30 m × 0.32 mm × 1.8 μm）.FID detector temperature was 300 ℃.Carrier gas was nitrogen.The flow rate was 1.5 mL/min，with no shunt.Column temperature was programmed temperature.And injection volume was 1 μL.N-octadecane was used as internal standard，and internal standard method was used to perform test and calculation according to the peak area ratio. Results： The same chromatographic peak was not seen at the same time in chromatograms of negative reference solution，internal standard solution，reference solution and test solution.Musk ketone had a good linear relationship in the range of 0.1201～1.2006 ng injection volume（R2 = 0.999 7）.RSD for precision，stability，and repeatability tests was < 3%.The average recovery was 99.93% and the RSD was 1.30%（n = 6）. Conclusion： The method is simple and convenient to operate.Compared with the current pharmacopoeia method for the product，its detection result is more accurate and repeatable，with detection time greatly shortened，and it can be used for determining the content of musk ketone in Xiaojin Capsules.

Keywords? Xiaojin Capsules; Musk ketone; Content determination; Gas chromatography; Internal standard method

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A? doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2020.04.011

小金膠囊主要由人工麝香、木鱉子、制草烏、楓香脂、乳香、沒藥、當歸、五靈脂、地龍、香墨等10味中藥材組成，其處方來源于中醫經典名方“小金丹”[1-2]，具有散結消腫，化瘀止痛的功效，用于陰疽初起，皮色不變，腫硬作痛，多發性膿腫，癭瘤，瘰疬，乳巖，乳癖[3]。臨床上可用于甲狀腺結節、乳腺增生、前列腺增生、子宮肌瘤、乳腺癌等疾病的治療[4-11]。小金膠囊作為治療陰疽癥狀的代表方，常作為疽證理論研究的基礎方，以豐富和發展中醫理論[12-13]。

小金膠囊標準收載于2015版《中華人民共和國藥典》，其中麝香酮為含量測定項，藥典標準采用氣相色譜法進行檢測，但在長期實踐中發現，根據藥典檢測方法，麝香酮出峰保留時間較長，在運行時間內無法出峰，且存在含測結果重現性較差，準確度偏低，結果真實性難以保證等問題。為了更真實的反應和控制小金膠囊的質量，本研究對藥典方法進行了重新修訂研究，建立了氣相色譜內標法測定小金膠囊中麝香酮的含量，該方法操作簡便，結果更準確，專屬性強，檢測時間短，較藥典方法更能準確地測定麝香酮的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 6890氣相色譜儀和FID檢測器（美國安捷倫科技有限公司）;CH-1型高純氫氣發生器（武漢科林普豐儀器有限公司）;CA-1型靜音無油空氣泵（武漢科林普豐儀器有限公司）;UA800-DH數字式超聲波清洗儀（功率800 W，頻率40 kHz，上海歐河機械設備有限公司）;Mettler ME203E、Mettler ME104E、Mettler TOLEDO XPE105電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）。

1.2 試劑

麝香酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110719-201716;純度99.9%）;正十八烷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111636-201303;純度99.4%）;乙酸乙酯（國藥集團化學試劑有限公司;分析純）;小金膠囊15批（健民藥業集團股份有限公司，批號：181173;181174;181175;181176;181177;181178;181179;181280;181281;181282;181283;181284;181285;181286;181287）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷為固定相的色譜柱（30 m×0.32 mm×1.8 μm）;柱溫為程序升溫，初始溫度為170 ℃，維持5 min，以10 ℃/min的速率升溫至250 ℃，維持5 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，維持9 min;進樣口溫度為250 ℃;FID檢測器溫度為300 ℃;載氣為氮氣;流速為1.5 mL/min;未分流;進樣量為1 μL。理論板數按麝香酮峰計算應不低于20 000。

2.2 對照品溶液的制備

內標溶液，精密稱取正十八烷適量，加乙酸乙酯制成每1 mL含1.5 mg的溶液，作為內標溶液。精密稱取麝香酮對照品2 mg，置5 mL量瓶中，精密加入內標溶液1 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取小金膠囊內容物適量，研細，取約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，分別精密加入內標溶液1 mL、乙酸乙酯4 mL，密塞，稱定重量并記錄，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）30 min，取出，放冷，稱重，用乙酸乙酯補足重量差，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液作為供試品溶液。陰性對照品溶液，小金膠囊去麝香酮后，不加內標溶液，同供試品溶液提取方法即得。

