LASP1、GSTA3在鼻咽癌組織中的表達及與復發(fā)、轉移的關系

杜偉一 陳淑蓮 李國強

鼻咽癌是十大惡性腫瘤之一，發(fā)病率較高［1］。由于鼻咽解剖位置復雜，不易行手術治療，且其非角化型癌組織的特性，決定了放化療是其主要治療方案，但治療后復發(fā)率較高，加之鼻咽周圍比鄰較多重要組織器官，癌細胞易直接侵犯周圍軟組織，并經血液學途經播散發(fā)生遠隔部位轉移，影響患者預后，因此深入研究鼻咽癌分子水平復發(fā)、轉移的機制意義重大［2］。LIM和SH3蛋白1（LIM and SH3protein 1，LASP1）是新近發(fā)現(xiàn)的一種肌動蛋白結合蛋白和斑粘連結合蛋白支架蛋白，在乳腺癌、胰腺癌等惡性腫瘤中過度表達，并與腫瘤發(fā)生進展有關，故推測可能在鼻咽癌中亦起到一定作用［3-4］。谷胱甘肽硫轉移酶A3（Glutathione-STransferase A3，GSTA3）是一種抗氧化酶，能通過抑制微粒體過氧化反應、修復自由基引起的膜磷脂損傷等途徑發(fā)揮抗氧化作用，近年來發(fā)現(xiàn)，GSTA3與前列腺癌、胃癌的發(fā)生息息相關，但在鼻咽癌領域的研究較少，是否與鼻咽癌復發(fā)、轉移有關仍有待驗證［5-6］。鑒于此本研究分析LASP1、GSTA3的表達及與復發(fā)、轉移的關系，報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2012年9月至2016年5月收治的鼻咽癌患者117例作為研究對象進行前瞻性研究，其中女57例，男60例；年齡19～72歲，平均（42.68±11.75）歲；體質量指數20～26 kg/m2，平均（22.29±1.10）kg/m2；腫瘤T分期為Ⅲ期86例，Ⅳ期31例。本研究患者均對研究內容知情，自愿簽署知情同意書。

納入標準：①符合鼻咽癌診斷標準［7］；②組織活檢首次確診；③腫瘤T分期為Ⅲ或Ⅳ期；④電解質、心電圖、肝腎功能無明顯異常；⑤入組前未接受過放療等相關治療；⑥能配合隨訪；年齡≥18歲。排除標準：①合并其他系統(tǒng)原發(fā)性惡性腫瘤者；②入組前1個月有骨折、大型手術史、創(chuàng)傷者；③因各種原因脫落、失訪者；妊娠期、哺乳期患者；④有精神病、認知功能障礙者。

1.2 方法

1.2.1 癌組織LASP1、GSTA3檢測

①主要試劑、儀器：紫外分析儀（北京君意東方電泳設備有限公司JY02S型）；電熱恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表有限公司HW-SY11-K P2型）；實時熒光定量PCR儀（美國ABI公司QuantStudio 6型）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司DHG 9203A型）；PCR試劑盒（美國genecopoeia公司）；引物合成（北京擎科生物科技有限公司）。②檢測方法：采用實時熒光定量PCR檢測LASP1、GSTA3mRNA，Trizol法提取RNA，逆轉錄反應逆轉錄成cDNA，取上述cDNA 4μL，加入上下游引物各0.4μL、SYBR Green（熒光插入染料）/熒光素qPCR預混液10μL、水5.2μL，進行實時熒光定量PCR，反應條件50℃2 min，95℃10 min；95℃30 sec，60℃30 sec，40 cycles，最終數據以2-△△Ct進行分析。

1.2.2 治療方案

入組者均接受順鉑+紫杉醇誘導化療3個周期，之后均行3個周期同期放化療。①誘導化療方法：順鉑（廣東嶺南制藥有限公司，國藥準字H20183341）75 mg/m2，d 1～3，靜滴；紫杉醇（齊魯制藥（海南）有限公司，國藥準字H20193309）135 mg/m2，d 1，21 d為一個化療周期，共3個周期；②放療方法：采用三維調強適形放療技術，1次/d，每周5次為1個周期。③同期化療方法：順鉑100 mg/m2，d 1～3，共3個周期。

