基質(zhì)金屬蛋白酶-2在非小細(xì)胞肺癌血清及組織中的表達(dá)

田鳳霞

（河北省灤州市人民醫(yī)院，河北 唐山）

0 引言

為更深入了解MMP-2在非小細(xì)胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer, NSCLC）的血清、組織當(dāng)中的具體表達(dá)以及臨床引導(dǎo)價(jià)值[1]，通過不同手段對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，通過歸納非小細(xì)胞肺癌患者的血清以及癌組織當(dāng)中的MMP-2表達(dá)情況，分析該指標(biāo)對(duì)于轉(zhuǎn)移評(píng)估、預(yù)后質(zhì)量判斷的關(guān)聯(lián)性[2]，希望能為臨床收治非小細(xì)胞肺癌患者的治療方案制定提供可靠數(shù)據(jù)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017～2019年在本院接受診治的非小細(xì)胞肺癌患者且符合選擇標(biāo)準(zhǔn)群體的為分析對(duì)象，在其中隨機(jī)抽取85例設(shè)為觀察組，該組所有患者均接受手術(shù)或者支氣管鏡確診病情，在本次研究前患者并無接受放療、化療、免疫治療等方案控制病情。納入患者中男女所占例數(shù)分別為69例、16例；年齡 43～80歲，平均（61.31±3.14）歲；腫瘤類型中鱗癌與腺癌例數(shù)分別為48例、37例；有64例患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。對(duì)患者應(yīng)用1997年國際抗癌協(xié)會(huì)相關(guān)腫瘤臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，如下：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例數(shù)對(duì)應(yīng)為15例、29例、26例、15例。另隨機(jī)在同期就診確診為肺良性病變患者群體中抽取20例設(shè)為對(duì)照組，男女所占例數(shù)分別為15例、5例；年齡42～79歲，平均（60.57±2.77）歲。兩組患者在性別、年齡等基本數(shù)據(jù)分布方面經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理后提示并無顯著差異（P＞0.05），可做對(duì)比。

1.2 方法

所有研究對(duì)象受檢前10～12 h禁食，術(shù)前1 d、術(shù)后10 d于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘靜脈血量為3 mL，用3000 r/min速度做離心處理，時(shí)間為10 min，分離所得新鮮血清并放置于-80 ℃環(huán)境中保存?zhèn)溆谩?/p>

本次研究所用主要試劑如下：MMP-2ELISA試劑盒、鼠抗人MMP-2單克隆抗體，相關(guān)免疫組化試劑盒。

實(shí)驗(yàn)操作方法具體如下：分別在觀察組患者手術(shù)治療前后對(duì)其血清當(dāng)中的MMP-2指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)試劑盒說明說嚴(yán)格操作ELISA檢驗(yàn)法。完成血清的收集后在96孔板當(dāng)中加入稀釋液，加樣，孵化，時(shí)間為2 h，使用緩沖液清洗后加入MMP-2結(jié)合物，再加入底物以及終止液，應(yīng)用酶標(biāo)儀檢測(cè)并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)[3]。

將兩組患者的手術(shù)切除病理組織使用石蠟包埋塊，常規(guī)完成脫蠟以及水化處理，加入3%雙氧水后微波抗原修復(fù)，10%正常羊血清封閉[4]。滴入比例為1:200的MMP-2抗體，放置于4 ℃環(huán)境中過夜，再滴加辣根過氧化酶標(biāo)記兔抗鼠IgG，放置在37 ℃環(huán)境中1 h，輔以DAB達(dá)到顯色效果，然后對(duì)其應(yīng)用蘇木素復(fù)染，透明樹膠封片，陰性對(duì)照物使用PBS代替，對(duì)照片進(jìn)行同步操作以得到陽性。

1.3 免疫組化判斷依據(jù)

MMP-2陽性細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞膜或者是胞漿經(jīng)復(fù)染后成為了棕黃色，使用高倍鏡輔助所得視野之下對(duì)4個(gè)不同的視野進(jìn)行觀察，在所有視野當(dāng)中對(duì)200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)觀察，其中判定依據(jù)如下：（-）為無存在陽性細(xì)胞，（+）提示陽性細(xì)胞所占比例不足30%，（++）提示陽性細(xì)胞所占比例在30%～50%，（+++）提示陽性細(xì)胞所占比例超過50%，其中（++）、（+++）為陽性表達(dá)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 20.0處理此次研究數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料由卡方檢驗(yàn)，輸出顯示為（%）；計(jì)量資料使用t檢驗(yàn)，以（±s）的形式描述，P＜0.05說明計(jì)數(shù)/計(jì)量數(shù)據(jù)間差異大，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中MMP-2表達(dá)情況

術(shù)前觀察組患者血清MMP-2檢測(cè)所得數(shù)據(jù)顯著高于對(duì)照組，術(shù)后觀察組患者血清MMP-2檢測(cè)所得數(shù)據(jù)與對(duì)照組無明顯差異，詳情請(qǐng)見表1。