2.4 專屬性試驗

分別取內標溶液、對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液，根據2.1的色譜條件進行專屬性試驗，結果顯示陰性對照品溶液在與內標溶液、對照品溶液和供試品溶液色譜圖相同時間處未見相同色譜峰，提示麝香酮具有良好的專屬性，色譜圖見圖1。

2.5 線性關系考察

精密稱取正十八烷66.60 mg，置50 mL量瓶中，加乙酸乙酯使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為1.324 0 mg/mL的正十八烷內標溶液;另精密稱取麝香酮對照品100.15 mg，置50 mL量瓶中，加乙酸乙酯使其溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為2.001 0 mg/mL的麝香酮對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液0.3、0.5、1、2、3 mL，分別置5 mL量瓶中，各精密加入內標溶液1 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，以麝香酮峰積分面積與正十八烷峰積分面積的比值對麝香酮進樣量（X：ng）進行線性回歸，得回歸方程為Y=3.348 6X+0.030 7（R2=0.999 7）。見圖2。結果表明，麝香酮進樣量在0.120 1～1.200 6 ng的范圍內與峰面積比呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗

取“2.2”項下對照品溶液按上述色譜條件連續進樣5次，計算得麝香酮與內標峰面積比值的RSD為0.36%（ n =5），結果表明，該儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

將小金膠囊樣品（批號：181173）按“2.3”項下方法制成供試品溶液，于室溫下放置，按“2.1”項下色譜條件，分別在0、2、4、6、8、24 h進樣，計算得麝香酮與內標峰面積比值的RSD為1.04%（ n =6）提示小金膠囊供試品溶液在24 h內具有良好的穩定性。

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品（批號：181173），按“2.3”項下方法制備6份樣品，按“2.1”項下色譜條件進樣檢測，計算得麝香酮含量的平均值為1.288 5 mg/g，RSD為1.10%（ n =6），結果表明方法重復性良好。

2.9 回收率試驗

取已知含量的小金膠囊樣品（批號：181173）研細，取約0.5 g，精密稱定，共平行6份，分別置具塞錐形瓶中，各精密加入麝香酮對照品儲備液4 mL、正十八烷內標溶液1 mL，按“2.3”項下方法制成6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，計算回收率，結果如表1所示，平均回收率為99.93%，RSD為1.30%（ n =6）。

2.10 樣品含量測定

取15批小金膠囊樣品，按“2.3”項下方法制備成供試品溶液，按照上述色譜條件分別進樣，記錄色譜圖，按內標法以峰面積比計算，麝香酮含量測定結果見表2。根據各批測定結果，制訂限度為本品麝香酮含量不低于1.00 mg/g，即每粒含人工麝香以麝香酮（C16H30O）計，（規格：0.35 g/粒）不得少于0.35 mg。

2.11 與現有藥典方法比較

取15批小金膠囊樣品，分別用正文制定的方法與藥典方法進行檢測，色譜圖如圖3所示，藥典方法在30 min運行時間內無法出峰，在35 min出峰，正文制定的方法在16 min左右麝香酮即可出峰。各批小金膠囊樣品含量測定結果見表3，2種方法檢測結果差別較大，藥典方法含測數據普遍比正文制定方法含測數據高，且波動性較大，正文制定的方法測定的樣品麝香酮含量波動性較小，準確性高。2種含測方法比較結果見表4，正文制定的方法解決了藥典方法在運行時間內無法出峰的問題，并縮短檢測時間，明確儀器參數，較藥典方法更能準確地測定麝香酮的含量。

程序升溫方法 初始溫度100 ℃，以每分鐘10 ℃的速率升溫至200 ℃，保持20 min。出峰時間在35 min左右，在運行時間（30 min）內無法出峰。 初始溫度170 ℃，保持5 min分鐘，以每分鐘10 ℃的速率升溫至250 ℃，保持5 min，每分鐘30 ℃的速率升溫至280 ℃，保持9 min。麝香酮和內標物分別在13 min和16 min左右即可出峰。 解決了原方法運行時間內無法出峰的問題，同時縮短檢測時間，降低成本;改善麝香酮峰形;減少色譜柱的損耗和污染。