1.3 觀察指標

比較癌組織、正常癌旁組織中LASP1、GSTA3mRNA。比較不同臨床特征患者癌組織中LASP1、GSTA3mRNA。分析LASP1mRNA與GSTA3mRNA相關性。分析LASP1、GSTA3 mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移的關系。分析復發(fā)與轉移鼻咽癌患者無進展生存期（PFS）。分析LASP1、GSTA3mRNA與PFS相關性。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據處理，計量資料以（）表示、t檢驗，非正態(tài)分布資料（PFS）采用中位數表示，采用非參數秩和檢驗（Wilcoxon），計數資料用n（%）表示、χ2檢驗，采用Logistic多元回歸方程分析LASP1、GSTA3mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移的關系，采用卡普蘭-邁耶曲線（Kaplan-Meier，KM）生存曲線分析、Log Rank（Mantel-Cox）檢驗LASP1、GSTA3mRNA高危者、低危者生存曲線，采用Pearson分析LASP1、GSTA3mRNA與PFS相關性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 癌組織、癌旁組織中LASP1、GSTA3 mRNA

癌組織中LASP1 mRNA高于正常癌旁組織，GSTA3mRNA低于正常癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。癌組織中LASP1蛋白表達高于正常癌旁組織，GSTA3蛋白表達低于正常癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖1。

表1 兩組中LASP1、GSTA3 mRNA比較（±s）Table 1 Comparison of LASP1 and GSTA3 mRNA in cancer of 2 groups（±s）

表1 兩組中LASP1、GSTA3 mRNA比較（±s）Table 1 Comparison of LASP1 and GSTA3 mRNA in cancer of 2 groups（±s）

組別癌組織正常癌旁組織t值P值n 117 117 LASP1 mRNA 0.12±0.03 0.03±0.01 30.785＜0.001 GSTA3 mRNA 0.11±0.03 0.24±0.07 18.464＜0.001

2.2 不同臨床特征患者癌組織中LASP1、GSTA3 mRNA

復發(fā)、轉移、低分化、Ⅳ期鼻咽癌患者LASP1mRNA高于未復發(fā)、轉移、中高分化、Ⅲ期患者，GSTA3mRNA低于未復發(fā)、轉移、中高分化、Ⅲ期患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

圖1 癌組織、正常癌旁組織中LASP1、GSTA3蛋白表達（×300）Figer 1 Expression of lasp1 and gsta3 proteins in cancer tissues and normal adjacent tissues（×300）

表2 不同臨床特征患者癌組織中LASP1、GSTA3 mRNA比較（±s）Table 2 Comparison of LASP1 and GSTA3 mRNA in cancer tissues of patients with different clinical characteristics（±s）

表2 不同臨床特征患者癌組織中LASP1、GSTA3 mRNA比較（±s）Table 2 Comparison of LASP1 and GSTA3 mRNA in cancer tissues of patients with different clinical characteristics（±s）

臨床特征復發(fā)情況轉移情況分化程度復發(fā)未復發(fā)轉移未轉移低分化中高分化臨床分期Ⅲ期Ⅳ期n 32 85 28 89 42 75 46 71 LASP1 mRNA 0.15±0.04 0.11±0.03 0.17±0.05 0.10±0.02 0.16±0.04 0.10±0.03 0.08±0.02 0.15±0.04 t值5.845 10.810 9.182 11.000 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001 GSTA3 mRNA 0.09±0.02 0.12±0.03 0.08±0.02 0.12±0.04 0.07±0.02 0.13±0.03 0.16±0.05 0.08±0.02 t值5.229 5.084 11.588 12.093 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.3 LASP1、GSTA3 mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移的關系

Logistic回歸分析，LASP1、GSTA3mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移顯著相關，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 LASP1、GSTA3 mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移的關系Table 3 Relationship between LASP1，GSTA3 mRNA and recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma

