氣相色譜法測定黃芪有機氯農藥的殘留量

王桂梅

奧測世紀（天津）技術有限公司 天津 301700

中藥的農藥殘留問題嚴重阻礙了我國中藥走向國際市場，建立有效的農藥殘留量測定方法是規范中藥材種植和管理的重要舉措。有機氯農藥使用歷史長，用量大，殘效期長，易積蓄，造成慢性中毒，對人體危害極大。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，味甘而性微溫，具有健脾補中、清熱燥濕、補氣固表、利水消腫、脫毒排膿、斂瘡生肌等功效，臨床應用廣泛。本文以2015年版《中國藥典》四部通則2341中第一法中第2部分的提取凈化方法，采用島津Inertcap5MS（0.25mm×30m，0.25μm）石英毛細管色譜柱，以電子捕獲檢測器對總六六六（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC）、 總 滴 滴 涕（p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT）和五氯硝基苯的檢測進行方法研究。

1 儀器與試藥

島津氣相色譜儀GC-2010Plus（配63Ni-ECD檢測器）；旋轉蒸發儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠）；圓形水浴氮吹儀Jipad-yx-24s（上海旌派儀器有限公司）；電子天平FA2204B（上海天美天平儀器有限公司）；離心機3K15（SIGMA）；移液器（100-1000μl）（力辰）

乙腈、環己烷、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、異辛烷均為色譜純；無水硫酸鎂、氯化鈉、無水硫酸鈉為分析純；純化水；BIOBeadsS-X3填料；弗羅里硅土固相萃取柱（1000mg；6ml）

標準物質：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT標 準 物 質 溶 液 各100μg/ml（帶有標準證書）

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱

島津Inertcap5MS(0.25mm×30m，0.25μm）；進樣口溫度250℃；檢測器溫度300℃；恒壓模式（87.5kPa）；不分流；進樣體積1μl；柱溫：80℃保持1min，15℃/min速度升溫至170℃，保持3min，10℃/min的速度升溫至220℃，保持2min，5℃/min速度升溫至240℃，保持1min，8℃/min速度升溫至280℃，保持10min。

2.2 標準溶液配制

（1）混合標準儲備液分別取α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT，五氯硝基苯標準物質溶液（100μg/ml）100μl置10ml容量瓶中，用異辛烷定容，得1.0μg/ml的混合標準溶液。

（2）標準曲線溶液配制分別取上述混合標準溶液1ml、1ml、100μl、100μl、100μl置 10ml、5ml、10ml、5ml、100ml中，用異辛烷定容，分別得濃度為0.1μg/ml、0.05μg/ml、0.01μg/ml、0.005μg/ml、0.001μg/ml混合標準物質溶液。

2.3 樣品預處理取樣品

粉碎成粉末（過三號篩），取約1.5g，精密稱定，置于50ml聚苯乙烯具塞離心管中，加入水10ml，混勻，放置2小時，精密加入乙腈15ml，劇烈振搖提取1分鐘，再加入預先稱好的無水硫酸鎂4g與氯化鈉1g的混合粉末，再次劇烈振搖1分鐘后，離心（4000轉/分鐘）1分鐘，精密吸取上清液10ml，40℃減壓濃縮至近干，用環己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液分次轉移至10ml量瓶中，加環己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液至刻度，搖勻，轉移至預先加入1g，無水硫酸鈉的離心管中，振搖，放置1小時，離心，取上清液5ml過凝膠滲透色譜柱（400mm×25mm，內裝BIO-BeadsS-X3填料；以環己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液為流動相；流速為每分鐘5.0ml）凈化，收集18-30分鐘的洗脫液，于40℃水浴減壓濃縮至近干，加少量正己烷替換兩次，加正己烷1ml使溶解，轉移至弗羅里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml，用正己烷-丙酮（95：5）混合溶液10ml和正己烷10ml預洗]上，殘渣用正己烷洗滌3次，每次1ml，洗液轉移至同一弗羅里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮（95：5）混合溶液10ml洗脫，收集全部洗脫液，置氮吹儀上吹至近干，加異辛烷定容至1ml，渦旋使溶解，即得[1-2]。

線性關系考察精密吸取2.2.2中5份混合標準溶液各1μl，注入氣相色譜儀，以峰面積f（x）為縱坐標，濃度（X）為橫坐標，繪制標準曲線，得到各對照品的回歸方程。各物質出峰情況見圖1，回歸方程結果見表1。

表1 9種農藥的回歸方程及相關系數

結果表明，9種農藥在本色譜條件下，分離度均大于1.5，且在0.001μg/ml-0.1μg/ml范圍內線性良好，將混合對照品溶液逐步稀釋，分別進樣測定，至信噪比S/N=3左右時的濃度定為檢出限，檢出限均在0.0005-0.008μg/ml。

精密度考察取混合標準溶液0.01μg/ml，連續進樣6次，各農藥的6次進樣的保留時間的相對標準偏差均小于0.56%，峰面積的相對標準偏差均小于3.2%。

加樣回收試驗取同一批粉碎過篩的黃芪10份，1份為樣品空白，每3份添加同一濃度混合標準溶液，分別加入濃度為0.01μg/ml的混合標準溶液300μl、600μl和濃度為0.05μg/ml的混合標準溶液600μl，按照2.3項下處理，每個樣品進樣2次，計算回收率。添加量為0.003μg的平均回收率為75.2%，RSD%為2.8%，添加量為0.006μg的平均回收率為80.6%，RSD%為2.1%，添加量為0.03μg的平均回收率為92.5%，RSD%為1.8%[3]。

3 結語

從上述研究可知，采用島津Inertcap5MS（0.25mm×30m，0.25μm）建立的色譜條件檢測黃芪中9中有機氯農殘，特異性良好，靈敏度高，線性檢測范圍寬，精密度和回收率良好，能夠準確檢測黃芪中9種有機氯農藥的的殘留量。