儀器參數 參數不明確，如進樣口溫度、檢測器溫度未明確。 固定進樣口溫度為250 ℃，檢測器溫度為300 ℃。 儀器參數更明確。

其他 1.對照品溶劑為乙醇，供試品溶劑為乙酸乙酯;2.進樣量：對照品溶液2 μL、供試品溶液3 μL。 溶劑統一為乙酸乙酯，進樣量均為1 μL。 對照品和供試品方法一致，更合理，減少波動和誤差。

3 討論

3.1 方法選擇

文獻報道中關于麝香酮的檢測分析方法很多，如高效液相衍生化法、薄層雙波長掃描法、氣相色譜法、GC-MS/MS法等[14-19]，但相較而言，氣相色譜法為當前檢測麝香酮較常用的方法。與其他方法相比，氣相方法樣品前處理簡單，通過適宜的程序升溫條件，即可保證麝香酮具有良好的峰形和響應性，而高效液相衍生化法樣品處理復雜，薄層雙波長掃描法針對中藥大處方受干擾成分影響且響應差，而GC-MS/MS法雖能獲得較好的結果，但對設備要求高，檢測成本高。因此，綜合考慮，本文選擇氣相色譜法檢測麝香酮。

3.2 定量方法的考察

比較內標法和外標法2種定量方法，其中內標法以正十八烷作為內標物。取樣品（批號：181173），按正文測定法制備供試品溶液1份，在氣相色譜條件下連續進樣6次，計算麝香酮峰峰面積的RSD為7.70%（ n =6），麝香酮峰峰面積與正十八烷峰峰面積比值的RSD為1.00%（ n =6），結果表明內標法準確性更高，可消除由于進樣量等色譜條件的變化或波動而引起的誤差。

3.3 程序升溫條件的考察

考察比較了五種柱溫程序升溫方法對色譜圖的影響，程序1：初始溫度為200 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升溫至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持10 min;程序2：初始溫度為250 ℃，保持13 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持10 min;程序3：初始溫度為150 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升溫至250 ℃，保持10 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持10 min;程序4：初始溫度為180 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升溫至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持10 min;程序5：初始溫度為170 ℃，保持5 min，以10 ℃/min的速率升溫至250 ℃，保持5 min，以30 ℃/min的速率升溫至280 ℃，保持9 min。結果表明，在一定范圍內，起始柱溫越高出峰越快，但分離度稍差。見圖4（A）、（B）、（C）、（D）、（E）。其中程序2下內標物正十八烷未分開，程序1下分離度稍差，程序3、4、5下分離度均較好，但在程序5下麝香酮的峰型和響應值最好，故綜合考慮選擇程序升溫條件為5。

3.4 小結

本試驗采用氣相色譜內標法測定小金膠囊麝香酮的含量，解決了藥典方法運行時間內無法出峰的問題，同時縮短檢測時間，降低成本，并且該方法操作簡便、靈敏度高、準確度好，毒性小，對環境污染小，較藥典方法更能準確地測定小金膠囊中的麝香酮的含量。

參考文獻

[1] 黃志軍，梁鵬，余黎，等.小金膠囊藥材組分過敏性研究[J].世界中醫藥，2016，11（11）：2393-2395.

[2]明凱利，向陽，楊艷霞，等.小金膠囊的HPLC指紋圖譜建立及主成分分析[J].中國藥房，2019，30（2）：188-192.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：570.

[4]任意，趙鐵錚，王玉文，等.小金膠囊聯合小劑量左甲狀腺素鈉片對結節性甲狀腺腫患者甲狀腺功能的影響[J].心理月刊，2019，14（16）：197.

[5]徐岳.左旋甲狀腺素鈉聯合小金膠囊治療結節性甲狀腺腫的臨床療效[J].上海醫藥，2019，40（6）：27-28，58.

[6]蔡軍波，張強，方芳，等.小劑量優甲樂聯合小金膠囊治療結節性甲狀腺腫的臨床療效及對甲狀腺功能的影響[J].實用藥物與臨床，2014，17（6）：711-714.

[7]王麗，吳君.小金膠囊聯合針灸治療乳腺增生的臨床分析[J].內蒙古中醫藥，2018，37（6）：18-19.

