運脾和絡顆粒對糖尿病周圍神經病變大鼠血脂和血清SOD、MDA的影響

俞操　王宇皓　姚心怡　沈祥峰

【摘要】目的 探討運脾和絡顆粒對糖尿病周圍神經病變（diabetic peripheral neuropathy，DPN）大鼠血脂和血清SOD、MDA的影響。方法 鏈脲佐菌素加高糖高脂造模的大鼠隨機分成運脾和絡顆粒低、中、高劑量組、甲鈷胺組、模型組，另設正常組;采用葡萄糖氧化酶法測血糖，大鼠眼眶取血分離血清檢測膽固醇、高低密度脂蛋白、SOD（超氧化物歧化酶）、MDA（脂質氧化終產物丙二醛）的含量，在清潔后的大鼠脫脂尾部采用神經肌電圖誘發電位儀測定大鼠尾神經傳導速度。結果 對大鼠血糖而言，模型組給藥前后血糖均高于正常組，差異有統計學意義（P<0.001）;與模型組比較：運脾和絡顆粒高、中、低劑量組都具有一定降糖作用，差異有統計學意義（P<0.01，P<0.05）;運脾和絡顆粒高、中劑量組大鼠膽固醇、血清甘油三酯、高、低密度脂蛋白明顯降低，差異具有統計學意義（P<0.05）;運脾和絡顆粒高、中劑量組大鼠血清SOD含量顯著升高，MDA含量顯著降低，差異具有統計學意義（P<0.01）;運脾和絡顆粒高、中、低顆粒組大鼠神經傳導速度加快，差異具有統計學意義（P<0.01，P<0.05），作用呈劑量相關性。結論 運脾和絡顆粒能降低DPN大鼠高膽固醇、高、低密度脂蛋白;能提高DPN大鼠血清SOD含量，降低MDA含量，調節神經傳導速度，改善周圍神經病變，這可能是運脾和絡顆粒改善和防治DPN的作用機制之一。

【關鍵詞】運脾和絡顆粒;DPN;超氧化物歧化酶;防己黃芪湯;丙二醇;血脂

【中圖分類號】R587.1 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.16..03

糖尿病周圍神經病變（Diabetic Peripheral Neuropathy，DPN）是糖尿病嚴重的并發癥，神經病變可累及植物神經、運動神經、感覺神經，產生疼痛麻木、神經功能障礙和運動功能障礙。臨床上前期出現肢端感覺異常，有時伴痛覺過敏。隨后有肢痛，呈隱痛、刺痛或燒灼樣痛，后期可見運動神經受累，出現肌張力減弱、肌力減弱乃至肌萎縮和癱瘓。祖國傳統醫學尚未有DPN病名的載錄，紀文倩結合古代典籍與DPN患者疾病過程中表現的臨床特點，將本病歸納為“消渴痹證”，即“消渴”伴有“麻木”、“痹癥”、“痿證”等[1]，故防治DPN多從化瘀入手。

血脂代謝與DPN發生機制的相關性尚存在爭議;氧化應激作為DPN的潛在機制已受廣泛關注，而MDA、SOD則是評估機體抗氧化能力的重要指標。既往研究已經證實運脾和絡顆粒具有活血化瘀、運脾除濕之效，能夠起到改善DPN大鼠神經功能、血流動力狀況的作用[2]，故本研究從大鼠脂質代謝與氧化應激的角度出發，通過觀察運脾和絡顆粒對大鼠血脂和血清SOD、MDA含量的影響，研究并探討運脾和絡顆粒防治DPN的作用及機制。

1 實驗材料和方法

1.1 實驗動物

清潔型健康雄性SD大鼠80只，體質量（200±15）g，于浙江省實驗動物中心購入，許可證號：SYXK（浙）2014-0001 ，由浙江省中藥研究所的動物實驗室飼養及管理。

1.2 藥物與試劑

運脾和絡顆粒（當歸15 g、黃芪30 g、蒼術20 g、赤芍20 g、金銀花15 g、蒼術20 g、漢防己15 g、玄參12 g、威靈仙12 g）由浙江省中藥研究所制劑室提供;甲鈷胺：衛材（中國）藥業有限公司，國藥準字H20143107。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒，由南京建成生物工程研究所生產;葡萄糖（GLU）、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDLC）、高密度脂蛋白（HDLC）試劑盒，由寧波市慈城生化試劑廠生產。

