發光二極管照射對大鼠高糖視網膜血管內皮細胞的光生物調節作用及其機制

張鳳久，張麗敏，王宏杰，李海波，王海明，彭向東，楊建玲

0引言

在臨床中，糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)是致盲的主要疾病[1]。為此，研究DR的發病機制、預后治療手段等，成為臨床普遍關注的重點。該疾病的發病機制較為復雜，影響因素較多。現階段，在醫學技術發展的新形勢下，細胞學分析疾病的發病機制，已成為臨床研究熱點[2-3]。光生物調節作用，借助低強度淡色光、激光等，對組織或是細胞具有非損傷的調節性作用。目前發光二極管(light emitting diode，LED)作為一種新型光源在醫療領域應用迅速發展，一定功率和能量密度的LED照射能激活靶細胞，發揮與相干光源類似的生物學效應。基于此，本研究為了明確LED對大鼠高糖視網膜血管內皮細胞的光生物調節作用，加以探究。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1細胞來源原代大鼠視網膜血管內皮細胞(美國Angio-proteomie公司)購自博士德生物科技有限公司。

1.1.2主要試劑及儀器胎牛血清、D-Hanks液、胰蛋白酶、兔抗大鼠β-actin單克隆抗體、兔抗大鼠p-Akt單克隆抗體、HRP標記山羊抗兔IgG二抗(美國Sigma公司)及其相關配套試劑、細胞凋亡試劑盒及其相關配套試劑、流式細胞儀、激光掃描共焦顯微鏡(美國DB公司)。

1.2方法

1.2.1細胞培養及分組原代大鼠視網膜血管內皮細胞在培養瓶中培養48h后傳代培養，以5×105/mL的密度接種于24孔細胞培養板中，培養時間為24h，細胞貼壁后使用無血清培養液。繼續培養24h。根據實驗方案分組：正常對照組、高糖模型組、發光二極管照射高糖組。各組均避光靜置于培養箱內。高糖細胞模型組培養基葡萄糖濃度及干預時間采用我們前期研究的結果：25mmol/L葡萄糖濃度干預48h[4]。……