正交試驗法優(yōu)化鼻爽排毒顆粒水提醇沉工藝

袁建

（重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，重慶400010）

正交試驗法優(yōu)化鼻爽排毒顆粒水提醇沉工藝

袁建

（重慶醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院，重慶400010）

目的優(yōu)化鼻爽排毒顆粒的水提醇沉工藝。方法采用正交試驗法，以黃芩苷為指標，考察用水量、提取時間、提取次數(shù)對水提取工藝的影響；以黃芩苷保留率、固形物減少率為指標，考察藥液醇沉濃度對醇沉工藝的影響。結(jié)果最佳水提取、醇沉工藝為加12倍量水，煎煮3次（第1次80min，第2，3次各60min），提取液濃縮至相對密度為1.20，冷卻后加入乙醇使含醇量為70.00%，除去沉淀。結(jié)論優(yōu)化的水提取、醇沉工藝條件穩(wěn)定可行，重復性好，可用于該制劑的工業(yè)化生產(chǎn)。

鼻爽排毒顆粒；正交試驗法；黃芩苷；提取工藝

鼻爽排毒顆粒由黃芩、魚腥草、川芎、白芷、甘草、辛夷等多味藥組方，具有清熱解毒、通竅排膿之功效，臨床常用于化膿性鼻竇炎見鼻流濁涕、量多不止等癥。筆者采用L9（34）正交試驗設計，以黃芩苷含量和固形物減少率為測評指標優(yōu)化鼻爽排毒顆粒的水提醇沉工藝，為該制劑的規(guī)范化生產(chǎn)和臨床療效提供理論依據(jù)。

1　儀器與試藥

2010A型高效液相色譜儀（日本島津）；LC-10ATVP型輸液泵（雙泵）；SPD-10AVP紫外檢測器。黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110715-200514）；甲醇、磷酸為色譜純；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1黃芩苷含量測定［1-2］

2.1.1色譜條件

色譜柱：迪馬公司-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶56）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；紫外檢測波長：280 nm。

2.1.2溶液制備

精密稱取干燥至恒重的黃芩苷對照品3.45mg，置50mL容量瓶中，用甲醇適量使溶解，并用甲醇定容至刻度，搖勻，即得0.069 g/L黃芩苷對照品溶液。取正交試驗項下的提取液，濃縮、定容至100 mL，精密量取2 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇適量，超聲處理10 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，過微孔濾膜（0.45μm），離心，即得供試品溶液。照處方比例，稱取缺黃芩各味藥材，按正交試驗的優(yōu)化工藝制成缺黃芩陰性對照品溶液。

2.1.3方法學考察

專屬性試驗：取2.1.2項下3種溶液各10μL，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果表明，陰性對照品溶液對黃芩苷的測定無干擾，黃芩苷色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于2（見圖1）。

圖1　高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液2，4，8，10，16，20μL，按擬訂色譜條件進樣測定峰面積。以黃芩苷進樣量（C）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程A= 2 862 744C-185 583，r=0.999 8（n=6）。結(jié)果表明，黃芩苷進樣量在0.138～1.38μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，重復進樣6次，每次進樣10μL。結(jié)果的RSD=0.72%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：精密吸取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12 h時進樣測定。結(jié)果的RSD=0.79%（n=5），表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗：取樣品適量，平行制備5份供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果的RSD=0.98%（n=5），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取同一供試品6份，分別加入對照品適量，依法測定并計算回收率。結(jié)果平均回收率為99.43%，RSD=1.22%（n=6）。

2.2水提取工藝優(yōu)化［3-4］

正交試驗及結(jié)果：照處方比例稱取藥材，以提取液中的黃芩苷為考察指標，選取用水量（因素A）、煎煮時間（因素B）、煎煮次數(shù)（因素C）為考察因素，采用L9（34）正交表設計進行考察。因素水平見表1，試驗結(jié)果見表2。可見，各因素對提取效果均有影響，影響黃芩苷提取因素中C＞B＞A，最佳組合為A3B3C3，即用水量為14倍，煎煮3次，煎煮時間為80min；C因素對試驗結(jié)果有一定影響，B因素無影響，A2及A3差異較小，從生產(chǎn)中省時節(jié)能的角度考慮，用水量選擇12倍量煎煮3次，第1次80 min，第2、3次60min，即可。

表1　水提工藝優(yōu)化因素水平表

表2　水提工藝優(yōu)化L9（34）正交試驗設計與結(jié)果（n=3）

驗證試驗：按處方比例稱取藥材，分別采用最佳工藝條件和擬采用工藝條件提取，按擬訂色譜條件測定黃芩苷含量。結(jié)果見表3。可見，在鼻爽排毒顆粒選定提取工藝條件下，樣品中黃芩苷含量相近，表明選定的工藝條件穩(wěn)定、可行。