1.3 造模與給藥

給80只清潔型健康雄性SD大鼠適應性喂養5天后，隨機選取10只作為對照組（正常組），剩余70只為造模組。給禁食12 h的大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素50 mg/Kg并于3天后測量血糖，挑選血糖>16.7 mmol/L的大鼠50只。剔除不符合診斷標準的大鼠，隨機分成5組，保證各組大鼠體重與血糖均衡。其中模型組10只，甲鈷胺組10只，運脾和絡顆粒高、中、低劑量組各10只。

1.4 指標檢測

實驗完成后，在大鼠尾靜脈取血，葡萄糖氧化酶法測血糖。實驗中分二次對大鼠血清膽固醇和甘油三酯進行測定，分別于給藥12周和給藥24周時，從大鼠眼眶取血，分離血清，TC與TG測定采用酶法。第24周時測定LDLC，HDLC。于第12周檢測SOD、MDA的含量，SOD測定：采用黃嘌呤氧化酶法。MDA測定：采用硫代巴比妥酸法。于第19周測量大鼠尾神經傳導速度。

1.5 統計學方法

實驗數據采用±s描述，統計學資料使用SPSS 19.0版本軟件數據包處理。組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，P<0.05具有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠的一般狀況

在實驗中，正常組大鼠表現機警，反應正常，活動正常，皮毛整齊而富光澤，舌淡紅，體重正常并呈上升趨勢;其余組大鼠則表現均為飲食、尿量增多，并有一定程度的消瘦，而模型組表現最明顯：在第二周開始精神不振，眼瞇無神，嗜睡，反應遲鈍，活動減少，毛發脫落多，色澤暗淡。實驗后期，模型組大鼠舌絳紫紅暗，尾部出現皮下瘀紫。運脾和絡高、中劑量組的大鼠上述癥狀得到明顯改善，低劑量組有所改善但不明顯。陽性對照組甲鈷胺組在反應程度、活動度、毛色方面有明顯改善，而舌下絳紫、皮下瘀紫方面無明顯改善。

2.2 各組大鼠血糖狀況

與正常組相比，模型組給藥前后血糖均增高（P<0.001）;與模型組相比，其余各組血糖都有降低，而運脾和絡顆粒高劑量組血糖降低是最為明顯的（P<0.01），而中、低劑量組相對次之（P<0.01，P<0.05）;運脾和絡顆粒各劑量組呈現出一定劑量相關性。陽性對照組甲鈷胺組血糖有所降低，但不如運脾和絡顆粒各劑量組降糖作用明顯。給藥24周時，運脾和絡顆粒各劑量組與給藥12周時相比血糖略有提高。見表1。

2.3 DPN大鼠尾神經傳導速度情況與運脾和絡顆粒的影響

與正常組比較，模型組神經傳導速度慢（P<0.001），說明DPN大鼠造模成功，伴隨病程延長，神經傳導速度逐漸降低。通過運脾和絡顆粒各劑量組治療后，神經傳導速度快于對照組（P<0.05）。這意味著運脾和絡顆粒在預防和改善DPN上有一定效果。見表2。

2.4 DPN大鼠的血脂情況與運脾和絡顆粒的影響

與模型組比較，運脾和絡顆粒組能明顯降低DPN大鼠的高膽固醇，降低DPN大鼠較高的血清低密度脂蛋白，升高DPN大鼠較低的血清高密度脂蛋白，作用呈劑量相關性。見表3、表4。

2.5 DPN大鼠的SOD、MOD情況與運脾和絡顆粒的影響

與模型組比較，運脾和絡顆粒組大鼠血清中MDA含量顯著降低、SOD含量顯著升高，其中以運脾和絡顆粒高劑量組最明顯（P<0.01），說明運脾和絡顆粒能增強抗氧化能力，提高機體免疫力。見表5。

3 討 論

運脾和絡各劑量組均降低DPN大鼠血糖，但于24周時血糖較12周有所提高。查閱相關文獻發現，以清熱、養陰、生津的中藥為主的大鼠降糖試驗中[3]，大鼠血糖隨給藥時間增長而不斷降低，也可能提示運脾和絡顆粒以健運脾胃功能為主、活血和絡為輔，能夠降低大鼠血糖并穩定在一定范圍內。