2.4 復發(fā)與轉移鼻咽癌患者PFS

Kaplan-Meier曲線分析，復發(fā)鼻咽癌患者PFS為31.17個月，未復發(fā)鼻咽癌患者PFS為38.26個月，轉移鼻咽癌患者PFS為8.72個月，未轉移鼻咽癌患者PFS為41.12個月。根據復發(fā)與轉移鼻咽癌患者LASP1、GSTA3mRNA表達均數為界，分為高表達者、低表達者。Kaplan-Meier曲線分析，復發(fā)與轉移鼻咽癌患者LASP1mRNA高表達者PFS（28.74個月、7.13個月）短于低表達者（35.22個月、12.70個月），GSTA3mRNA高表達者PFS（35.71個月、12.24個月）長于低表達者（27.83個月、6.44個月）（P＜0.05）。見圖1。

圖1 生存曲線Figure 1 Survival curve

2.5 LASP1、GSTA3 mRNA與PFS相關性

Pearson相關性分析，LASP1mRNA與PFS呈負相關，GSTA3mRNA與PFS呈正相關（r1=0.442，r2=0.501，P＜0.001）（P＜0.05），圖2。

圖2 LASP1、GSTA3 mRNA與復發(fā)、轉移鼻咽癌患者PFS相關性Figure 2 Correlation between LASP1 and GSTA3 mRNA and PFSin patients with relapsed or metastatic nasopharyngeal carcinoma

3 討論

我國是鼻咽癌高發(fā)地區(qū)之一，現(xiàn)有放化療綜合干預模式下，局部復發(fā)與遠處轉移是治療失敗的主要原因，因此積極探尋鼻咽癌復發(fā)、轉移相關重要分子，為臨床提供新的作用靶點，對藥物研發(fā)、深入了解癌細胞惡性生物學行為等至關重要［8］。

LASP1定位于染色體17q21區(qū)域，存在于偽足、黏著斑等周圍，含有兩段伴肌動蛋白樣重復序列，能通過結合黏著斑蛋白Kip1，調控細胞黏附、偽足延伸及細胞運動［9-10］。本研究發(fā)現(xiàn)，LASP1與鼻咽癌發(fā)生有關，并對腫瘤復發(fā)、轉移起到促進作用，可影響患兒PFS。余俊等［11］報道發(fā)現(xiàn)，子宮內膜癌組織中LASP1蛋白陽性表達率高于正常人群，與肌層浸潤和淋巴結轉移有關，本研究觀點與之相似。在肝癌中，上調LASP1表達促進了肝細胞在體外和體內的增殖、遷移和侵襲［12］。在口腔鱗狀細胞癌細胞中，通過慢病毒構建LASP1沉默模型，發(fā)現(xiàn)口腔鱗狀細胞癌細胞系的增殖、轉移和侵襲受到抑制，并能將細胞阻滯在G2/M周期，而LASP1過表達可減弱微小RNA-342-3p對口腔鱗狀細胞增殖的抑制作用［13］。關于LASP1參與惡性腫瘤生物學行為的機制尚未完全闡明，結合資料推測，LASP1能通過激活PI3K/AKT通路調控癌細胞增殖、轉移，并影響患者預后［14］。亦有觀點指出，LASP1還能通過影響腫瘤對化療的敏感性促進腫瘤的復發(fā)、轉移［15］。

鼻咽癌的發(fā)生是遺傳、環(huán)境、病毒感染等多種因素相關作用的結果，不同個體對病毒感染、環(huán)境中有害物質、致癌物解毒能力的異質性，影響了個體對鼻咽癌的易感性。GSTA3是谷胱甘肽硫轉移酶家族成員之一，是體內生物轉化Ⅱ結合反應中重要的代謝酶，擁有防止脂質過氧化損傷擴大、修復DNA損傷等多種生物學功能，參與機體的解毒。本研究發(fā)現(xiàn)，GSTA3轉錄水平在鼻咽癌發(fā)生中扮演了抑癌因子角色，可能對鼻咽癌復發(fā)、轉移起到抑制作用S。GSTA3mRNA與鼻咽癌復發(fā)、轉移顯著相關，證實GSTA3在鼻咽癌復發(fā)、轉移中起到保護作用。但遺憾的是，現(xiàn)階段尚不清楚GSTA3調控鼻咽癌復發(fā)、轉移的分子機制，仍需更多基礎實驗和臨床研究的探索，這亦是本研究不足所在。

綜上所述，在鼻咽癌組織中，LASP1表達升高，GSTA3表達降低，對腫瘤復發(fā)、轉移分別起到正負調節(jié)作用，并與PFS有關。