液相色譜串聯質譜法檢測食品中的黃曲霉毒素分析

□ 谷 葉 黃和飛 昆明和合醫學檢驗所有限公司

AFT，即由黃曲霉與寄生曲霉等真菌代謝后形成的一種毒害性真菌霉素。AFT及其衍生物有20余種，其中B1、B2、G1與G2在自然界內廣泛分布，其基本結構均由一個呋喃環與一個香豆素組成，前者是毒素的基礎結構，后者和AFT的致癌性密切相關，且對前者的毒性有加強作用[1]。因為AFT對機體健康造成的危害較大，故而多個國家政府機關與有關組織陸續擬定了食品內AFT的檢測分離方法，和其他檢測方法相比，LC-MS/MS法分離能力強、靈敏度高，能實現對多種化合物的定性定量分析，本文主要用其檢測食品中4種AFT（B1、B2、G1與G2），具體如下。

選擇2014年1月-2016年12月 在我院收治的96例面神經炎病人,其中男性66例,女性30例,年齡在10-76歲之間。

再次，也是最為重要的原因是由于女性在分娩前后激素水平的變化，直接導致產后抑郁癥的發生。在妊娠期間，孕婦體內的雌激素和孕激素水平長時間處于較高水平，而雌激素具有多種神經調節功能，分娩后雌激素水平突然降低，影響了神經調節的功能，有可能導致情緒抑郁。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

從市面上采購花生、玉米、燕麥片等。制備AFT的B1、B2、G1與G2混合標準液（前兩者的質量濃度均為1 μg/mL，后兩者均為 0.3 μg/mL）。乙醇、甲醇均為色譜純，甲酸為分析純，超純水。

1.2 儀器和設備

選用6430三重四極桿液質聯用系統及相關配套設施檢測AFT，還有凈化柱、電子天平、超聲波清洗器與超純水儀等設施。

1.3 儀器參數

1.3.1 色譜條件

分別量取25 g試樣，將其依次放入到容積為250 mL的錐形瓶內，而后把100 mL乙腈-水溶液加入其中，連續快速攪拌3 min，將如上制得的混合液通過定性濾紙與Mycosep 226真菌毒素凈化柱，以獲得凈化液，提取適量通過0.22 μm濾膜，采集待測。

1.3.2 質譜條件

選Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×50 mm，1.8 μm）作為色譜柱；流動相為0.1%甲酸-甲醇（3∶2）；設定流速0.4 mL/min；柱體溫度35 ℃；進樣量為5 μL。

對各試樣反復進行5次進樣，檢測到各組分對應的峰面積，測算相對標準偏差（RSD），以評估方法的精密度。為檢測該方法的回收率，提取3份試樣，依次添加體積不同的標準液，測算出加標回收率。

表1 4種AFT的MRM掃描參數

1.4 處理試樣

（3）SD大鼠CRF模型制備：SD大鼠適應性飼養7 d，以10%水合氯醛溶液ip麻醉，常規消毒鋪巾，從右背部切口打開腹腔，靜脈夾夾住腎蒂后用高頻電刀切除2/3右腎，止血后復位腎臟（正常組以相同步驟打開腹腔，暴露腎臟后復位，避免牽拉腎臟）。2周后于第2次手術切除左側腎臟。造模4個月后，以10 mL/kg的給藥體積連續給藥6周（正常組和模型組給予相同體積的生理鹽水），并于實驗結束當天采集血液，分離血清，用試劑盒測定Cr、BUN含量。

1.5 線性范圍和檢測限

當甲醇和水相比例為3∶2時，4種組分于5 min內陸續出峰，取得了最佳的分離效果[2]。

1.6 精密度和回收率試驗

選取噴霧電離源作為離子源，基于正離子模式加以掃描；干燥氣流速、溫度依次為12 mL/min、345 ℃；霧化氣壓力為50 psi；毛細管電壓4 000 V；質量掃查范疇100～500 m/z。4種AFT的MRM掃描參數見表1。

（3）礦料級配設計。上面層采用AC—16型瀝青混合料，設計時考慮含砂量對混合料性能造成下降，故將設計級配沿規范要求中值適當上移，具體見表3。

2 結果和分析

把標準樣品液稀釋為數個不同濃度梯度，按濃度由低至高順序進樣5 μL，橫、縱坐標分別設定為進樣濃度、峰面積，進行線性回歸分析。

取用濃度存在差異的標準液，依照設定的色譜、質譜條件進樣，基于峰面積（y）與試樣含量（x）繪制標準曲線，獲得相應的線性方程與有關系數，并測算出檢出限與定量限。具體見表2。

表2 黃曲霉素的線性范圍、回歸方程、相關系數與檢出限

依照1.6方法開展精密度與回收率試驗，測算RSD，精密度檢測結果見表3[3]。

表3 黃曲霉素RSD測算情況統計

分析表2內的數據后，發現RSD均＜5.0%。進行回收率試驗，發現樣品的回收率均在80.0%～94.5%。綜合各種數據信息后，認為該檢測方法的精密度與回收率均較好。

3 討論

本實驗研究中建立了LC-MS/MS法檢測食品內AFT，使用甲醇和水等進行洗脫，于質譜正離子模式下進行監測，4種組分于5 min內整體分離，B1、B2、G1與G2的檢出限依次是0.11、0.009、0.012 μg/kg與 0.008 μg/kg，加標回收率均值為80.0～94.5%，RSD＜5.0%，均符合相關限量規范要求。LC-MS/MS檢測食品內AFT，有過程快速、靈敏度高、精確可靠等諸多優勢，值得推廣。