恒溫擴增HPV檢測技術對子宮頸癌的篩查作用

魏偉華，劉新海，丘創華

1.廣東省深圳市龍崗區第三人民醫院檢驗科，廣東深圳518115；2.廣東省深圳市第二人民醫院檢驗科，廣東深圳518035

宮頸癌為婦科常見惡性腫瘤，可嚴重危害女性身體健康，需引起臨床重視。宮頸癌發生及發展較為漫長，從癌前病變發展至宮頸癌可需10～20年左右，期間采取有效手段對患者進行篩查及干預，可有效阻斷癌前病變發展為宮頸癌，降低宮頸癌發病率及患者病死率[1]。目前臨床對宮頸癌多采用細胞學技術檢查，但其對技術及人員要求較高，在衛生資源有限的地區難以推廣[2]。大量研究顯示[3]，人乳頭瘤病毒（HPV）為宮頸癌發生的必要條件，超過99.0%的宮頸癌患者可檢測到HPV DNA，而HPV檢測結果呈陰性者幾乎不會發生宮頸癌，因此HPV檢測技術在宮頸癌篩查中具有較高應用價值。該研究選取2017年6月—2018年7月該院收治的1 000名女性為研究對象，將Isotncga用于子宮頸癌檢查中，旨在評價其篩查作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取進行宮頸癌篩查1 500名女性，年齡29～63歲，平均（46.78±2.78）歲。納入標準：患者均宮頸完整，均有性生活史；所有患者均無盆腔放射治療史、子宮切除史或手術史，所有患者均對該研究知情，且簽訂同意書，并通過醫院倫理委員會的批準。排除標準：妊娠期或哺乳期女性；有檢查禁忌證狀者；對研究不同意者。

1.2 方法

所有患者均行Isotncga檢查，檢查前3 d不進行陰道沖洗，不應用陰道內藥物，檢查24 h內囑患者嚴禁性生活，于月經期結束后3～7 d檢查。以宮頸細胞采樣刷收集宮頸脫落細胞，并保存于PreserCyt細胞保存液內，對細胞保存液內標本行預處理，對粘液、炎癥細胞及血液與上皮細胞進行分離，制成薄層細胞涂片，以95%酒精固定后行巴氏染色。吸取1 mL標本高速離心10 min，取上清液后加入裂解液100μL，將其充分搖勻。將標本置入干濕恒溫器（杭州奧盛）內以95℃的溫度對其進行加熱，時間15 min。取2μL處理好的標本放入反應液內，并加入陰性及陽性質控。放置反應管于熒光定量PCR檢測系統內，將恒溫反應程序設置為60℃、75 min。應用人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法）對標本進行檢測，嚴格按照說明書操作。分離提取DNA，隨后應用熒光定量PCR擴增儀進行擴增。

病理學檢查：將HPV檢測呈陽性的女性行進一步陰道鏡下可疑部位多點活檢，于月經干凈后行常規陰道鏡檢查，鏡下仔細觀察宮頸病灶形態、邊界、血管、表面構型、顏色等征象，對病變最嚴重的部位行多點活檢，若檢查無異常現象，則取移行帶第3、6、9、12點。病理檢查結果分為慢性宮頸炎、輕度不典型增生（CINⅠ）、中度不典型增生（CINⅡ）、重度不典型增生（CINⅢ）、鱗狀細胞癌（SCC）。

1.3 觀察指標

對HPV分型檢測結果進行觀察，觀察不同年齡段女性HPV陽性率差異，將病理診斷結果作為金標準，與HPV-DNA檢測結果進行比較。陰性判定標準：標本在熒光檢測通道擴增過程中，無明顯指數增長的熒光信號，內參在VIC熒光檢測通道循環制≤65 min。陽性判定標準：內參在熒光通道擴增過程中有或無明顯呈指數增長的熒光信號。

1.4 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用百分比（%）表示，進行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV分型檢測結果分析

該組1 000名行宮頸癌篩查的女性，HPV DNA檢測出危險患者251名，檢出率為25.10%，見表1。

表1 HPV分型檢測結果分析Table 1 Analysis of HPV typing test results

2.2 不同年齡段HPV陽性率分析

30～39歲、40～49歲、50～59歲、＞60歲各年齡段HPV陽性率分別為26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49歲HPV陽性率最高，與其他各年齡段相比，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2不同年齡段HPV陽性率分析Table 2 HPV positive rate analysis of different ages

2.3 HPV檢測技術與病理檢查結果比較

HPV檢測技術檢出慢性宮頸炎102例、CINⅠ52例、CINⅡ41例、CINⅢ29例、SCC27例，與病理檢查結果相比，差異無統計學意義（P＞0.05），見表3。

3 討論

宮頸癌為臨床常見的一種惡性腫瘤，多項研究[4-5]表示該病發病病因與HPV感染相關，HPV-DNA檢測為直接針對病因的檢查手段，可有效對HPV感染女性進行篩查，及時發現并采取適當措施干預，利于降低宮頸癌發病風險，降低患者病死率。WHO指出，可將HPV-DNA檢測作為宮頸癌早期篩查方法，其中16、18型為引發宮頸癌常見的類型，約76.58%的宮頸鱗癌可檢測出HPV16，而7.51%可檢測出18型[6]。我國臨床宮頸癌篩選指南指出，對HPV檢測為16、18型的患者需轉診陰道鏡，其他感染患者不需轉診，只需定期復查[7]。理想的宮頸癌篩查手段需滿足價格實惠、操作可行等需求，還需單獨提供16、18型信息及其他高危型檢測結果及內參檢測信息，利于提升宮頸癌篩查效率，為臨床診治提供有力依據。

表3 HPV陽性與病理檢查結果比較[n（%）]Table 3 Comparison of HPV positive and pathological examination results[n(%)]

以PCR為基礎的HPV分型檢測技術為臨床篩查宮頸癌的主要手段，敏感性較高，在臨床應用廣泛，但其需反復熱變性，要求設備精良，且操作過程中容易被污染，擴增反應時間較長，存在一定局限性。Isotncga檢測技術為一種新型體外核酸擴增技術，具有高效、恒溫、高特異性等優點，且不用借助精良昂貴的設備儀器，在臨床逐漸應用廣泛[8]。Isotncga為基于恒溫DNA擴增原理的檢查技術，為DNA提取、擴增一體化，可對HPV 16、18型進行特異性區分[9]。Isotncga取材方便，不僅可對已明確出現宮頸病變的女性進行檢測，還可對可能患病的女性進行預測，便于臨床盡早采取手段干預，阻斷癌前病變發展為宮頸癌，降低患者患病率及病死率[10-12]。該次研究結果顯示，30～39歲、40～49歲、50～59歲、＞60歲各年齡段HPV陽性率分別為26.92%、40.75%、25.87%、5.37%，其中40～49歲HPV陽性率最高，＞60歲年齡段HPV陽性率發病率最低，這與曹慧玲等[13]學者在相關研究中得出，在對女性宮頸癌的篩查過程中發現，各個年齡段中HPV陽性率發病率為30～39歲25.14%、40～49歲39.66%、50～59歲24.38%、＞60歲5.05%，最高發病率年齡段是40～49歲，與該文所得結果相近。HPV-DNA檢測慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC與病理檢查結果相比差異無統計學意義（P＞0.05），提示Isotncga在宮頸癌篩查中具有較高應用價值，可獲得與病理診斷等同的結果。

綜上所述，恒溫擴增HPV檢測技術在子宮頸癌中篩查作用理想，具有較高陽性率。