高效液相色譜法測定黃瓜果實中6-芐基腺嘌呤殘留量

2020-08-07 10:17:56袁曉轉洛陽市食品藥品檢驗所

食品安全導刊 2020年15期

□ 袁曉轉洛陽市食品藥品檢驗所

芐基腺嘌呤（6—BA）是一種植物生長調節劑，屬于人工合成細胞分裂素，在水果、蔬菜的保鮮等方面有重要應用。6—BA 在黃瓜種子發芽、幼苗幼果生長等過程中也有應用，可促進黃瓜果實生長發育，提高果實品質和產量[1—2]。但6—BA 具有一定毒性，人體過量攝入會刺激皮膚黏膜，出現食道和胃黏膜損傷、惡心、嘔吐等癥狀[3]。

因此檢測黃瓜果實中6—BA 殘留量很有必要，蔬菜中6—BA 的檢測主要有高效液相色譜法和高效液相色譜—質譜法等方法[4—5]。本試驗利用甲醇提取，固相萃取柱凈化，高效液相色譜—標準曲線外標法定量，操作簡便、準確性好，可用于黃瓜果實中6—BA 殘留量的測定。

1 材料與方法

1.1 試劑耗材與儀器

6—芐基腺嘌呤標準品（98.51%，Dr.Ehrenstorfer）；甲醇（色譜級，Dikma）；乙酸銨（色譜級，科密歐）；冰乙酸（分析純，開封化學試劑總廠）；C18固相萃取柱（1 g/6 mL，上海安譜實驗科技股份有限公司）。

U3000 高效液相色譜儀（Thermo）；BSA224S—CW 電子天平（賽多利斯）；3K15 高速冷凍離心機（Sigma）；旋轉蒸發儀（IKA）；KQ—400DE 數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JYL—Y85 高速破壁調理機（九陽）。

1.2 儀器條件

色譜柱：XBridge?C18柱，4.6 mm×250 mm×5 μm（waters）；檢測器：紫外檢測器；波長：267 nm；流動相：甲醇+乙酸銨溶液（0.02 mol/L）=50+50；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL。

1.3 標準溶液的配制

準確稱取6—BA 標準品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至100 mL，混勻，即得濃度為100 μg/mL 的溶液。分別精密量取100 μg/mL 溶液10.0、5.0 mL和2.0 mL，用甲醇定容至100 mL，即得濃度分別為10.0、5.0 μg/mL 和2.0 μg/mL 的標準儲備溶液。

分別精密量取2.0 μg/mL 的標準儲備溶液5.0、2.0、1.0、5.0 mL 和2.0 mL，用甲醇定容至10、10、10、100 mL 和100 mL，即得濃度分別為1.0、0.4、0.2、0.1μg/mL和0.04 μg/mL的標準溶液。

1.4 樣品的制備和測定

稱取10 g（精確到0.001 g）均質后的樣品于50 mL 離心管中，加20 mL甲醇，超聲提取15 min，以10 000 r/min離心10 min，上清液轉入200 mL 梨形瓶中，樣品再次用20 mL 甲醇超聲提取15 min，離心合并上清液，于50 ℃旋轉蒸發至盡干，殘液以2 mL/min的流速過預先活化好的固相萃取柱，用少量水洗滌梨形瓶，洗液過固相萃取柱，再用5 mL 水洗滌固相萃取柱，去除雜質后用甲醇洗脫并定容至5 mL，混勻后過0.22 μm 微孔濾膜，供檢測用。

2 結果與分析

2.1 色譜圖

將樣品按照“1.2 儀器條件”進樣檢測，所得圖譜如圖1 所示，在目標物時間附近不出峰，為陰性樣品。將標準儲備液按照“1.2 儀器條件”進樣檢測，目標物在7.490 min 出峰，見圖2。

圖1 陰性樣品色譜圖

圖2 標準儲備溶液（1.989 8 μg/mL）色譜圖

2.2 線性范圍和檢出限、定量限

選取濃度為0.04、0.1、02、0.4、1.0、2.0、5.0 μg/mL 與10.0 μg/mL 的6—BA標準溶液，按“1.2 儀器條件”進樣測峰面積，繪制標準曲線，進行線性分析，結果表明該方法在0.04～10.0 μg/mL線性范圍內線性良好，見表1。檢出限定量限的確定方法：向陰性樣品中加入從低到高不同濃度的標準溶液進行測定，以3 倍和10 倍信噪比（S/N）對應的6—BA 濃度作為檢出限和定量限。