番石榴果、葉水提液體外抑菌效果的比較研究

趙天野

（吉林省農安縣萬順鄉畜牧獸醫站，吉林農安 130200）

番石榴（Psidium Guajave）屬于桃金娘科植物，為綠色灌木或者小喬木，俗稱為雞屎果，主要分布于熱帶和亞熱帶地區。我國南方以云南、廣西、四川、海南等地分布最為廣泛[1]。番石榴含有大量的槲皮素等黃酮類物質、揮發油、鞣質、齊墩果酸、熊果酸綠原酸、咖啡酸、山柰酚、鐵烏立克酸和山柰酚苷[2]。有報道稱番石榴葉精油中所含有的揮發性成分有鎮痛、鎮靜、抗菌等功能[3]。現代醫學研究發現，番石榴葉對于抵御病毒、延緩氧化、抵抗細菌、降低人體血糖有一定作用[4]。番石榴葉還具有令人愉悅、消除炎癥、止血、解決口渴、驅散蚊蟲和止癢止瀉等藥理作用[5]。本試驗主要對番石榴果、葉的抑菌效果進行比較研究。

1 材料與方法

1.1 藥品

1.1.1 藥材

番石榴果實和葉，購自吉林省長春市農安縣國醫大藥房，產地四川。

1.1.2 培養基

蛋白胨，北京奧博星生物技術有限責任公司；牛肉浸粉，北京奧博星生物技術有限責任公司；酵母浸粉，河南森漢生物科技有限責任公司；瓊脂粉，天津市光復細化工研究所；胰化蛋白胨，天津市光復細化工研究所；氫氧化鈉，滄州云港化工有限公司；氯化鈉，東莞市喬科化學有限公司；蒸餾水。

1.1.3 實驗菌種

大腸桿菌菌種、金黃色葡萄球菌菌種，農安縣動物疫病防控中心。

1.2 儀器

DHP-9052電熱恒溫培養箱，江蘇天翎；DDHZ-300空氣式恒溫振蕩器，上海和恒；DZKW-S-4數顯恒溫水浴鍋，上海一凱；BBS-DDC-A超凈工作臺，蘇州三星凈化；YX600W壓力蒸汽滅菌消毒鍋，上海三伸；DL-1電子萬用爐，富興電子；LG-08A萬能高速搖擺粉碎機，上海新諾儀器；DHG-9240A臺式恒溫電熱鼓風干燥箱，上海儀器儀表廠；FA1204B電子天平，上海天美天平儀器；打孔器等。

1.3 試驗方法

1.3.1 煎煮法提取番石榴果、葉

用粉碎機將番石榴果實和葉粉碎，各取40 g置于500 mL燒杯中，加入400 mL蒸餾水，于55 ℃水浴中加熱2 h后用紗布過濾，殘渣中再分別加入100 mL蒸餾水置于55 ℃水浴中加熱1 h，再次過濾，合并濾液，分別得到果實和葉水提取液，并濃縮至20 mL，得到提取原液，放于冰箱備用[6]。

1.3.2 藥敏片的制備

用打孔器將濾紙片打成直經為6 mm的小圓片若干，放入燒杯中并用多層報紙將瓶口包扎緊密。160 ℃條件下干熱滅菌1.5 h，在60 ℃條件下烘干備用。取上述濃縮后的提取液稀釋2倍、4倍、8倍成1.00、0.50、0.25 g/mL，各取4種濃度的提取液2 mL置于平皿中，把制備好的濾紙片在各濃度提取液中浸泡8 h，之后取出放置在培養皿中，在恒溫箱37 ℃條件下烘干24 h，并做好標記，置于冰箱中保存備用[7]。

1.3.3 大腸桿菌的接種培養

（1）制備LB液體培養基：稱取胰化蛋白胨10.0 g、酵母浸粉5.0 g、NaCl 110.0 g于1 L的大燒杯中，加入800 mL蒸餾水，用4 mol/L NaOH和0.1% HCl調節pH為7.0，加水定容至1 000 mL，放于高溫蒸汽滅菌鍋中設置溫度121 ℃，滅菌20 min，于4 ℃保存備用[8]。

