血清AFP、GP73水平檢測對非肝癌慢性HBV感染者的臨床價值

何 靜，王保龍，趙 亮，姜 徽，陳道俊

1.中國科技大學附屬第一醫院檢驗科，安徽合肥 230001；2.安徽醫科大學公共衛生學院，安徽合肥 230022

乙型肝炎病毒(HBV)感染是慢性乙型肝炎(CHB)肝硬化發生的主要原因。臨床上常用丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)等生化指標以及肝組織穿刺活檢來評價患者病情和指導用藥；但是，肝功能生化指標無法準確反映肝臟損傷狀態；肝組織活檢雖然是判斷肝臟壞死性炎癥及肝纖維化程度的“金標準”，但為有創操作并存在潛在出血風險，并未被廣泛推薦使用[1-2]。血清甲胎蛋白(AFP)是世界范圍內肝臟疾病應用最廣泛的經典標志物，但其靈敏度和特異度均不高[3]；高爾基體糖蛋白-73(GP73)與肝病的關系密切，在肝臟出現急、慢性炎性反應或肝纖維化時，GP73表達明顯上調[4-5]，可以作為CHB的有效監測指標,與AFP聯合檢測可以提高診斷效能[6]。國內外對這兩個指標在肝癌中的應用報道較多，而對在非肝癌慢性HBV感染者中的應用報道較少。本研究旨在探討這兩種血清標志物在非肝癌慢性HBV感染者不同疾病階段的水平特點，以及評價它們對CHB肝硬化失代償期的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年1月至2019年6月中國科技大學附屬第一醫院確診的157例慢性HBV感染者納入研究，排除慢性HBV感染所致肝病以外的其他良性肝病和惡性腫瘤患者。根據慢性HBV感染分類進行分組[7]：CHB肝硬化失代償期組40例，男29例、女11例，平均年齡(54.03±13.01)歲；CHB肝硬化代償期組44例，男27例、女17例，平均年齡(56.57±11.48)歲；CHB組43例，男27例、女16例，平均年齡(53.39±12.46)歲；HBV攜帶者組30例，男20例、女10例，平均年齡(52.89±11.39)歲。另外，選取該院同期的30體檢合格的健康者30例作為健康組，男19例、女11例，平均年齡(54.33±17.55)歲。5組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，納入研究者均知情同意并簽署知情同意書。CHB和肝硬化的診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標準[8]。通過詢問病史、實驗室和病理、影像學檢查(包括超聲、上腹部CT及磁共振)確診。HBV攜帶者是指沒有肝炎的癥狀和體征，乙肝表面抗原(HBsAg)陽性持續半年以上，肝功能指標正常的HBV感染者；肝硬化失代償期是指肝硬化發展到一定程度，超出肝功能的代償能力，臨床表現出肝功能減退和門靜脈高壓所致的癥狀和體征。

1.2方法 GP73檢測采用北京熱景公司UPT-3A上轉發光免疫分析儀及配套試劑；AFP檢測采用羅氏公司Cobas8000型全自動電化學發光儀及配套試劑；嚴格按照說明書操作。分離膠試管采集所有研究對象空腹外周靜脈血3 mL，室溫放置1 h，以3 800 r/min離心5 min分離血清，并盡量于3 h 內檢測；當天無法檢測的血清標本分離后保存在2～8 ℃冰箱中，次日檢測前于室溫靜置。結果判斷:(1)AFP≥7 ng/mL為陽性；(2)GP73≥150 ng/mL為陽性。

1.3統計學處理 采用SPSS18.0統計軟件進行數據分析。計量資料呈非正態分布，故采用M(P25～P75)表示，組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，多組間的兩兩比較采用Nemenyi檢驗；計數資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；P<0.05為差異有統計學意義。采用二元logistic回歸建立預測模型，引入標準為P<0.05，剔除標準為P>0.10，方法為Enter，從而產生多指標聯合預測概率這個新變量，以此作出受試者工作特征(ROC)曲線，得到曲線下面積(AUC)及95%置信區間(CI)，評價血清AFP、GP73對CHB肝硬失代償期的診斷價值。

2 結 果

2.1各組血清AFP、GP73檢測水平的比較 CHB肝硬化失代償期組血清AFP水平高于健康組(P<0.05)，與其余各組比較差異均無統計學意義(P>0.05)；各組間GP73水平兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清AFP、GP73檢測結果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.2血清AFP、GP73單項和聯合檢測用于CHB肝硬化失代償期的診斷 ROC曲線分析顯示，AFP、GP73聯合檢測的AUC大于單項檢測，見表2、圖1。AFP、GP73用于鑒別診斷的臨界值設定：AFP為9.90 ng/mL，GP73為66.36 ng/mL。

圖1 血清AFP與GP73單項和聯合檢測的ROC曲線分析

表2 AFP、GP73單項及聯合檢測用于肝硬化失代償期診斷的ROC曲線參數

2.3血清AFP和GP73單項及聯合檢測用于肝硬化失代償期診斷的靈敏度、特異度、準確度 見表3。

表3 單項或聯合檢測的部分診斷效能參數[%(n/n)]

3 討 論

肝硬化的病理基礎是肝纖維化，由于肝纖維化具有可逆性，因此對肝纖維化的早期檢出和準確評估有重要的臨床意義。特別是有部分慢性HBV感染者血清ALT水平在正常范圍，但是肝組織卻已經發生了明顯的炎癥和纖維化，若僅根據血清ALT水平作出判斷，將延誤抗病毒治療的時機[9]。AFP是一種糖原蛋白，來源于胚胎干細胞，可通過肝實質細胞以及卵黃囊細胞合成，在新生兒出生15 d之后AFP水平逐漸減少，最終由清蛋白替代，因此在成人體內AFP的水平很低[10]。本研究顯示，不同類型的HBV感染組間AFP水平無明顯差異，但均高于健康組。

GP73主要由膽管上皮細胞表達，而肝細胞表達很少甚至不表達，GP73的表達受炎性因子調控。在培養的肝細胞中，IFN-γ、IL-6能上調細胞內GP73水平，TNF-α能下調GP73表達[11]；在損傷的肝細胞中，GP73的表達明顯上調[12]，導致大量GP73分泌入血，乙型肝炎及肝硬化患者的肝臟組織中GP73表達水平比正常肝臟組織高70倍[13]。本研究中，血清GP73水平由低至高依次為HBV攜帶者組、CHB組、CHB肝硬化代償期組、CHB肝硬化失代償期組，GP73的水平隨著慢性HBV感染者的疾病進展以及纖維化程度加重而升高。CHB肝硬化失代償期組GP73中位數水平高達157.61 ng/mL；GP73單項檢測用于肝硬化失代償期診斷的特異度、準確度較高；AFP和GP73聯合檢測的AUC最大，兩項指標聯合檢測的特異度、準確度較高，與文獻[10，12]的報道一致。兩項指標聯合檢測可以提高診斷效能，這對于慢性HBV感染者病情進展的判斷具有參考價值，也有助于肝硬化失代償期的診斷。

綜上所述，血清AFP、GP73檢測，方法簡單、快速，血清GP73表達隨著肝纖維化程度加重而升高；兩者聯合檢測有助于慢性HBV感染者病情和CHB纖維化進程的判斷；未來還需要對血清GP73這一標志物進行更大樣本量的前瞻性研究,深入探討其生物學特征。