復合益生菌制劑在斷奶仔豬中的臨床應用

楊 嫡 ， 郭 亮 ， 夏 冰 ， 陳其名 ， 朱要宏 ， 王九峰

(中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院 ， 北京 海淀 100193)

斷奶仔豬腹瀉是目前困擾養(yǎng)豬業(yè)的一大難題，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。造成斷奶仔豬腹瀉的原因有多種，包括傳染性腹瀉、營養(yǎng)性腹瀉、生理性腹瀉和應激性腹瀉。因此，如何改善斷奶仔豬腹瀉，維持斷奶仔豬腸道微生態(tài)平衡，阻止病原菌入侵，增加腸道有益菌，減輕斷奶應激等因素造成的危害，已經(jīng)成為預防斷奶仔豬腹瀉的研究熱點[1]。

隨著抗生素在養(yǎng)豬行業(yè)的濫用，造成大量耐藥菌株的出現(xiàn)，嚴重影響動物源性食品安全，對動物和人體健康造成巨大威脅。2018年1月，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部“第2638號”公告指出[2]，停止在食品動物中使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥。因此，亟待開發(fā)新型抗生素替代品，目前常見的抗生素替代品有益生菌、益生元、酶制劑、酸化劑和植物提取物等，在生產(chǎn)實踐中常聯(lián)合使用。單種益生菌在臨床中有較多應用，如約氏乳桿菌，它可阻止致病菌粘附，調節(jié)腸道局部免疫應答，酸化腸道環(huán)境[3]。臨床中也常將枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌共同使用，它們作為兼性厭氧菌可抑制病原菌，有利于厭氧益生菌生長。目前尚無約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌聯(lián)合應用的研究報道。本試驗將從健康仔豬中分離到的豬源約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌制成復合益生菌制劑添加至基礎日糧中，觀察其對早期斷奶仔豬腹瀉率、生長性能及血清免疫球蛋白的影響，為日后復合益生菌制劑的臨床應用提供可供參考的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗益生菌 約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌為本實驗室分離自臨床健康的斷奶仔豬結腸內容物或糞便，制備為凍干菌粉后，按照以下劑量添加至基礎日糧中，約氏乳桿菌109CFU/kg、枯草芽孢桿菌106CFU/kg、地衣芽孢桿菌106CFU/kg。

1.2 試驗動物 本試驗于山東省聊城市大北農(nóng)種豬場進行，試驗動物為120頭21日齡斷奶的雜交仔豬(長白×大白)。按照初始體重均衡的原則對其進行分組，隨機分成2組，對照組和試驗組，各設3個重復組，20頭仔豬為1個重復組。對照組飼喂基礎日糧，試驗組飼喂添加有復合益生菌制劑的基礎日糧。試驗中所用基礎日糧為北京大北農(nóng)科技集團股份有限公司生產(chǎn)。對照組和試驗組同舍飼養(yǎng)，每個重復組的20頭仔豬飼養(yǎng)于一欄中，自由采食與飲水，試驗期共35 d。

1.3 腹瀉狀況及生產(chǎn)性能檢測 記錄每個重復組日采食量，每周稱重，計算平均日采食量、平均日增重、肉料比。每天觀察并記錄每個重復組斷奶仔豬的腹瀉情況，計算腹瀉率，方法為：

腹瀉頻率% = 腹瀉頭次÷(試豬頭數(shù)×試驗天數(shù))×100%

1.4 血液樣品采集 每周于各個重復組中隨機選擇4頭仔豬，前腔靜脈采血，采血量為5 mL，4 ℃靜置過夜，分離血清，-20 ℃保存。

1.5 血清免疫球蛋白檢測 將冷凍保存的血清樣品室溫下解凍，ELISA檢測免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)含量，檢測方法參照說明書進行，試劑盒購自北京雪杰特科技有限公司。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進行t檢驗分析，結果表示為平均值±標準誤，P<0.05為具有顯著性差異，P<0.01為具有極顯著性差異。

2 結果

2.1 復合益生菌對斷奶仔豬腹瀉的影響 由圖1可知，與對照組相比，試驗組第2周腹瀉率顯著降低(P=0.023)，而其他周次沒有顯著性差異(P>0.05)。

圖1 復合益生菌對斷奶仔豬腹瀉率的影響

2.2 復合益生菌對斷奶仔豬生長性能的影響 由表1可知，與對照組相比，試驗組體重增加0.65 kg(3.67%)，平均日增重增加19.6 g(6.84%)，肉料比升高0.05(8.33%)。復合益生菌制劑對仔豬體重、平均日增重和肉料比均沒有顯著性差異(P>0.05)。