2.3醇沉工藝優(yōu)化

試驗方法與結(jié)果：采用水煎煮提取工藝，在滿足臨床需要的前提下，以最大限度提取藥物中的活性成分為目標，選擇適當?shù)拇汲翝舛取０刺幏奖壤Q取一定量飲片，按擬訂的提取工藝條件進行提取，趁熱濾過，濃縮至一定體積，分別以70%，80%，85%的醇沉濃度進行除雜，再取各上清液，測定黃芩苷含量。結(jié)果見表4。可見，醇沉濃度在70%時黃芩苷含量較高，故選擇水煎液濃縮至一定體積以70%的醇沉濃度進行醇沉，黃芩苷保留率和除雜效果明顯。

表3　水提取工藝驗證試驗結(jié)果

表4　不同醇沉濃度除雜效果比較

驗證試驗：取相對密度為1.15的藥液3份，分別加入一定量乙醇，使含醇量為70%進行醇沉。醇沉時邊攪拌邊緩慢加入乙醇，以避免藥液中局部乙醇濃度過高造成有效成分被沉淀物包裹造成損失。靜置24 h后，過濾，分別測定黃芩苷的保留率，并測定固形物重量計算固形物減少率。結(jié)果3次試驗的黃芩苷保留率分別為93.35%，93.42%，93.28%，固形物減少率分別為20.16%，20.44%，20.48%。可見，醇沉工藝驗證試驗結(jié)果與正交試驗篩選結(jié)果基本一致，表明該分離純化工藝條件穩(wěn)定可行，重復性好。

3　討論

為便于服用、保持原方療效，選擇將鼻爽排毒顆粒采用水提醇沉工藝進行提取。通過L9（34）正交試驗法優(yōu)化水提取工藝參數(shù)，并根據(jù)工業(yè)化生產(chǎn)的要求，對某些參數(shù)進行了改進；以黃芩苷含量為指標，對優(yōu)化參數(shù)與改進參數(shù)進行了驗證試驗。試驗結(jié)果表明，改進后的提取工藝測定黃芩苷的含量，與優(yōu)化參數(shù)結(jié)果相近，可滿足實際生產(chǎn)的需要。

中藥水提取物雜質(zhì)較多，如淀粉、果膠、樹脂、黏液質(zhì)、樹膠、蛋白質(zhì)、蠟質(zhì)等，常用的除雜方法有板框壓濾法、乙醇沉淀法、吸附澄清法、高速離心法等［5-11］。吸附澄清法近年來使用較多，其主要除去蛋白質(zhì)、蠟質(zhì)、淀粉等膠體不穩(wěn)定性成分，對中草藥中有效成分如黃酮、生物堿、皂苷類、萜類、多糖、氨基酸、多肽、維生素、礦物質(zhì)等無影響，但此法實際操作中工序多，加入澄清劑攪拌后仍需離心，成本較高。高速離心法是一種物理分離方法，分離程度與離心機轉(zhuǎn)速直接相關，轉(zhuǎn)速越高除去雜質(zhì)越多，但在大生產(chǎn)中藥液生產(chǎn)量大，單純用高速離心機離心除雜必然會增加資產(chǎn)投資。水提醇沉法是中藥口服制劑精制最常用的方法，能獲得較好的澄明度。

醇沉工藝試驗中，以醇沉前后黃芩苷的相對保留率作為指標，并綜合考慮固形物的減少量等綜合因素，確定了該復方制劑制備工藝中醇沉的最佳工藝條件。結(jié)果表明，該制劑采用水提取、乙醇沉淀方法穩(wěn)定可行，可用于該產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)。

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Optim ization of W ater Extract and Alcohol Precipitation Process of Bishuang Paidu Granules by Orthogonal Test

Yuan Jian
（The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，China 400010）

Objective To optimize the water extract and alcohol precipitation method of Bishuang Paidu Granules.M ethods The orthogonal test was adopted to inspect the influence of volume of water，extract time and extract frequency on the water extraction with the content of baicalin as the index；the influence of liquid alcohol concentration in the alcohol precipitation process with the retention rate of baicalin and decrement of solid mater as the index.Results The best optimizations of water extract and alcohol precipitation were adding 12 times water，boiled 3 times（the first time boiled 80 min，the second and third time 60 min respectively），the extract was concentrated to a relative density of 1.20，cooled，and added alcohol to make the alcohol content 70.00%，removed precipitate.Conclusion The optimized method of water extraction and alcohol precipitation process were stable，feasible and has good repeatability，and is suitable for industrial production.

Bishuang Paidu Granules；orthogonal test；baicalin；extraction process

TQ461；R286.0

A

1006-4931（2015）18-0059-03

2014-10-27；

2015-03-29）