表1 兩組納入研究對(duì)象患者血清MMP-2指標(biāo)比較（±s, ng/mL）

表1 兩組納入研究對(duì)象患者血清MMP-2指標(biāo)比較（±s, ng/mL）

組別 例數(shù) 水平指標(biāo)對(duì)照組 20 242.15±30.44觀察組術(shù)前 85 529.24±57.15觀察組術(shù)后 85 260.44±24.22

2.2 基線數(shù)據(jù)對(duì)MMP-2表達(dá)影響

觀察組患者的腫瘤直徑、腫瘤類型、腫瘤分期、淋巴結(jié)是否出現(xiàn)轉(zhuǎn)移等對(duì)MMP-2有明顯影響，詳情請(qǐng)見表2。

表2 非小細(xì)胞癌患者基線數(shù)據(jù)與MMP-2表達(dá)情況比較（±s, ng/mL）

表2 非小細(xì)胞癌患者基線數(shù)據(jù)與MMP-2表達(dá)情況比較（±s, ng/mL）

項(xiàng)目 例數(shù) MMP-2性別 男 69 529.32±59.41女16 528.88±47.87年齡（歲） ≤50 32 539.31±60.51＞50 53 523.14±54.73腫瘤直徑（cm） ≤3 61 514.24±55.14＞3 24 567.34±43.45病理類型 鱗癌 48 515.82±58.83腺癌 37 550.48±47.80分化程度 高-中 63 532.32±55.34低22 520.31±62.62腫瘤分期 Ⅰ～Ⅱ 44 515.11±55.57Ⅲ～Ⅳ 41 545.10±55.35是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 - 21 484.24±41.64+64 543.98±53.95

2.3 血清MMP-2余癌組織MMP-2蛋白表達(dá)關(guān)聯(lián)性

MMP-2蛋白陽性表達(dá)受到腫瘤直徑、腫瘤類型、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等有關(guān)聯(lián)，詳情請(qǐng)見表3。

表3 非小細(xì)胞癌患者M(jìn)MP-2指標(biāo)與病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性（n）

2.4 血清MMP-2與癌組織表達(dá)關(guān)系

觀察組患者M(jìn)MP-2蛋白陽性表達(dá)群體，自身血清MMP-2指標(biāo)（560.36±45.04）ng/mL，顯著高于組內(nèi)陰性表達(dá)群體（490.71±46.27）ng/mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

在全球各種惡性腫瘤疾病當(dāng)中，肺癌無論是發(fā)病率還是致死率均居于首位，大部分的肺癌患者死因?yàn)槟[瘤轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等影響[6]，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜過程，需要考慮到多種步驟和因素，基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinases, MMPs）屬于細(xì)胞外蛋白水解酶，其作用在于能夠?qū)缀跛屑?xì)胞外基質(zhì)當(dāng)中的相關(guān)蛋白成分進(jìn)行降解。

肺癌在當(dāng)前臨床收治各類惡性腫瘤疾病中，其發(fā)病率、致死率均相對(duì)偏高，肺癌對(duì)患者的致死威脅大部分為腫瘤轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)等變化，腫瘤轉(zhuǎn)移涉及到復(fù)雜的生理變化，其中有多種步驟、因素影響，基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloprotei-nases, MMPs）為細(xì)胞外蛋白水解酶，能夠?qū)⒋蟛糠执嬖谟诩?xì)胞外基質(zhì)的蛋白成分降解。基質(zhì)金屬蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2）是其中的一個(gè)重要家庭成員，在基底膜降解、加快新生血管形成當(dāng)中扮演重要角色，在腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)以及遷移中也發(fā)揮著不可忽視的作用[7]。

在本次研究中通過不同檢查手段檢測(cè)MMP-2指標(biāo)于非小細(xì)胞癌患者中的血清還有癌組織表達(dá)關(guān)系，在所得數(shù)據(jù)當(dāng)中可知此類患者血清MMP-2數(shù)據(jù)顯著高于肺部良性病變?nèi)后w，在手術(shù)治療后指標(biāo)明顯下降且與對(duì)照組數(shù)據(jù)無顯著差異，提示了該指標(biāo)可作為判斷療效的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。兩種檢測(cè)所得數(shù)據(jù)基本一致。MMP-2蛋白表達(dá)受到了腫瘤體積、病理類型、腫瘤分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素影響，提示可將其作為評(píng)估腫瘤惡性進(jìn)展的重要標(biāo)志物[8]。

綜上所述，為非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行MMP-2檢測(cè)，在血清中與癌組織當(dāng)中蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)無顯著差異，可將MMP-2指標(biāo)作為判斷腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要指標(biāo)，為患者治療方案制定與調(diào)整做引導(dǎo)。