表1 復合益生菌對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響

在增重方面，由圖2可知，試驗組第4周每頭平均體重顯著增加(P=0.018 6)，平均每頭日增重也顯著增加(P=0.025 7)。

圖2 復合益生菌對斷奶仔豬體重、日增重的影響

2.3 復合益生菌對斷奶仔豬免疫水平的影響 由圖3可知，與對照組相比，試驗組第3周血清IgM極顯著升高(P= 0.001 5)，而其他周次沒有顯著性差異。由圖4可知，與對照組相比，試驗組第3周血清IgG含量顯著升高(P= 0.026)，而其他周次沒有顯著性差異。由圖5可知，與對照組相比，試驗組試驗期內血清IgA含量無顯著性差異。

圖3 復合益生菌對斷奶仔豬血清IgM含量的影響

圖4 復合益生菌對斷奶仔豬血清IgG含量的影響

圖5 復合益生菌對斷奶仔豬血清IgA含量的影響

3 討論

仔豬斷奶后，由于受到飼料和環(huán)境等各方面的應激，容易導致嚴重的腹瀉。Zhang等研究發(fā)現(xiàn)，仔豬斷奶后，腸道菌群多樣性降低，乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌數(shù)量減少，腸桿菌和腸球菌等有害菌數(shù)量升高[4]，腸道對一些外源性或者內源性致病菌的抗性降低，最終導致斷奶仔豬腹瀉的發(fā)生。本試驗結果顯示，第2周時，與對照組相比，益生菌組腹瀉率降低61.54%。整個試驗周期內，第2周腹瀉發(fā)生率最高。本試驗結果與黃金華等[5]研究結果一致，服用混合益生菌制劑可以顯著降低斷奶仔豬引起的腹瀉。服用混合益生菌制劑能顯著降低斷奶仔豬引起的腹瀉率，可能是復合益生菌制劑有助于維持斷奶仔豬腸道內環(huán)境穩(wěn)態(tài)，抑制病原菌的繁殖，進而降低腹瀉率。

早期斷奶仔豬消化系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，胃腸道結構、pH值和消化酶濃度均有較大變化。胃酸分泌不足，導致胃中多種酶活力減弱，可能發(fā)生吸收不良[6]。此外，斷奶后的食物由流質的乳汁更換為固體飼料，極易造成仔豬對飼料中各種養(yǎng)分的消化利用率降低，生長性能發(fā)展緩慢。本試驗結果顯示，復合益生菌制劑對仔豬體重、平均日增重和肉料比均沒有顯著影響，但有升高仔豬體重、平均日增重和肉料比的趨勢。其中，第4周復合益生菌組體重及平均日增重明顯高于對照組，這可能與益生菌組的平均腹瀉率從第2周起逐漸降低有一定關系。本試驗結果與Lu等[7]的研究結果一致，斷奶后第21天，與對照組相比，2種不同益生菌復合制劑組均表現(xiàn)出體重、平均日增重顯著升高。本試驗所使用的乳酸桿菌能夠通過促進腸道蠕動，刺激腸道絨毛生長，增加隱窩深度及腸絨毛的長度，增加營養(yǎng)物質消化吸收的表面積[8]。另一方面，乳酸菌代謝產(chǎn)生的有機酸，如乳酸、乙酸、丙酸、檸檬酸等，不僅能降低胃腸道pH值，抑制、殺死腸道病原菌，調節(jié)腸道菌群平衡，同時還能提高胃腸道消化酶活性[9]。此外，芽孢桿菌能分泌多種消化酶，如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶等[10]，有利于斷奶仔豬生長。

仔豬斷奶后，母源抗體逐漸消失，使其本就發(fā)育不完全的免疫機能更易受到病原及各種應激的影響。本試驗結果顯示，第3周時，與對照組相比，試驗組的血清IgM含量極顯著升高92.41%，提示近期有感染；血清IgG含量顯著升高79.32%，提示機體調動體液免疫應答，正在對抗感染。試驗期內，試驗組的血清IgA含量與對照組相比無明顯差異。

本試驗研究結果與之前關于益生菌對斷奶仔豬免疫球蛋白含量影響的研究結果一致[11-12]。益生菌對斷奶仔豬腸道免疫調濟功能隨益生菌種類不同而有所區(qū)別，僅添加枯草芽孢桿菌的日糧，可以提高血清IgG、IgA的含量；僅添加約氏乳桿菌的日糧，則可以降低IgM含量。復合益生菌制劑的使用，各種益生菌間、益生菌與腸道原有菌群間可能存在相互作用，故試驗組免疫球蛋白水平的變化有所不同。

因此，研究益生菌對動物各方面的影響，需要綜合考慮動物種類、品種、營養(yǎng)、健康狀況、年齡、飼養(yǎng)管理條件及環(huán)境、日糧的成分、抗生素影響、益生菌的種類、活力、劑量及飼喂方式等。為改善早期斷奶仔豬腹瀉選擇合適的復合益生菌制劑，還需要更深入研究。

4 結論

日糧中添加約氏乳桿菌、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌復合制劑可有效降低斷奶仔豬腹瀉率，提高生長性能和機體免疫力。