超高效液相色譜-質譜法（UPLC-MS）檢測7種合成甜味劑的方法的建立

□ 張作松 啟東市綜合檢驗檢測中心

甜味劑是能夠賦予食品甜味的物質的總稱，適量添加可使食品具有適口的感覺、良好的風味，又可保留新鮮的味道。甜味劑按其來源分為人工甜味劑和合成甜味劑。人工甜味劑主要是指一些具有甜味但不是糖類的化學物質，甜度一般比蔗糖高十倍至數百倍；其化學性質穩定，耐熱、耐酸堿，不易出現分解失效現象，不具有任何營養價值[1]。常見的人工甜味劑有糖精鈉、甜蜜素、安賽蜜、阿斯巴甜、紐甜、阿力甜、三氯蔗糖與糖精等。如果超量使用，則會危害人體健康，為此，國家對甜味劑的使用范圍及用量進行了嚴格規定。為確保合成甜味劑的合理使用，必須對添加種類及含量進行準確測定[2]。本文通過實驗建立了測定食品中7種甜味劑的超高效液相色譜-質譜法。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters Xevo TQ-S液相色譜質譜聯用儀；湖南赫西儀器裝備離心機，甲醇（HPLC純）；實驗室自制超純水；甲酸（色譜級），甲酸銨（分析純），乙腈（HPLC純）；安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、阿力甜、紐甜與三氯蔗糖（均≥98%）。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動相：A為0.1%（體積分數）甲酸-5 mmol/L甲酸銨水溶液，B為乙腈；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL，流動相的洗脫程序見表1。

表1 流動相的洗脫程序

1.3 質譜條件

離子源：ESI；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應監測掃描模式（MRM）,干燥氣溫度：500 ℃；氣體流速：1 000 L/Hr。

表2 七種甜味劑質譜參數和保留時間

1.4 樣品前處理

取3 g左右樣品于50 mL離心管中，加入20 mL甲醇-水（1∶1）超聲提取30 min，加入2 mL 10.6%的亞鐵氰化鉀和22%的乙酸鋅渦旋1 min混勻后，于10 000 r/min速率下離心20 min，上清液轉移至100 mL容量瓶中，重復提取一次，合并上清液，用甲醇-水（1∶1）定容至刻度線，過0.22 μm有機濾膜，供液相色譜-質譜儀器上機檢測。

2 結果與討論

2.1 流動相條件的選擇

參照SN/T3538-2013《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜一質譜/質譜法》檢測標準[3]，分別用純水、0.1%乙酸銨溶液和0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液作流動相水相，以甲醇和乙腈作為有機相進行試驗，最終確定流動相為0.1%甲酸-5 mmol/L甲酸銨溶液和乙腈。

2.2 標準曲線的建立與分析

以空白糕點樣品為基質制備基質空白標準溶液，7種甜味劑用空白標準溶液配制成系列標準濃度。圖1是七種甜味劑樣品的質譜圖，實現了7種樣品的同時檢測。將質譜檢出的峰面積與標準溶液濃度進行擬合計算出目標物的線性回歸方程、相關系數、線性范圍和檢出限，如表3所示。回收率試驗的加標濃度分別為1、5、10 mg/kg，每份樣品分別測定5次，平均回收率在78.3%～117.4%，相對標準偏差（RSD）在1.95至6.33。

圖1 7種合成添加劑的色譜圖

表3 7種合成甜味劑的線性回歸方程及相關系數

3 結論

本文通過液相色譜-質譜法檢測糕點中的甜味劑，參考SN/T3538-2013《出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》，并優化質譜和色譜條件，提高檢測效率，為甜味劑檢測提供一種高效、快捷的檢測方法。利用液相色譜-質譜聯用技術建立同時測定多組分甜味劑的方法將成為將來食品安全檢測技術的發展方向之一，確保檢測結果的準確性。