（2）接種培養：將大腸桿菌菌種用接種環在酒精燈旁接種于LB液體培養基中，在溫度37 ℃、轉速160 r/min條件下進行培養12 h[9]，濃度約為5×107cfu/mL的菌量。

1.3.4 金黃色葡萄球菌的接種培養

（1）培養基制備：取15 g瓊脂置于1 000 mL燒杯中，加入蒸餾水至1 000 mL并加熱煮沸至瓊脂完全溶解，將5 g蛋白胨加入瓊脂中，并用玻璃棒攪拌至完全溶解，再加入1 g牛肉浸粉和2 g酵母浸粉，攪拌至完全溶解，用10%的NaOH調pH值至7～8，分裝，經121 ℃高壓滅菌 15 min[10]，備用。

（2）接種培養：在無菌操作臺上，在培養皿底部做好記號后，用接種槍取大腸桿菌培養液1 mL，涂于營養瓊脂培養皿上，將三角架涂菌器旋轉一周，使菌液均勻分布在培養皿上。用同樣的方法取金黃色葡萄球菌培養液，涂于營養瓊脂培養基上[11]。

1.3.5 貼藥敏片

用鑷子將不同濃度果實和葉的藥敏片放置在已接種細菌的營養瓊脂培養皿表面的4個區域，在4 ℃條件下預擴散4 h，于37 ℃下培養4 h[12]。

1.3.6 測量抑菌圈大小

取出培養皿，用游標卡尺在抑菌圈的不同方向測量2次，得到2組數據，計算平均值得抑菌圈直徑（D）。抑菌效果的判定標準：D＞19 mm為高度敏感；13 mm＜D≤19 mm為中度敏感；8 mm＜D≤13 mm為低度敏感；D＜8 mm為不敏感[13]。

2 結果與分析

2.1 番石榴果實和葉水提液的抑菌效果

由表1可以看出，番石榴葉的水提液及其2倍稀釋液對大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為16.03 mm、14.06 mm，對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別為15.04 mm、13.28 mm，表示番石榴葉提取液有比較強的抑菌效果，4倍液葉對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑分別是12.10 mm、9.06 mm，表明抑菌效果較弱。而番石榴果實的提取液對大腸桿菌及金黃色葡萄球菌抑菌圈分別為12.54 mm、12.02 mm，表明抑菌效果較弱，其余濃度時抑菌圈直徑都小于8 mm，表明幾乎沒有抑菌效果。

表1 番石榴果實和葉水提液的抑菌圈直徑

2.2 番石榴果實和葉水提物對細菌的敏感度

由表2可以看出，大腸桿菌及金黃色葡萄球菌對番石榴果實提取原液為低強度敏感；對2倍液不敏感，即耐藥；4倍液和8倍液沒有抑菌效果。大腸桿菌及金黃色葡萄球菌對番石榴葉提取原液和2倍液為中度敏感，對4倍液為低度敏感，而8倍液沒有抑菌效果。根據實驗數據分析，番石榴葉的水提液抑菌效果更明顯，濃度越高抑菌效果越好。

表2 番石榴果實和葉水提物對細菌的敏感度

黃艷等[14]采取不同溶劑對番石榴葉進行提取，不同提取物對豬大腸桿菌的抑菌效果差異不明顯,石油醚提取物對豬金黃色葡萄球菌的抑菌效果較好（0.195 mg/mL）。周濃等[15]采用超聲波輔助技術提取番石榴果實中多酚，并測其抑菌活性，結果顯示，番石榴多酚對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌具有抑制作用，最低抑菌濃度（MIC）分別為3.00 mg/mL、1.50 mg/mL、1.50 mg/mL。

3 結論

番石榴葉水提取液有較好的抑菌作用，水提取液的濃度越高，抑菌效果越顯著；且在相同濃度條件下，葉水提取液的抑菌效果較強于果實水提液。對番石榴葉和果實水提取液進行的體外抑菌效果研究中，存在一些欠缺，如受試菌較少，今后將擴大抑菌菌種的范圍，同時要進一步對其化學成分和影響因素進行研究，為新藥開發與鑒定提供依據。