四君子顆粒的制備及甘草苷含量測定

師晨迎，馮亞莉，翟廣玉，謝新年

（鄭州工業應用技術學院藥學與化學工程學院，河南新鄭 451100）

四君子湯最早出自宋代《太平惠民和劑局方》，該方由白術、茯苓、甘草、人參4種常用藥材組成。該藥方中，人參甘溫撫養脾胃，元氣大補為君藥；白術苦溫，燥濕健脾為臣藥；茯苓甘淡，健脾祛濕為佐藥；甘草性寒，健脾養胃為使藥。四藥相輔，共奏益氣健脾之功，主治脾胃虛弱，說話輕微無力，四肢乏力，脈弱沒勁，食欲不佳，偶伴寒證的患者[1]。臨床主要用于治療一些胃腸疾病，如消化性急性潰瘍[2]、慢性胃炎和腹瀉、急性肝損傷和慢性肝損傷以及小兒食欲不振等[3]。原方中，君藥人參常由黨參代替，若以黨參為君藥，則四君子湯的功效側重于補中益氣，生津養血[4]。

幾千年來，中藥的應用以湯劑為主，但湯劑的使用非常不便，需要長時間煎煮，服用劑量大，且大多數湯劑氣味大、味道苦。中藥顆粒劑很好地克服了湯劑的這些缺點，而且攜帶方便、起效快。本文研究了四君子顆粒的制備工藝，并對四君子顆粒的有效成分之一甘草苷進行了含量測定，具有重要的現實意義。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

BK-1000B超聲波清洗機，濟南巴克超聲波科技有限公司；HH-2數顯恒溫水浴鍋，常州普天儀器制造有限公司金壇市晶波實驗儀器廠；SHSL調溫電熱套，上海樹立儀器儀表有限公司；RE-52旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠；ZF-6三用紫外線分析儀，上海嘉鵬科技公司；HPLC-1206高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司。

黨參、白術（炒）、茯苓、甘草（炙）購于新鄭市學院路店張仲景大藥房，經藥學與化學工程學院謝新年教授鑒定為合格藥材；甘草酸銨對照品（貨號G810490），購于上海麥克林生化科技有限公司；乙腈和甲醇為色譜純，其他試劑和溶劑均為分析純。

1.2 提取方法

1.2.1 水煎煮提取工藝

取黨參12 g、白術9 g、茯苓9 g、甘草6 g，加15倍量蒸餾水浸泡1 h。大火煮沸后小火煎煮30 min，同法煎煮3次，合并濾液。抽濾、濃縮藥液，然后加入3倍量的無水乙醇，慢加快攪，冷藏靜置24 h后抽濾。濾液旋轉蒸發至粘稠狀，轉移至小燒杯內，在水浴鍋內濃縮。濾液濃縮至浸膏狀態，冷卻后收集干膏，在研缽內研成干膏粉備用。加入適當比例輔料(黨參、茯苓、 白術、甘草等），以水為潤濕劑，迅速攪拌制顆粒，晾干[5]。

1.2.2 超聲提取工藝

將藥材用粉碎機打粉，加入15倍量蒸餾水，65 ℃下超聲提取60 min。抽濾后收集濾液，加入濾液體積3倍的無水乙醇，冷藏靜置24 h。再次抽濾，濾液使用旋轉蒸發儀濃縮至黏稠狀，轉移至小燒杯內，然后使用恒溫水浴鍋，將濾液濃縮至干膏狀態，進行收集。在研缽里研至成干膏粉。按比例加入輔料，用水作為潤濕劑，快速攪拌使之成粒，干燥即得[6]。

1.3 TLC鑒別

按照2015版《中國藥典》薄層色譜法實驗制備單方甘草和全方供試品溶液，吸取單方甘草溶液、全方四君子顆粒供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲酸-乙酸乙酯-水-冰醋酸（2∶16∶1∶1）為展開劑，置于紫外光（365 nm）下檢視。

1.4 甘草苷含量測定

1.4.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：ZORBAXSB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈- 0.05%磷酸水溶液-甲醇；檢測波長為237 nm；柱溫為正常室溫；流量為1.0 mL/min；進樣量為10 μL。

1.4.2 溶液的制備

對照品溶液：精密稱取甘草苷對照品1.00 mg，取適量甲醇超聲溶解，轉移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲混勻，得到濃度為1 mg/mL甘草苷對照品溶液。

供試品溶液：精密稱取四君子顆粒1.00 mg，取適量甲醇超聲溶解，轉移至1 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲混勻，得到濃度為1 mg/mL的供試品溶液。

1.4.3 標準曲線的繪制

精密吸取甘草苷對照品溶液,依次稀釋至濃度為0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL和0.08 mg/mL。分別準確吸取上述對照品溶液10 μL，按相同的色譜條件進行測定，以濃度和峰面積作為X、Y坐標繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 兩種工藝結果對比

如表1所示，對比水煎煮提取工藝和超聲提取工藝兩種方法制備的顆粒可以發現，超聲提取工藝所制備顆粒的成型率和溶化率均優于水煎煮提取工藝所制備的顆粒。

表1 兩種工藝制備的顆粒的成型率、溶化率比較

2.2 TLC鑒別結果

如圖1所示，A為甘草單方供試品，B為四君子顆粒供試品。經過對比可以看出，四君子顆粒供試品在與甘草單方供試品相應的位置上，顯示顏色相同的熒光斑點。

圖1 TLC測定結果

2.3 含量測定

2.3.1 甘草苷標準曲線

甘草苷標準曲線的回歸方程為Y=19 767X-16.087（R2=0.992 7），表明甘草苷在 0.01～0.08 mg/mL線性關系良好[7]。

2.3.2 樣品中甘草苷含量測定

分別取水煎煮提取法和超聲提取法制備的四君子顆粒供試品各5批，按照測定甘草苷標準品的相同條件進樣并測定樣品峰面積，代入線性回歸方程計算樣品對應的濃度，進而得到甘草苷的含量。由表2可知，水煎煮提取工藝中甘草苷的平均含量為0.1 348 mg/g，RSD為1.29%；超聲提取工藝中甘草苷的平均含量為0.1 537 mg/g，RSD為1.24%。所以，超聲提取工藝制備所得5個批次的四君子顆粒中甘草苷含量大于水提工藝制備所得5個批次的四君子顆粒。

表2 甘草苷的含量測定結果

3 結論

超聲提取工藝所制備顆粒的成型率和溶化率均優于水煎煮提取工藝所制備的顆粒，該法所制備的四君子顆粒有效成分甘草苷的平均含量為0.153 7 mg/g，RSD為1.24%。本實驗為四君子顆粒質量標準的建立提供了一定的科學依據。