飲料中霉菌和酵母計數檢驗結果不確定度的評定

□ 傅德江 福建省產品質量檢驗研究院

測量不確定度是與測量結果相關聯的參數，正確評定測量不確定度對客觀分析測量結果有重要意義[1-3]。隨著實驗室認可和資質認定工作的開展，很多實驗室認識到了評定不確定度的重要性，并在日常實驗室中開展了這項工作，但微生物檢驗中不確定度評定在實驗室工作中的實際應用并不多。本文對飲料中霉菌和酵母計數檢驗結果進行不確定度評定。

1 材料與方法

1.1 材料

啤酒酵母ATCC 9763購于北京陸橋技術股份有限公司、孟加拉紅瓊脂培養基（批號170316）北京陸橋技術股份有限公司。

1.2 方法

GB 4789.15-2016《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》[4]、JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》[5]。

1.3 樣品制備

取啤酒酵母（ATCC 9763）新鮮培養物于滅菌生理鹽水中制成0.5麥氏濃度的溶液，稀釋1 000倍后制成約1×104CFU/mL的菌懸液，取該菌懸液1 mL加入500 mL已滅菌飲料中充分混勻后制成原始檢樣。

制作10個小樣：無菌操作分別吸取10 mL上述原始檢樣充分混勻后入10個無菌試管，作為小樣。

1.4 霉菌和酵母總數測定

以無菌操作方法吸取1 mL樣品，注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，充分振搖，制成1∶10的稀釋液；吸取1∶10的稀釋液1 mL注入盛有9 mL無菌生理鹽水的試管中，混勻制成1∶100稀釋液；按同法制備梯度稀釋液備用；用滅菌吸管取未稀釋的水樣和2～3個適宜稀釋度的水樣1 mL，分別注入滅菌平皿內，每個稀釋度做2個平皿對照。然后將冷卻至46 ℃左右的孟加拉紅瓊脂約20 mL注入平皿，并旋搖混勻，同時做培養基空白對照；待瓊脂凝固后，置（28±1） ℃培養箱內培養5 d，進行菌落計數；選擇菌落數在10～150平板計算平均數，以平均數乘以稀釋倍數作為檢測結果，每管均做2個平行。

2 不確定度來源分析

樣品稱樣引入的不確定度，樣品稀釋過程引入的不確定度為A類評定；

重復檢測產生的不確定度為B類評定。檢驗結果的不確定度具體來源見圖1。

圖1 檢驗結果的不確定度來源

3 不確定度的分量評定

3.1 樣品稱樣引入的不確定度

用500 mL量出式量筒量取225 mL稀釋液，制成1∶10的樣品勻液體。對于500 mL量筒，JJG196-2006中規定容器允差為±2.5 mL[6]，則量筒標準不確定度=1.443376。相對標準不確定度為ure（l1）=0.006 415。

3.2 樣品稀釋過程引入的不確定度

樣品10倍系列溶液的梯度稀釋采用1 mL和10 mL量出式分度吸量管進行。JJG196-2006常用玻璃量器規定，20 ℃時1 mL、10 mL分度吸量管的容量 允 差 為 ±0.015 mL、±0.1 mL[4]，取矩形分布，則它們的標準不確定=0.057735。相應地它相對標準不確定度=0.008660，

3.3 重復檢測產生的不確定度

同一樣品重復10次，將10次重復測量的結果列入表1中。

由于微生物測量結果分散性很大，其最大值與最小值之間可相差到1個數量級，因此不能直接利用測量數據做不確定度評估，而需要對數據做對數處理，結果見表1。

表1 數據處理過程

3.4 擴展不確定度U

根據置信概率p=0.95 和自由度v=10-1=9，由t分布表得到包含因子k=2.26。于是擴展不確定度為：U=2.26×0.037 970=0.085 812。

換算到x坐標，得飲料中霉菌和酵母含量x所在的區間為lgx=1.330 235±0.085 812，即：1.244 423≤lgx≤1.416 047，取反對數后可得18≤x≤26。

該樣霉菌和酵母總數平均值為21 CFU/mL，p=0.95，v=9，其霉菌和酵母含量范圍為18～26 CFU/mL。

4 結論

本論文依據 GB 4789.15-2016 《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母計數》，利用孟加拉紅瓊脂對飲料中的酵母進行檢測，對測定結果進行不確定度評定，給出不確定度。由于微生物檢測中，測量結果的發散性較大，不屬于正態分布，檢測結果必需轉換成對數，使其靠近正態分布，便于建立數學模型用于計算。在測定時，必須嚴格控制條件，由同一試驗人員進行操作，測試結果取對數，評定不確定度。結果顯示，飲料中霉菌和酵母菌計數的取值區間為1.330235±0.085812，該樣品中霉菌和酵母的含量范圍為18～26 CFU/mL。