目前DPN病因和發病機制尚未完全清晰，有血糖代謝紊亂、脂代謝異常、微血管病變及血流障礙氧化應激損傷、神經營養缺乏、免疫損傷等因素[4]。血脂代謝與DPN發生相關機制尚未明確。早期Knuiman研究發現，血脂紊亂與糖尿病腎臟損害和血管病變成正相關，而與DPN病變無明顯相關性[5];但Mohapatra等研究顯示血脂異常能夠增加DPN的發生風險[6]，Perez-Matos等文獻研究顯示，多種降脂療法對DPN改善有積極影響，如他汀類藥物降脂治療、貝特類藥物降脂治療等[7]。國內亦有研究顯示，運用活血化瘀補氣等中藥在降低血脂的情況下能夠改善DPN[8-9]。綜上，盡管脂質代謝異常與DPN的相關性尚未得出統一研究結果，仍應該將脂質代謝正常化作為預防或治療DPN的一個目標。本實驗顯示經運脾和絡顆粒高劑量組治療后大鼠血脂降低，DPN得到改善，這與前述一些學者的研究結果一致。

氧化應激損傷作為糖尿病周圍神經病變的潛在機制之一也廣受關注。氧化應激是一個細胞內氧化和抗氧化系統失衡的過程，指機體受到刺激后，產生大量活性分子從而導致組織損傷。MDA（丙二醇）是多不飽和脂肪酸脂質過氧化反應的終產物，參與脂質氧化，為評估DM2患者氧化應激最常用的生物標志之一[10]。SOD（超氧化物歧化酶）則是生物體內抗氧化酶系中主要成員之一，是紅細胞內的一種胞漿低分子金屬蛋白，能夠通過還原成氧分子和過氧化氫的方式降低氧自由基，使細胞損傷減少[11] 。機體清除自由基的能力及脂質過氧化程度可通過測定兩者水平反映。Vincent等通過實驗發現，SOD2（錳超氧化物歧化酶）活性增高降低了DRG（背根神經節）神經元中的超氧陰離子，繼而阻斷Caspase-3的活化和細胞損傷，是神經元抗氧化、防御高血糖損傷的重要細胞調節因子[12]。劉春倩使用中藥九蟲丹治療DPN大鼠時發現T-SOD水平增高，MAD水平降低[13];秦保峰等用補氣活血中藥治療DPN患者發現SOD水平治療后顯著升高，MDA水平則顯著低于正常組[14]，這與本研究結果一致。

中醫認為，脾虛致消是糖尿病病機重要機理之一[15]。久食肥甘，濕熱、痰濁內生，脾氣不行，久則瘀滯入血，發為痰瘀、血瘀。故而，治應以祛邪化痰、運脾和絡、活血化瘀為主，兼以扶正治本。運脾和絡顆粒是由張仲景所著《傷寒雜病論》中的防己黃芪湯化裁而來，由蒼術、黃芪、防己、當歸、玄參、威靈仙、赤芍、金銀花組成，具有益氣活血、運脾和絡、祛邪化痰的療效。黃芪性味甘溫為君，張元素[16]言其“善治脾胃虛弱，瘡瘍血脈不行，”起補氣升陽、益氣固表、利水除濕之效，配合防己祛風行水，使風濕得去，表虛得固;易白術為蒼術，張隱齋[17]指出“凡欲補脾，則用白術;凡欲運脾，則用蒼術”，改用蒼術運脾之力尤甚;金銀花、玄參、赤芍、當歸涼血活血和血，威靈仙勝濕通絡除痹，共奏活血化瘀之效。故全方起到活血化瘀通絡、運脾除濕益氣之功。

此次實驗結果顯示，DPN模型組的血脂代謝狀況較正常組更差，評定氧化應激水平的指標SOD含量低于正常組，MDA含量高于正常組。而運脾和絡顆粒能改善DPN模型血脂代謝異常狀態，顯著增高SOD含量和降低MDA含量，增強機體抗氧化能力，這可能是其改善DPN的作用機制之一。而不足之處是，本研究尚缺少對血脂代謝、氧化應激與DPN發生具體機制的探討，以待學者作進一步的研究。

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