[8]侯俊明，張銳，賈勇，等.乳疾靈顆粒聯合小金膠囊治療乳腺增生的臨床觀察[J].世界中醫藥，2018，13（6）：1359-1362.

[9]肖嘉哲.消乳散結膠囊聯合小金膠囊治療乳腺增生療效觀察[J].基層醫學論壇，2018，22（5）：671-672.

[10] 陸薪如.小金膠囊對實驗性小鼠前列腺增生的作用[J].浙江中醫雜志，2014，49（6）：406-407.

[11]王惠玲，石亞利.小金膠囊聯合米司非酮治療子宮肌瘤的效果[J].臨床醫學研究與實踐，2019，4（7）：118-120.

[12]夏純，趙剛，徐勝，等.小金膠囊疽證理論探析[J].世界中醫藥，2016，11（12）：2580-2583.

[13]楊艷霞，朱爾剛，裴學軍，等.小金膠囊的疽癥臨床應用[J].世界中醫藥，2016，1（11）：2483-2485.

[14]吳超，李峰，朱曉靜，等.氣相色譜法測定西黃滴丸中麝香酮和乙酸辛酯的含量[J].山東中醫雜志，2014，33（7）：578-580.

[15]劉明穎，謝媛媛，劉軍鋒，等.GC法測定復方麝香注射液中6種揮發性成分[J].中成藥，2014，36（4）：749-752.

[16]蔣艷玲，袁衛梅，李宇翠.薄層掃描法測定麝香保心丸中麝香酮的含量[J].河南中醫藥學刊，2002，17（4）：21.

[17]張幸國，趙青威.薄層掃描法測定小金膠囊中麝香酮的含量[J].中國中藥雜志，2006，31（16）：1371-1372.

[18]羅云，楊明，廖正根，等.麝香及其代用品人工麝香質量評價方法研究進展[J].藥物分析雜志，2017，37（1）：13-19.

[19]王曉蕾，袁浩，王常順，等.GC-MS/MS法測定金牛眼藥、撥云散眼藥、特靈眼藥中麝香酮的含量[J].藥物分析雜志，2019，36（5）：357-361.

（2019-12-09收稿 責任編輯：徐穎）

中醫藥有效方劑篩選研究取得階段性進

國家中醫藥局堅決貫徹落實習近平總書記重要指示精神，把人民群眾生命安全和身體健康放在第一位，加速推進中醫藥防治新型冠狀病毒感染的肺炎科研攻關工作。日前，由該局組織實施的應急科研專項已取得階段性進展，據4省試點臨床觀察顯示，清肺排毒湯治療新型冠狀病毒感染的肺炎患者總有效率可達90%以上。

據悉，1月27日，國家中醫藥局以臨床急用實用效用為導向，緊急啟動“防治新型冠狀病毒感染的肺炎中醫藥有效方劑篩選研究”專項，在山西、河北、黑龍江、陜西四省試點開展清肺排毒湯救治新型冠狀病毒感染的肺炎患者臨床療效觀察，重點觀察確診患者乏力、發燒、咳嗽、咽痛、納差等癥狀及影像學表現變化情況，旨在迅速找到針對本次疫病有良好療效乃至特效的核心方藥。據統計，截至2月5日0時，4個試點省份運用清肺排毒湯救治確診病例214例，3天為一個療程，總有效率達90%以上，其中60%以上患者癥狀和影像學表現改善明顯，30%患者癥狀平穩且無加重。

據專家介紹，清肺排毒湯由漢代張仲景所著《傷寒雜病論》中的多個治療由寒邪引起的外感熱病的經典方劑優化組合而成，組方合理，性味平和，可用于治療新型冠狀病毒感染的肺炎輕型、普通型、重型患者，在危重癥患者救治中也可結合患者實際情況合理使用。該方也可用于普通感冒和流感患者。但該方為疾病治療方劑，不建議作為預防方使用。

（轉載于中國中醫官方公眾號）

基金項目：國家中醫藥管理局中藥重點產品行業標準制定計劃（ZYY-2017-018）作者簡介：萬佳麗（1996.09—），女，碩士研究生在讀，研究方向：中藥學研究，E-mail：wanjiali1996@163.com通信作者：黃志軍（1972.06—），男，博士，副教授，研究方向：天然藥物及其活性研究，Tel：（027）84520229，E-mail：452354589@qq.com